本发明专利技术的目的在于提供蛋白质大分子化合物SFRP-5在制备抑制细胞增殖功能、具有免疫调节功能和具有治疗银屑病的药物中的应用及其制备方法。该蛋白质分子SFRP-5的制备方法，包括以下步骤：1）PCR法扩增小鼠sfrp-5基因；2）构建pcDNA3.1-HA-SFRP5的表达载体；3）将表达载体转染到CHO细胞系中进行重组蛋白表达；4）通过蛋白质A/D微球纯化法对重组蛋白进行纯化；5）通过荧光素酶检测反应测量它在HEK293T中能够抑制β-catenin的活化比例来确定其活性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分泌型卷曲相关蛋白-5在制备免疫调节功能药物中的应用，特别是在制备治疗银屑病药物中的应用。
技术介绍
银屑病(psoriasis)是一种常见的免疫相关性、复发性的皮肤慢性炎症，其特征是真皮内浓密的以T细胞、DC、自然杀伤T细胞和巨噬细胞为主的炎性细胞浸润。银屑病患者皮肤的表皮过度增生且无法正常分化，使其表皮显著增厚、结痂增多。银屑病的确切发病原因还不明确，环境因子(诸如感染、外伤、压力等)和遗传因子等综合因素决定了个体的易感性。银屑病目前尚无根治的药物，早期治疗多使用类固醇等非生物性的免疫抑制剂，此类非专一性免疫抑制剂具有相当程度的副作用。近年来，生物制剂如肿瘤坏死因子制剂Etaner^pt (依那西普)等也被用于银屑病治疗，此类药物多为人源化抗体，用于阻隔银屑病相关炎症细胞因子与受体间的作用。由于许多炎症细胞因子在机体正常免疫反应中不可缺少，没有选择性地阻挡炎症细胞因子亦会导致用药后的副作用，停药后疾病容易反弹。我国从1984年以来约有超过400万患者被诊断为银屑病，自主研究开发我国有知识产权的治疗银屑病的新药物势在必行。Wnt信号通路广泛存在于多种细胞和动物体内，具有高度保守的特点，其功能最常见于胚胎发育和癌症，但也参与成年动物的正常生理过程。fct信号通路的失调可能会引起细胞命运、细胞极性、组织模式和细胞增殖等生物学过程的异常，并且与包括癌症在内的许多疾病密切相关。Wnt信号通路的激活依靠wnt蛋白与靶细胞表面卷曲受体家族结合，有时也同时结合其它辅助受体，从而开启下游一系列不同信号转导途径。目前被广泛接受的wnt信号转导途径主要有三类，即经典的Wnt/beta-catenin通路、ffnt/Ca2+通路和细胞极性通路。生理条件下生物体自身有多种方式调控fct通路，防止其过度激活。比如通过分泌抑制剂干扰wnt蛋白和细胞表面受体的相互作用，继而阻止信号的产生。这类抑制剂中比较常见的有三类:分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled related protein,SFRP)、Dickkopf 蛋白(DKK)和 wnt 抑制因子(wnt inhibitory factor, WIF)。其中，SFRP是最早被确认的一类rat抑制剂。这类蛋白含有大约300个氨基酸，并具有一个类似受体Frizzled蛋白的半胱氨酸富集区(cysteine rich domain, CRD),这种结构上的相似性可能是SFRP能够竞争性地结合wnt的原因。目前为止共发现5个哺乳动物的SFRP分子，它们在多种胚胎和成体组织中表达，表明在多种不同的组织和细胞中SFRP家族广泛地发挥着抑制wnt通路被过度激活的作用。然而银屑病患者的病变皮肤样本的全基因组芯片数据显示，和患者非皮损部位皮肤相比，sfrp和dkk表达降低，倍数差异分别是0.38和0.43倍。我们取咪喹莫特诱导的小鼠类银屑病模型的病变皮肤，通过提取皮肤中的RNA进行real time PCR检测，发现sfrp家族表达量都有降低趋势,其中sfrp-5的含量更是显著降低(P = 0.0173)。这说明银屑病的发生和发展可能伴随着以wnt抑制信号表达降低为代表的wnt通路的激活。在我们的研究中发现，小鼠类银屑病造模过程中通过皮内注射的方式连续给与重组SFRP-5蛋白，7天造模期结束后，和注射PBS的对照组相比，表皮的厚度和真皮中淋巴细胞浸润数量都有显著降低。实验结果显示SFRP-5对小鼠类银屑病有一定治疗/预防作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种蛋白质类大分子化合物SFRP-5在制备抑制细胞增殖功能药物、制备具有免疫调节功能及制备治疗银屑病的药物中的应用。