一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，该方法主要用水饱和正丁醇提取，上柱后水、醇洗脱，以Phenyl键合硅胶为色谱柱，流动相为乙腈-0.5％乙酸溶液(体积比为18.5:81.5)；本发明专利技术提供的一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，不仅实现了解决了之前无法有效控制复方鱼腥草合剂特征成分槲皮苷的问题，而且同步检测复方鱼腥草合剂中槲皮苷、黄芩苷和连翘苷含量，保证了药品安全、有效、质量可控。

【技术实现步骤摘要】
一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法
本专利技术属于药学和分析化学
，具体涉及一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法。
技术介绍
复方鱼腥草合剂具有清热解毒的功效。用于外感风热引起的咽喉疼痛；急性咽炎、扁桃腺炎有风热证候者。制法：以上五味药材，加水煎煮两次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.18～1.20(60℃～80℃)的清膏，加乙醇醇沉至含醇量为70％，搅匀，静置24h，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至适量。另取蔗糖60g，制成单糖浆，加入上述药液，加入处方量的蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯，混匀，调整总量至规定量(即1000ml)，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。复方鱼腥草合剂的处方是由鱼腥草+板蓝根+“双黄连”组成，方中由金银花、黄芩、连翘组成的“双黄连”以其清热解毒的主要功效已成为经典名方，复方鱼腥草合剂是在“双黄连”的基础上增加了利咽的板蓝根和具有较强抗菌、抗病毒作用的鱼腥草。方中以鱼腥草为君药，黄芩为臣药，以连翘为佐药，板蓝根和金银花为使药，在清热解毒的同时增强了抗菌、抗病毒功效，对于中医辨证属风热的咽喉疼痛、急性咽炎、扁桃腺炎等上呼吸道感染效果明显。鱼腥草为三白草科植物蕺菜(HouttuyniacordataThunb).的新鲜全草或干燥地上部分；辛，微寒。归肺经。有清热解毒，消痛排脓，利尿通淋之功效；用于肺痈吐脓，痰热喘晐，热痢，热淋，痈肿疮毒。鱼腥草为该方中的君药，槲皮苷为复方鱼腥草合剂中鱼腥草的特异成分。槲皮苷及其代谢产物槲皮素均能够明显抑制单纯疱疹病毒HSV-1和HSV-2感染；另外，槲皮素能够抑制炎症因子的表达；对耐甲氧西林的葡萄球菌具有良好的抑制作用。黄芩为唇形禾斗植物黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根；味苦，性寒；归肺、胆、脾、大肠、小肠经。有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎之功效；用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。黄芩抗菌谱广，其煎剂对多种革兰阳性菌、革兰阴性菌及螺旋体等的生长均有抑制作用；黄芩也具有抗真菌活性，对白色念珠菌、许兰毛癣菌等多种致病性真菌的生长有一定抑制作用。黄芩为该方中的臣药，其特征成分为黄芩苷，黄芩苷及其代谢产物黄芩素对流感病毒所致的细胞病变均有明显的抑制作用，当黄芩苷超过一定质量浓度时，能明显降低病毒神经氨酸酶的活力，从而抑制病毒复制；黄芩素和黄芩苷具有一定的解热镇痛抗炎作用，黄芩素和黄芩苷可以通过干扰花生四烯酸的代谢通路、抑制核因子的活性以及细胞因子的分泌、释放而发挥解热镇痛抗炎的作用。连翘为木犀科植物连翘(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)的干燥果实；苦，微寒；归肺、心、小肠经。有清热解毒，消肿散结,疏散风热之功效；用于痈疽，瘰疬，乳痛，丹毒，风热感冒，温病初起，温热入营，高热烦渴，神昏发斑，热淋涩痛。连翘为该方中的佐药，连翘苷为连翘中特异性成分，对生物膜菌的代谢和生物膜形态均有显著影响。板蓝根为十字花科植物菘蓝(IsatisindigoticaFort.)的干燥根；味苦，性寒。归心、胃经；具清热解毒，凉血利咽之功效；用于瘟疫时毒，发热咽痛，温毒发斑，痄腮，烂喉丹痧，大头瘟疫，丹毒，痈肿，为该方中的使药。金银花为忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或带初开的花；味甘，性寒。归肺、心、胃经；清热解毒，疏散风热；用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温病发热，为该方中的使药。目前，复方鱼腥草合剂的质量标准收载于《国家中成药标准汇编内科肺系(一)分册》和《新药转正标准73册》，但这两个法定标准都仅采用薄层色谱法对鱼腥草和黄芩进行了鉴别，并采用高效液相色谱法对黄芩苷含量进行了控制，要求每1ml含黄芩苷不得少于0.45mg。上述两个法定质量标准的质量指标单一，缺乏对复方鱼腥草合剂中主要药效成分槲皮苷和连翘苷的含量控制，无法保证该品种的临床疗效。已公开的复方鱼腥草合剂质量控制相关文献较少，多采用液相色谱方法测定黄芩苷的含量，也有部分文献增加了绿原酸的含量控制，尚未见相关文献报道复方鱼腥草合剂中同时测定槲皮苷、黄芩苷、连翘苷含量。复方鱼腥草片、复方鱼腥草胶囊、复方鱼腥草滴丸等其他制剂中有测定连翘苷、槲皮素及(R，S)-告依春含量的报道，如《RP-HPLC法同时测定复方鱼腥草片中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含量》(金永新,要林青等.中国药师,2004,7(7)；524-526)公开了液相色谱法测定复方鱼腥草片中绿原酸、连翘苷、黄芩苷的含量，步骤如下：采用70％乙醇超声提取主成分，PhenomenexODS柱(250mm×4.6mm,5μm)，乙腈-0.002％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm。但该技术方案未对鱼腥草药材的特征成分槲皮苷进行含量测定，且并不适用于对复方鱼腥草合剂中的槲皮苷等成分的含量测定。因为合剂与片剂物理形态差异大，前者在制备过程中加入大量的蜂蜜作为辅料，由于蜂蜜不仅具有很强的粘性，而且其含有大量的脂溶性物质，使得供试品的制备分离非常困难；另外，复方鱼腥草合剂中的羟苯乙酯、苯甲酸钠等的共轭结构在紫外下产生强吸收，且难以与槲皮苷、黄芩苷、连翘苷主成分分离，所以目前尚未见复方鱼腥草合剂中槲皮苷、黄芩苷和连翘苷等成分的含量测定方法报道。《高效液相色谱法测定鱼腥草中金丝桃苷与槲皮苷的含量》(郑一敏,胥秀英,傅善权,杨艳红.现代中药研究与实践,2005,19(3)；27-28)公开了液相色谱法测定药材鱼腥草中槲皮苷和金丝桃苷的含量；《QuantitiveVariationofFlavonoidsinHouttuyniacordatafromDifferentGeographicOriginsinChina》(WULing-Shang，SIJin-Ping，YUANXiao-Qing，SHIXue-Rong，ChineseJournalofNaturalMedicines，2009,7(1))，公开了液相色谱法测定药材鱼腥草中金丝桃苷、槲皮苷、槲皮素的含量，方法均为：采用甲醇或甲醇-水提取主成份，提取液滤过，干燥，滤液蒸干得残渣，用甲醇-水溶液溶解残渣；十八烷基硅胶键合相色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)，甲醇-0.2％磷酸溶液为流动相，等度洗脱，紫外检测器检测。鱼腥草干燥品及复方鱼腥草合剂能够完全溶解于甲醇或甲醇-水中，而复方鱼腥草合剂物理形态、成分种类差异大，甲醇或甲醇-水并不能有效去除复方鱼腥草合剂中的杂质成分，富集待测目标成分。故认为以上两种技术方案并不适用于对复方鱼腥草合剂中的槲皮苷等成分的含量测定。《中国药典》2010版第一部公开了连翘药材中连翘苷的含量测定方法，步骤如下：甲醇浸渍后超声提取，提取液蒸干，通过中性氧化铝柱富集，50％甲醇溶解、定容，液相色谱法进行含量测定。但该技术方案针对的是单味药材连翘中连翘苷含量测定，并不适用于同时测定复方鱼腥草合剂中的槲皮苷、黄芩苷等有效成分。这是因为复方鱼腥草合剂处方组成中不仅含有连翘苷，而且含有黄芩苷、槲皮苷等黄酮苷类成分，但中性氧化铝会与黄酮类成分中的邻二酚羟基、“3-羟基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，包括如下步骤：A、对照品溶液的制备：分别取槲皮苷、连翘苷、黄芩苷对照品，加有机溶剂，稀释配制成混合标准溶液；所述有机溶剂为甲醇、乙醇中的一种；B、供试品溶液的制备(1)提取：取复方鱼腥草合剂，用提取溶剂振摇提取，提取次数为2～4次，蒸干提取液得残渣；所述提取溶剂为石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇中的一种；(2)大孔树脂富集：取步骤(1)的残渣加水5～15ml溶解，过大孔树脂柱，先用水50～200ml洗脱，弃去水洗液，再用30％乙醇30～100ml洗脱，弃去洗脱液，继续用60％～80％乙醇50～200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％甲醇，溶解，定容至10～50ml；C、检测采用高效液相色谱法，色谱条件为：以Phenyl键合固定相为填料；柱温为30～45℃；检测波长为250～300nm；理论塔板数按槲皮苷峰计算应不低于4000；流动相为乙腈‑0.5％乙酸溶液；流速为1.0～1.5ml/min，分别取对照品溶液和供试品溶液10μL注入液相色谱仪，测定，即得。

