一种小分子核桃肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种小分子核桃肽及其制备方法，所述制备方法依次包括以下步骤：蛋白提取、两次酶解、过滤、纯化浓缩和干燥；所述两次酶解过程为：向核桃蛋白提取液中加入相当于核桃蛋白质量1％-3％的碱性蛋白酶进行一次酶解；一次酶解结束后将一次酶解液进行灭酶处理；将经过灭酶处理的一次酶解液降温后加入相当于核桃蛋白质量1％-3％的风味蛋白酶、中性蛋白酶或木瓜蛋白酶中的一种或任意几种蛋白酶进行二次酶解。本发明专利技术采用两次酶解法，由于核桃蛋白结构的特殊性，用一种酶酶解不能充分对核桃蛋白进行酶解，故采用两次酶解法，以确保每一种酶都可以在自己最适合的条件下发挥酶解作用，这样得到的核桃肽含量较高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物活性物质提取领域，具体涉及。
技术介绍
核桃又叫胡桃、羌桃、万岁子等，系胡桃科核桃属植物。山核桃中含油量可达 60% -70%，其中不饱和脂肪酸含量在90%以上，山核桃蛋白质含量为14% -17%，可消化 率达87. 2%。但目前理想的山核桃保健食品在市场上并不多见，除了将其制成罐头、月饼 馅、核桃粉、核桃乳、核桃油外，其他用途的开发尚属空白，特别是深加工产品较少。核桃在 日常的生活和工业生产上的应用也越来越广泛，但是面临的问题也是愈来愈明显了。现在， 我国核桃油生产厂家已达数十家，大量的脱脂核桃渣被作为饲料和肥料或丢弃，废物排放 污染环境，其附加值较低。 脱脂核桃渣是核桃榨油后的副产物，约含30% -50%的蛋白质。核桃蛋白主要 由白蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白四类蛋白质构成，分别占核桃蛋白总量的6. 81%、 17. 57%、5. 33%和70. 11%。近年来科学研究发现，人类摄取蛋白质经消化酶作用后，并非 主要以氨基酸的形式吸收，而是以肽的形式吸收，一些肽不仅能提供人体生长、发育所需的 营养物质，同时具有多种生理功能，如改善和提高矿物质运输和吸收、抗菌和病毒、提高免 疫力、抗氧化、降胆固醇、抗癌作用，清除自由基抗衰老等作用。 国内外大量研究表明，核桃蛋白经过生物酶解制得核桃肽具有提高免疫力、抗氧 化活性以及抗癌等作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的问题，提供了一种小分子核 桃肽的制备方法。 本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种小分子核桃肽的制备方法，依次 包括以下步骤：蛋白提取、两次酶解、过滤、纯化浓缩和干燥； 所述两次酶解过程具体是：向蛋白提取过程提取的核桃蛋白提取液中加入相当于 核桃蛋白质量1 % -3%的碱性蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为30°C_60°C，一次酶解 反应pH值为8-9, 一次酶解时间为3h_6h; -次酶解结束后，对一次酶解液进行灭酶处理； 将经过灭酶处理的一次酶解液降温，并加入相当于核桃蛋白质量1% -3%的风味 蛋白酶、中性蛋白酶或木瓜蛋白酶中的一种或任意几种混合的蛋白酶进行二次酶解，二次 酶解温度为40°C-60°C，二次酶解反应pH值为6-7,二次酶解时间为3h-6h; 二次酶解结束后，对二次酶解液进行灭酶处理。 本专利技术的有益效果是：本专利技术采用两次酶解法，由于核桃蛋白结构的特殊性，用一 种酶酶解不能充分对核桃蛋白进行酶解，故采用两次酶解法，以确保每一种酶都可以在自 己最适合的条件下发挥酶解作用，这样得到的核桃肽蛋含量较高。 在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。 进一步，所述蛋白提取的过程为：将核桃进行脱脂处理，得到脱脂核桃渣，将脱脂 核桃渣粉碎至40目-60目后，加入相当于核桃渣质量5倍-8倍的去离子水，加碱调节pH 至8. 5-9,浸泡lh-3h后，离心去除下层沉淀；加酸调节离心液的pH至4-4. 5,静置lh-3h后 离心分离，取下层沉淀并水洗至中性，得到核桃蛋白提取液。 采用上述进一步方案的有益效果是：本专利技术方法充分利用桃核榨油后的副产 品-脱脂核桃渣来制备小分子肽，成本低廉，采用碱溶酸沉方法提取核桃蛋白，提取率大于 85%〇 进一步，所述调节pH加入的碱为碳酸氢钠溶液或氢氧化钠溶液，所述调节pH加入 的酸为柠檬酸溶液或冰醋酸溶液。 进一步，所述过滤过程为：向经过两次酶解的酶解液中加入活性碳，并升温至 l〇〇°C，保持5min-10min，然后降温至70°C_80°C后静置，以去除酶解液中的颜色和异味。 进一步，所述活性碳的加入量为核桃蛋白质量的2% -4%，静置时间为30min-2h。 