本实用新型专利技术公开了一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫，装有α-MEM培养基的容器，装有UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器，衬垫上分别放置装有α-MEM培养基的容器，装有的UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器。试剂盒能够提供干细胞完整平衡和自然的生长环境，不含血清不含其它动物来源蛋白质，不需额外添加太牛血清或重组生长因子经实验证实，5%UltraGRO搭配α-MEM培养基即可获得与20%FBS相同的细胞生长速度并仍维持干细胞的特性与分化能力。
【技术实现步骤摘要】
本技术涉及试剂盒，特别是涉及一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的 试剂盒。
技术介绍
间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSCs)具有多向分化特性、免疫调节作 用及体外分离培养扩增操作简便，因此国内外多家单位均开展了MSC临床试验，以预防和 治疗异基因骨髓移植后移植物抗宿主病，修复骨和软骨损伤，治疗心肌梗塞和肝脏损伤等 多种疾病. 部分实验室都还在用血清来培养干细胞，但是随着血源的减、血清价格的不断上 涨、批次间差异以及伦理安全型问题等，已经有很多实验室用无血清培养基培养间充质，但 是考虑到研发成本以及培养细胞实验结果的有效性，还是有很多弊端。
技术实现思路
为了克服上述技术不足，本技术提供了一种替代血清并能高效培养间充质干 细胞的试剂盒。 本技术所采用的技术方案是：一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的 试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫，装有a-MEM培养基的容器，装有UltraGRO营养添 加物的容器，装有H印arine的容器.，衬垫上分别放置装有a-MEM培养基的容器，装有的 UltraGRO营养添加物的容器，装有Ifeparine的容器。 所述的一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于所述的容 器为管、或瓶。 -种能够完全替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒的应用，其特征在于 按步骤实现：A.UltraGRO营养添加物室温解冻；B.按照所述的的试剂盒，配置完全培养基：UltraGRO营养添加物加入到a-MEM培 养基中，并加入Heparine添加物，配置成完全培养基； C.根据干细胞临床需要，进行实验； 本技术的有意效果是，试剂盒能够提供干细胞完整平衡和自然的生长环境， 不含血清不含其它动物来源蛋白质，不需额外添加太牛血清或重组生长因子。经实验证实， 5%UltraGRO搭配a-MEM培养基即可获得与20%FBS相同的细胞生长速度并仍维持干细 胞的特性与分化能力。【附图说明】： 图1.技术试剂盒培养人脐带间充质干细胞与10%胎牛血清、20%胎牛血清 培养人脐带间充质干细胞的生长倍增的对比图 图2.为本技术的示意图，其中盒体1，衬垫2,装有a-MEM培养基的容器3,装 有的UltraGRO营养添加物4的容器，装有Ifeparine添加物的容器5,冰袋6。【附图说明】 图1为采用本技术的试剂盒与10与10%、20%FBS培养人脐带间充质培养细 胞的比较。 图2为本技术示意图。【具体实施方式】 下面结合附图对本技术进一步说明。 本技术中的〇-|^11培养基，瓜壮&61?0营养添加物，他口 &1^116添加物购自江苏 普诺生生物科技有限公司。 实施例1 一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体1，衬 垫2,装有a-MEM培养基的EP管3,装有UltraGRO营养添加物的EP管4,装有Ifeparine的EP管5,衬垫上分别放置装有a-MEM培养基的EP管3,装有的UltraGRO营养添加物的EP 管4,装有Heparine的EP管5。 实施例2试剂盒培养人脐带间充质与10%、20%胎牛血清配置的培养基培养人 脐带间充质的生长倍增的对比 1)试剂盒完全培养基的配置：将UltraGRO和Ifeparine加入到a-MEM培养基中， 配置成含5%UltraGRO营养添加物以及2IU/mlH印arine添加物的完全培养基； 含10%和20%胎牛血清的完全培养基的配置方法：补充。 2)以3,000Cells/Cm2细胞密度分别接种于试剂盒完全培养基、10%胎牛血清、 20%胎牛血清的完全培养基的六孔培养盘中，放置于37°C，5%C02细胞培养箱中静置培 养。 3)每2到3天以IXPBS清洗，更换培养基培养。 4)当细胞生长密度达70% -90%，以Trypsin作用后收集进行细胞总数计算。（此 步骤为P1数据） 5)再将细胞以3,OOOcells/cm2细胞密度分别接种于试剂盒完全培养基、10%胎牛 血清、20%胎牛血清的完全培养基的新六孔培养盘中，放置于37°C，5%C02细胞培养箱中 静置培养。6)重复步骤3.到步骤6.，依序取得P2到P5细胞总数。 累积细胞总数（Cumulativetotalcellnumber) 1.细胞稀释倍数=(继代时细胞总数/3104或接种的细胞数目）前一次的细胞稀 释倍数。（P1的细胞稀释倍数为1) 2.细胞数目细胞稀释倍数=累积细胞总数。细胞倍增时间计算（Doublingtime)N1 :起始细胞数N2 :继代时的细胞总数H:培养时间（小时）累积分裂次数（Cumulativepopulationdoublings)Ni:起始细胞数Nf:继代时的细胞总数In:自然对数 结果：如图1所示，试剂提取培养间充质干细胞的效果显著高于用10%FBS培养 的效果，并且也略高于20%FBS培养的效果。【主权项】1. 一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫， 装有a -MEM培养基的容器，装有UltraGRO营养添加物的容器，装有H印arine的容器.， 衬垫上分别放置装有a-MEM培养基的容器，装有的UltraGRO营养添加物的容器，装有 Heparine的容器。2. 根据权利要求1所述的一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒,其特征 在于所述的容器为管、或瓶。【专利摘要】本技术公开了一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫，装有α-MEM培养基的容器，装有UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器，衬垫上分别放置装有α-MEM培养基的容器，装有的UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器。试剂盒能够提供干细胞完整平衡和自然的生长环境，不含血清不含其它动物来源蛋白质，不需额外添加太牛血清或重组生长因子经实验证实，5%UltraGRO搭配α-MEM培养基即可获得与20%FBS相同的细胞生长速度并仍维持干细胞的特性与分化能力。【IPC分类】C12M3/00, C12N5/0775【公开号】CN204690014【申请号】CN201520348983【专利技术人】顾宇春, 张军华, 夏琎 【申请人】江苏普诺生生物科技有限公司【公开日】2015年10月7日【申请日】2015年5月26日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种替代血清并能高效培养间充质干细胞的试剂盒，其特征在于：包括盒体，衬垫，装有α‑MEM培养基的容器，装有UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器.，衬垫上分别放置装有α‑MEM培养基的容器，装有的UltraGRO营养添加物的容器，装有Heparine的容器。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：顾宇春，张军华，夏琎，
申请(专利权)人：江苏普诺生生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32
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