【技术特征摘要】
1.一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，包括如下步骤：A、对照品溶液的制备：分别取槲皮苷、连翘苷、黄芩苷对照品，加有机溶剂，稀释配制成混合标准溶液；所述有机溶剂为甲醇、乙醇中的一种；B、供试品溶液的制备(1)提取：取复方鱼腥草合剂，用提取溶剂振摇提取，提取次数为2～4次，蒸干提取液得残渣；所述提取溶剂为水饱和正丁醇；(2)大孔树脂富集：取步骤(1)的残渣加水5～15ml溶解，过D101型大孔树脂柱，先用水50～200ml洗脱，弃去水洗液，再用30％乙醇30～100ml洗脱，弃去洗脱液，继续用60％～80％乙醇50～200ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50％甲醇，溶解，定容至10～50ml；C、检测采用高效液相色谱法同时测定槲皮苷、连翘苷和黄芩苷的含量，色谱条件为：以Phenyl键合固定相为填料；柱温为30～45℃；检测波长为250～300nm；理论塔板数按槲皮苷峰计算应不低于4000；流动相为乙腈-0.5％乙酸溶液，乙腈与0.5％乙酸的体积比为18.5：81.5；流速为1.0～1.5ml/min，分别取对照品溶液和供试品溶液10μL注入液相色谱仪，测定，即得。2.如权利要求1所述的一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，其特征在于，所述步骤A中的有机溶剂为甲醇。3.如权利要求1所述的一种复方鱼腥草合剂的含量检测方法，其特征在于，所述步骤A中的混合标...

【专利技术属性】
技术研发人员：王如伟，金汉台，印晓红，王建方，吴健，何厚洪，陈卿，兰文一，
申请(专利权)人：浙江康恩贝中药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33