进一步，所述纯化浓缩过程为：将经过过滤的核桃肽溶液离心除去固体残渣，将得 到的清液用分子量为1000道尔顿-5000道尔顿的超滤膜过滤去除清液中的大分子杂质，再 用分子量为200道尔顿的纳滤膜去除无机盐和小分子杂质，将过滤后的清液浓缩至固形物 含量为20% -30%，即得到小分子核桃肽溶液。 采用上述进一步方案的有益效果是：采用离心协同多级膜分离系统纯化核桃肽， 除杂、除盐和浓缩效果好，低温纳滤浓缩保证了产品的活性，同时产品含盐量低，适合规模 化工业生产。 进一步，所述超滤膜的膜压为0. 5MPa-lMPa，超滤温度为25°C-40°c;所述纳滤膜 的膜压为lMPa-2MPa，纳滤温度为25°C-40°C。 进一步，所述干燥过程为：将纯化浓缩后的小分子核桃肽溶液进行喷雾干燥，喷雾 干燥的出风温度为70°C-90°C，进风温度为140°C-180°C，干燥后即得到小分子核桃肽粉。 进一步，所述灭酶处理过程为：将一次酶解液或二次酶解液升温至80°C-85°C，恒 温10min-20min进行灭酶处理。 采用上述方法即得到本专利技术所述的一种小分子核桃肽粉，所述小分子核桃肽为平 均分子量小于1000道尔顿的低聚肽，颜色为白色或淡黄色。【具体实施方式】 结合以下实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术， 并非用于限定本专利技术的范围。 实施例1 本实施例的一种小分子核桃肽的制备方法，包括以下步骤： 1)蛋白提取：蛋白提取的过程为将核桃进行脱脂处理，得到脱脂核桃渣，将脱脂 核桃渣粉碎至40目后，加入核桃渣质量5倍的去离子水，加入碳酸氢钠溶液或氢氧化钠溶 液调节pH至9,浸泡2h后，用离心机去除下层沉淀；加入柠檬酸溶液或冰醋酸溶液调节离 心液的PH至4. 2,静置3h后离心分离，取下层沉淀并水洗至中性，得到核桃蛋白提取液，采 用波美计或凯氏定氮法对核桃蛋白提取液中的核桃蛋白质量进行检测。本实施例充分利用 桃核榨油后的副产品一一脱脂核桃渣来制备小分子肽，成本低廉，采用碱溶酸沉方法提取 核桃蛋白，提取率大于85% ;本实施例的核桃原料优选采用山核桃。 2)两次酶解：两次酶解过程为向核桃蛋白提取液中加入相当于核桃蛋白质量1% 的碱性蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为50°C，一次酶解pH值为8. 5, 一次酶解时间为 3h；-次酶解结束后将一次酶解液升温至85°C，恒温IOmin进行灭酶处理； 将经过灭酶处理的一次酶解液降温至20°C，并加入相当于核桃蛋白质量1%的中 性蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为45°C，二次酶解反应pH值为7,二次酶解时间为 3h； 二次酶解结束后将二次酶解液升温至85°C，恒温20min进行灭酶处理。 本实施例采用两次酶法，由于核桃蛋白结构的特殊性，用一种酶或一次酶解不能 充分对核桃蛋白进行酶解，故采用多种复合酶和两次酶解法，以确保每一种酶都可以在自 己最适合的条件下发挥酶解作用，这样得到的核桃肽蛋含量较高。 3)过滤：过滤过程为向经过两次酶解的酶解液中加入活性碳，活性碳的加入量为 核桃蛋白质量的2%，并升温至KKTC，保持5min，然后降温至80°C后静置2h，以去除酶解液 中的颜色和异味。 4)纯化浓缩：将经过过滤的核桃肽溶液离心除去固体残渣，将得到的清液用分子 量为3500道尔顿的超滤膜过滤去除清液中的大分子杂质，超滤膜的膜压为0. 6MPa，超滤温 度为30°C;再用分子量为200道尔顿的纳滤膜去除无机盐和小分子杂质，纳滤膜的膜压为 I. 5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种小分子核桃肽的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：蛋白提取、两次酶解、过滤、纯化浓缩和干燥；所述两次酶解过程具体是：向蛋白提取过程提取的核桃蛋白提取液中加入相当于核桃蛋白质量1％‑3％的碱性蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为30℃‑60℃，一次酶解反应pH值为8‑9，一次酶解时间为3h‑6h；一次酶解结束后，对一次酶解液进行灭酶处理；将经过灭酶处理的一次酶解液降温，并加入相当于核桃蛋白质量1％‑3％的风味蛋白酶、中性蛋白酶或木瓜蛋白酶中的一种或任意几种混合的蛋白酶进行二次酶解，二次酶解温度为40℃‑60℃，二次酶解反应pH值为6‑7，二次酶解时间为3h‑6h；二次酶解结束后，对二次酶解液进行灭酶处理。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李俊伟，
申请(专利权)人：北京天肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11