【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种过表达Galectin‑1基因编码蛋白永生化细胞的制备方法,其特征在于,它的步骤如下:1)自BHK细胞提取总RNA,应用RT‑PCR方法扩增Galectin‑1基因,并与真核表达载体pIRESneo构建表达质粒pIRES‑Ga;2)用Luria‑Bertani Medium培养基培养1‑3ml浓度为1‑1.5 OD600值的含目的基因重组质粒菌液,通过超纯质粒纯化试剂盒制备无内毒素的超纯质粒;3)用含5‑10小牛血清的Minimum Essential Medium作为基础培养基,重组pIRESneo‑Ga质粒经FuGENE转染试剂介导传染70‑80%融合的生长旺盛的单层BHK细胞;4)在含500μg/ml浓度G418的Minimum Essential Medium的培养基中,通过极限稀释法获得单克隆化细胞;5)单克隆化细胞经RT‑PCR、Western Blot检测后,获得含目的基因的永生化细胞。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:王世山,靳玉珠,柴磊,刘树军,屈俊成,张昕,王丹,张佳,成林林,张峰,左英芳,张慧利,关婷婷,杨美荣,赵凌霄,马超越,秦娜,
申请(专利权)人:焦作市畜产品质量安全监测中心,
类型:发明
国别省市:河南;41
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