一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法
本专利技术涉及过敏性疾病诊断的
，具体为一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法。
技术介绍
变态反应性疾病发病率占世界总人口的30％以上，被世界卫生组织列为21世纪的四大非感染性疾病之一。随着工业经济的发展，生态环境的改变，近年来此类疾病日益增多，成为常见病、多发病，是我国健康及经济发展领域需要解决的重大问题。有史以来，疾病的定义及诊断方案绝大多数都是由发达国家提出的。2011年何韶衡、张慧云在东京举行的首届中-日-韩三国过敏年度交流会上，在国内外率先对沿用了近40年的过敏性疾病的定义进行了修正商榷，将原来的“过敏性疾病是一组由IgE介导的疾病”修改为“是一组由肥大细胞/嗜碱性粒细胞(MC/Bas)介导的疾病”。而IgE介导的过敏性疾病只是其中的一个亚型，从而修正了人们对过敏性疾病认识的偏差。这是因为过敏反应(速发型超敏反应)的根本问题是激活后的初始效应细胞—MC/Bas释放炎症性介质，从而启动炎症的病理生理过程，导致临床症状的出现。基于原有“过敏性疾病是一组由IgE介导的疾病”的定义，国外一些专家人为的把那些非IgE...
【技术保护点】
一种嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA‑DR、抗人CD203c和抗人CD63荧光标记流式抗体组合，如FITC标记的抗人CD123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA‑DR，PE标记的抗人CD203c、PE/Cy7标记的抗人CD63，...
【技术特征摘要】
1.一种非诊断目的的嗜碱性粒细胞激活、脱颗粒的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63荧光标记流式抗体组合，用量为每人份五种抗体各5μL，以鉴定嗜碱性粒细胞激活和脱颗粒状态；④患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25μL至125μL全血加到标记好的流式上样管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育15min；⑤孵育结束后，每个流式上样管内加入1mL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育10min；⑥孵育结束后，1200r/min转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入1mL的PBS缓冲液，以同样的速度离心；⑦离心后，以同样的方式去上清液，加入300μL的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；⑧用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于：所述荧光标记流式抗体包括FITC、APC、APC/Cy7、PE、PE/Cy7或PerCP荧光标记的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c和抗人CD63抗体。3.一种非诊断目的的嗜碱性粒细胞激活的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA-DR、抗人CD203c荧光标记流式抗体组合，用量为每人份四种抗体各5μL，以鉴定嗜碱性粒细胞激活状态；④患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25μL至125μL全血加到标记好的流式上样管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵...
【专利技术属性】
技术研发人员：何韶衡，
申请(专利权)人：辽宁医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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