本专利技术的技术方案是:该蛋白质分子SFRP-5的制备方法，包括以下步骤:I) PCR法扩增小鼠sfrp-5基因；2)构建 pcDNA3.1-HA-SFRP5 的表达载体；3)将表达载体转染到CHO细胞系中进行重组蛋白表达； 4)通过蛋白质A/D微球纯化法对重组蛋白进行纯化；5)通过荧光素酶检测反应测量它在HEK293T中能够抑制β -catenin的活化比例来确定其活性；该蛋白质大分子化合物SFRP5—级结构如下:mwvawsarta alalllgalh gaptrgqeyd yygwqaeplh grsyskppqc ldipadlplchtvgykrmrl pnllehesla evkqqasswl pilakrchsd tqvficslfa pvcldrpiyp crslceavragcaplmeayg fpwpemlhch kfpldndlci avqfghlpat appvtkicaq cemehsadgl meqmcssdfvvkmrikeiki dngdrkliga qkkkkllkag plkrkdtkkl vlhmkngasc pcpqldnltg sfivmgrkvegqlIltavyr wdkknkemkf avkfmfsypc slyypffyga aeph蛋白质大分子化合物SFRP-5在制备抑制细胞增殖功能药物中的应用。蛋白质大分子化合物SFRP-5在制备具有免疫调节功能的药物中的应用。蛋白质大分子化合物SFRP-5在制备治疗银屑病的药物中的应用。本专利技术公开的蛋白质大分子化合物SFRP-5对小鼠类银屑病发生、发展的抑制作用是由本专利技术首次报道。【附图说明】图1.类银屑病小鼠模型的建立:咪喹莫特诱导前后；图2.类银屑病小鼠模型的建立:病理切片诱导前后；图3.sfrp家族在正常小鼠皮肤和类银屑病小鼠皮肤中的表达；图4.sfrp4和sfrp5在健康人和银屑病患者皮肤中的表达；图5.SFRP-5在正常小鼠皮肤和类银屑病小鼠皮肤中蛋白水平的表达；图6.皮内注射蛋白质大分子化合物SFRP-5 (I μ g/ml)A.小鼠皮内注射蛋白质大分子化合物SFRP-5 (I μ g/ml)和对照PBS的同时使用咪喹莫特诱导H&E病理结果；B.表皮面积和真皮淋巴细胞的浸润；图7.皮内注射不同浓度蛋白质大分子化合物SFRP-5A.小鼠皮内注射0.5 μ g/ml、l μ g/ml和15 μ g/ml蛋白质大分子化合物SFRP-5和对照PBS的同时使用咪喹莫特诱导后表皮面积比较；B.小鼠皮内注射0.5 μ g/ml、l μ g/ml和15 μ g/ml蛋白质大分子化合物SFRP-5和对照PBS的同时使用咪喹莫特诱导后真皮淋巴细胞浸润数目比较。【具体实施方式】1.类银屑病小鼠模型的建立及鉴定:将小鼠麻醉后背部剃毛，面积1.5cm*2当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
分泌型卷曲相关蛋白‑5(secreted frizzled related protein‑5，SFRP‑5)的制备方法，包括以下步骤： 1)PCR法扩增小鼠sfrp‑5基因； 2)构建pcDNA3.1‑HA‑SFRP5的表达载体； 3)将表达载体转染到CHO细胞系中进行重组蛋白表达； 4)通过蛋白质A/D微球纯化法对重组蛋白进行纯化； 5)通过荧光素酶检测反应测量它在HEK293T中能够抑制β‑catenin的活化比例来确定其活性； 该分泌型卷曲相关蛋白‑5的一级结构如下： mwvawsarta alalllgalh gaptrgqeyd yygwqaeplh grsyskppqc ldipadlplc htvgykrmrl pnllehesla evkqqasswl pllakrchsd tqvflcslfa pvcldrpiyp crslceavra gcaplmeayg fpwpemlhch kfpldndlci avqfghlpat appvtkicaq cemehsadgl meqmcssdfv vkmrikeiki dngdrkliga qkkkkllkag plkrkdtkkl vlhmkngasc pcpqldnltg sflvmgrkve gqllltavyr wdkknkemkf avkfmfsypc slyypffyga aeph 。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王宏林，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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