病毒灭活的生物混合物制造技术

本发明专利技术涉及一种病毒灭活的生物液体或干燥混合物及其制备。主要地，本发明专利技术涉及但不限于源自血小板源的混合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
-般来将，本专利技术涉及病毒灭活的生物液体或干燥混合物，并且涉及其制备。主要 地，本专利技术涉及但不限于病毒灭活的血小板提取物及其制备。
技术介绍
血小板是在止血和愈合中发挥基础作用的小的、形状不规则的无核细胞。血小板 包含完整的预合成蛋白阵列，其中包括信号蛋白、细胞骨架蛋白、膜蛋白和调节蛋白。它们 参与损伤部位处的组织再生和愈合过程的关键阶段中，这主要是由于包含大量生物活性分 子（包括生长因子（GF)、细胞因子和趋化因子）的血小板颗粒内容物。 诸如血小板衍生生长因子（PDGF)、转化生长因子（TGF)、碱性成纤维细胞生长因 子（bFGF)、血管内皮生长因子（VEGF)之类的血小板生长因子在伤口愈合级联的以下全部 阶段中起关键作用：炎症、增殖和重塑阶段。 研宄已表明，血小板衍生的生长因子刺激血管生成、有丝分裂发生、细胞增殖、中 性粒细胞和巨噬细胞、胶原合成、伤口收缩、细胞外基质合成、上皮形成和趋化作用。 血小板通常通过输注使用来例如促进止血。最近，血小板越来越多地以富血 小板血浆（PRP)的形式使用，其也称为PRP凝胶、血小板凝胶、PRP凝块等。通常，PRP 是由在有限体积的血浆中浓缩的自体血小板构成的间接体内制剂（Lacci KM，Dardik A.Platelet-rich plasma ：support for its use in wound healing.Yale J Biol Med. 2010 年 3 月；83 (I) :1-9)。 对于局部施用，PRP通常通过添加凝血酶和/或CaCl2，从而通过凝血酶（内源性 或外源性的）与纤维蛋白原之间的相互作用形成纤维蛋白凝胶而活化。活化时，血小板发 生活性脱颗粒作用，并释放出各种调节剂，包括GF (Lacci KM，Dardik A，2010)。PRP的注射 用途目前构成了小规模但快速成长的细分市场。将PRP用于软和硬组织填充的基本原理是 其可能增强不愈性损伤中的组织再生、加速伤口成熟、血管形成和上皮形成、减少疤痕形成 以及减少术后并发症和发病率（Lacci KM，Dardik A，2010)。 连同各种细胞类型使用活化的PRP的研宄已表明从PRP释放的因子例如 生长因子可诱导细胞增殖。此外，据发现， 在与胎牛血清支持的水平相当或更高的水平下，活化的PRP支持体外细胞生长并维持多个 目标细胞的生存能力，所述目标细胞包括骨髓瘤、杂交瘤、肝细胞、成纤维细胞和上皮细胞 (Johansson等人，Platelet lysate ：a replacement for fetal bovine serum in animal cell culture? Cytotechnology. 2003 年 7 月；42 (2) :67_74)〇 PRP及释放的生长因子目前用于多种组织再生手术，主要是骨科和牙科手术 (Nurden 等人，Platelets and wound healing. Front Biosci.2008 年 5 月 1 日；13 : 3532-48)。在骨科手术中，PRP主要用于膝关节成形术、腰椎融合和椎间盘退变（见Nurden 等人2008年的综述）。牙科学和颁面外科学PRP应用主要包括钛种植体的巩固、上颁窦提升 和骨重塑（见Nurden等人2008年的综述）。PRP还越来越多地用于肌腱和韧带修复、面部 整形和重建手术、慢性皮肤伤口愈合、眼科学、面神经再生以及心脏和减肥手术（见Nurden 等人2008年的综述）。 然而，自体PRP及释放因子的当前应用的主要缺点在于缺乏标准化。值得注意 的是，可以商购获得参数，诸如制备时间、血小板收率和采集效率，不同的用于制备PRP的 不同人工、半自动和全自动系统（Mazzucco等人，Not every PRP-gel is born equal. Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations :Fibrinet，RegenPRP-Kit，Plateltex and one manual procedure. Vox Sang. 2009 年 8 月；97 (2) :110-8)〇 另一个重要的变量是用于血小板活化的技术，其可影响颗粒释放效率和分泌的GF的量（Rozman P，Bolta Z，2007)。此 外，由于血小板对机械应力和周围环境的变化非常敏感，因此，它们可在预期活化步骤之 前，在加工过程中活化并释放GF(Mazzucco等人，2009)。这种不受控制的活化可进一步增 加在使用不同PRP制备系统时最终产品组成的变化。另外，自体PRP制剂的一个主要固有 弱点在于血小板GF含量在个体中不同，并因此可导致次最佳的结果。最后，当处理自体PRP 时，应考虑专用设备、一次性PRP加工试剂盒以及对专门人才的需要所造成的经济负担。
技术介绍
包括 Su 等人"A virally inactivated functional growth factor preparation from human platelet concentrates" · Vox Sang. 2009 年 8 月；97 (2)： 119-128 ；Burnouf 等人"A novel virally inactivated human platelet lysate preparation rich in TGF-beta，EGF and IGF，and depleted of PDGF and VEGF". Biotechnol Appl Biochem. 2010 年 8 月 6 日；56 (4) :151-60 ;和美国专利公开 US 2012-0156306。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术涉及一种用于制备病毒安全生物液体混合物的方法，所述方 法包括以下步骤：提供生物液体混合物；进行溶剂/洗涤剂（S/D)病毒灭活处理；使经S/D 处理的混合物与两亲性聚合物接触；通过疏水作用色谱（HIC)和/或通过油提取移除S/D ; 收集包含来自HIC的流过级分和/或来自油提取的液体级分的材料；以及使材料经受至少 再一次正交病毒灭活处理。 在本专利技术的一个实施例中，两亲性聚合物为无毒的。 然而，在本专利技术的另一个实施例中，两亲性聚合物为烃基表面活性剂。 然而，在本专利技术的另一个实施例中，两亲性聚合物具有约3. 5千道尔至小于约40 千道尔顿范围内的平均分子量。 在本专利技术的一个实施例中，平均分子量为约30千道尔顿。 然而，在本专利技术的另一个实施例中，烃基表面活性剂为聚乙烯吡咯烷酮（PVP)。 在本专利技术的一个实施例中，PVP具有约30千道尔顿（kDa)的平均分子量。 在本专利技术的一个实施例中，HIC包括以下步骤：将经S/D处理的和聚合物接触的混 合物上样到HIC ;利用包含有机溶剂和/或盐的溶液进行洗涤；以及收集经洗涤的级分。 在本专利技术的一个实施例中，有机溶剂为乙醇。 在本专利技术的一个实施例中，盐为氯化钠。 在本专利技术的另一个实施例中，所述至少再一次正交病毒灭活处理包括热灭活。 在本专利技术的一个实施例中，所述方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于从生物源制备病毒安全生物液体混合物组合物的方法，所述方法包括以下步骤：提供所述源；提供两亲性聚合物；利用溶剂洗涤剂(S/D)处理所述源以允许病毒灭活，并且利用所述两亲性聚合物处理所述源；通过使经处理的源与疏水作用色谱(HIC)树脂接触来移除所述S/D；以及收集包含来自HIC的未结合级分的材料；其中所述方法包括至少再一次正交病毒灭活处理，从而获得所述病毒安全生物液体混合物组合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L维斯曼，I波多勒，T拜克坦南鲍姆，I努尔，
申请(专利权)人：奥姆里克斯生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL