组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及医学领域，特别涉及组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法。该组合物包括DMEM/F12基础培养基、DMSO、右旋糖酐40、白蛋白和红细胞保存液Fetuin。本发明专利技术的红细胞无血清冻存液不含胎牛血清，排除了动物源性病原体的污染，并且明显提高了红细胞复苏后的活力。

【技术实现步骤摘要】
组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法
本专利技术涉及医学领域，特别涉及组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法。
技术介绍
红细胞也称红血球，在常规化验英文常缩写成RBC，是血液中数量最多的一种血细胞，同时也是脊椎动物体内通过血液运送氧气的最主要的媒介，同时还具有免疫功能。哺乳动物成熟的红细胞是无核的，这意味着它们失去了DNA。红细胞含有血红素(hemoglobin)，其具有缓冲的作用。血红素十分活跃，它既能和氧结合在一起，也能和二氧化碳结合。因此，其主要工作为运输氧和二氧化碳。红细胞的功能是运输氧，二氧化碳，电解质，葡萄糖以及氨基酸这些人体新陈代谢所必须的物质。此外还在酸碱平衡中起一定的缓冲作用。这两项功能都是通过红细胞中的血红蛋白来实现的。红细胞通过血红蛋白运送氧气，红细胞的90％由血红蛋白组成。血红蛋白是一种红细胞相关的化合物肌红蛋白，在肌肉细胞中存储氧气。血红蛋白(Hb)由珠蛋白和亚铁血红素结合而成。血液呈现红色就是因为其中含有亚铁血红素的缘故。它可以在肺部或腮部临时与氧气分子结合，该分子中的Fe2+在氧分压高时，与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)；在氧分压低时，又与氧解离，身体的组织中释放出氧气，成为还原血红蛋白，由此实现运输氧的功能。血红蛋白也可以运送由机体产生的二氧化碳(不到氧气总量的2％，更多的二氧化碳由血浆解决)。血红蛋白中Fe2+如氧化成Fe3+，称高铁血红蛋白，则丧失携带氧气的能力。血细胞的长期保存有着重要的临床意义及战略意义，如成份输血、自体输血、稀有血液的保存、战争状态及远航备血等。近年来，红细胞超低温储存越来越受到重视。但目前红细胞储存仍然采用传统的冻存液配方，如胎牛血清联合培养基，而红细胞膜比普通的细胞更脆，更容易受到超低温的损害，故改良冻存液配方，是提高红细胞冻存的关键环节。此外，传统的冻存液均含有胎牛血清(FBS)，而FBS源于动物，可能含有动物源性病原体，这降低了冻存的红细胞在临床上应用的安全性，为此，急需改进冻存液配方，去除FBS。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法。本专利技术的目的是提供一种不含FBS的冻存液配方，在提高安全性的同时，亦提高红细胞冻存的效果。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种组合物，包括DMEM/F12基础培养基、DMSO、右旋糖酐40、白蛋白和红细胞保存液Fetuin。Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物包括：DMEM/F12基础培养基在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物包括：DMEM/F12基础培养基在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物包括：DMEM/F12基础培养基在本专利技术的一些具体实施方案中，所述DMEM/F12基础培养基在所述组合物中的终浓度为70～93％。本专利技术还提供了所述组合物在制备红细胞冻存剂中的应用。本专利技术还提供了一种红细胞冻存剂，包括所述组合物。在本专利技术的一些具体实施方案中，红细胞冻存剂为红细胞冻存液。本专利技术还提供了一种所述红细胞冻存剂的制备方法，取所述DMSO、所述右旋糖酐40、所述白蛋白和所述红细胞保存液Fetuin溶于所述DMEM/F12基础培养基。在本专利技术的一些具体实施方案中，冻存液的制备方法具体为：在69.33mlDMEM/F12基础培养基中加入16.67ml右旋糖酐40注射液、5ml白蛋白注射液、1mlFetuin储存液，混匀；之后缓慢加入10mlDMSO溶液，混匀，置于4度冰箱保存备用。本专利技术还提供了一种红细胞的冻存方法，采用所述胎盘玻璃化冻存剂保存所述红细胞。在本专利技术的一些具体实施方案中，红细胞的冻存方法具体为取所述红细胞离心，弃上清，与所述红细胞冻存剂混合，-80℃保存。在本专利技术的一些具体实施方案中，冻存密度为0.1-1×107cell/mL。本专利技术提供了一种组合物，包括DMEM/F12基础培养基、DMSO、右旋糖酐40、白蛋白和红细胞保存液Fetuin。本专利技术的红细胞无血清冻存液不含胎牛血清，排除了动物源性病原体的污染，并且明显提高了红细胞复苏后的活力。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示实施例11中本专利冻存方案复苏的红细胞形态；图2示实施例11中现有技术常用冻存方案复苏后的红细胞形态；图3示实施例12对比试验的复苏活率对比。具体实施方式本专利技术公开了一种组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供的组合物及其应用、红细胞冻存制剂及其制备方法中所用原料及试剂均可由市场购得。其中，Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。冻存液配制：在DMEM/F12基础培养基中加入右旋糖酐40注射液、白蛋白注射液、Fetuin储存液，混匀；之后缓慢加入DMSO溶液，使得：DMEM/F12基础培养基混匀，置于4度冰箱保存备用。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1红细胞冻存液的制备Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。在DMEM/F12基础培养基中加入右旋糖酐40注射液、白蛋白注射液、Fetuin储存液，混匀；之后缓慢加入DMSO溶液，混匀，置于4度冰箱保存备用。实施例2红细胞冻存液的制备Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。DMEM/F12基础培养基在DMEM/F12基础培养基中加入右旋糖酐40注射液、白蛋白注射液、Fetuin储存液，混匀；之后缓慢加入DMSO溶液，混匀，置于4度冰箱保存备用。实施例3红细胞冻存液的制备Fetuin：用DMEM/F12培养基溶解，配成100mg/ml的储存液。右旋糖酐40原料为6％右旋糖酐40-氯化钠注射液(国森药业)，稀释成1％终浓度。白蛋白原料为20％的白蛋白注射液(奥克特珐玛药剂生产有限公司)。DMEM/F12基础培养基在DMEM/F12基础培养基中加入右旋糖酐40注射液、白蛋白注射液、Fetuin储存液，混匀；之后缓慢加入DMSO本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其特征在于，包括DMEM/F12基础培养基、DMSO、右旋糖酐40、白蛋白和红细胞保存液Fetuin。

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物由如下组分组成：DMEM/F12基础培养基所述DMEM/F12基础培养基在所述组合物中的终浓度为70～93％。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物由如下组分组成：DMEM/F12基础培养基所述DMEM/F12基础培养基在所述组合物中的终浓度为70～93％。3.根据权利要求1或2所述的组合物在制备红细胞冻存剂中的应用。4.一种红细胞冻存剂，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的组合物。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海佳，王一飞，葛啸虎，吴子杰，王小燕，李平，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44