人MHC转基因小鼠模型的构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种人MHC转基因小鼠模型的构建方法与应用。本发明专利技术公开一种转基因小鼠的构建方法，包括如下步骤：将小鼠β2m基因和小鼠H-2IAβ基因敲除，并将HLA-A11基因和HLA-DR1基因整合入小鼠的基因组，得到HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ和ClassⅡ双基因敲除的转基因小鼠。利用本发明专利技术的方法构建的小鼠模型可以用于T细胞表位和表位特异性T细胞的免疫致病和免疫保护作用研究，弥补了缺乏预测人体细胞免疫反应小动物模型的不足。因此，该模型有望发展成为一种可替代传统动物模型的新型实验动物模型。

【技术实现步骤摘要】
人MHC转基因小鼠模型的构建方法与应用
本专利技术涉及一种人MHC(HLA-A11-/HLA-DR1-transgenicH-2classⅠ-/classⅡ-KO)转基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物

技术介绍
主要组织相容性复合体(MHC)是人体内多态性最丰富的基因系统，广泛参与免疫应答的诱导和调节，具有极其重要的生物学意义。然而，中国人群MHC-Ⅰ及Ⅱ类分子限制性与欧美及其他地区有根本性差异：在MHC-Ⅰ中，HLA-A11约占中国总人口的20-30％；而其在欧美及中东人群中仅占10％左右，具有较显著差异；在MHC-Ⅱ中，HLA-DR1约占中国总人口的10-15％，HLA-DR09和HLA-DR15表型频率分别为31.2％和27％。建立一种适用于中国人群的预测人体细胞免疫反应的小鼠模型具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是预测中国人群的细胞免疫反应。为了解决以上技术问题，本专利技术提供一种转基因小鼠的构建方法，包括如下步骤：将小鼠β2m基因和小鼠H-2IAβ基因敲除，并将HLA-A11基因和HLA-DR1基因整合入小鼠基因组，得到HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ基因和小鼠内源性ClassⅡ基因双基因敲除的转基因小鼠；所述HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ和ClassⅡ双基因敲除的转基因小鼠的基因型为HLA-A11+/+/HLA-DR1+/+/β2m-/-/IAβ-/-；所述HLA-A11基因编码的蛋白为HLA-I类分子；所述HLA-DR1基因编码的蛋白为HLA-II类分子；所述小鼠内源性ClassⅠ基因为小鼠β2m基因；所述小鼠内源性ClassⅡ基因为小鼠H-2IAβ基因；所述小鼠β2m基因编码的蛋白为β2-微球蛋白；所述HLA-I类分子和HLA-II类分子为人的主要组织相容性复合体分子；所述H-2-I类分子和H-2-II类分子为鼠的主要组织相容性复合体分子；所述HLA-A11基因序列如SEQIDNo.1中第6位至第2868位所示；所述HLA-DR1中HLA-DR1-alpha链为Genbank登录号为K01171.1序列的第15位至第779位所示的序列，HLA-DR1-beta-1链为Genbank登录号为M33600.1序列的第71位至第871位所示的序列；所述小鼠β2m基因序列为Genbank登录号为NM_009735.3序列的第52位至第411位所示的序列；所述小鼠H-2IAβ基因序列为Genbank登录号为NM_207105.3序列的86位至第883位所示的序列。上述方法中，所述HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠β2m和H-2IAβ双基因敲除的转基因小鼠的构建包括如下步骤：将HLA-A11基因整合入小鼠的基因组，获得HLA-A11首建鼠；将HLA-A11首建鼠与HLA-A2.1-/HLA-DR1-transgenicH-2classⅠ-/classⅡ-KO小鼠杂交，得到F1代杂合子小鼠，再将F1代杂合子小鼠自交得到所述HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ基因和小鼠内源性ClassⅡ基因双基因敲除的转基因小鼠；所述HLA-A2.1-/HLA-DR1-transgenicH-2classⅠ-/classⅡ-KO小鼠在文献“AnthonyPajot,Marie-LouiseMichel,etal.Amousemodelofhumanadaptiveimmunefunctions:HLA-A2.1-/HLA-DR1-transgenicH-2classI-/classII-knockoutmice.Eur.J.Immunol,2004.34:3060–3069.”中公开过。上述任一所述的方法中，所述将HLA-A11基因整合入小鼠的基因组的方法包括如下步骤：将含有HLA-A11启动子序列、人β2-微球蛋白基因序列、HLA-A11重链α1和α2功能区编码序列、H-2Db的α3功能区编码序列和H-2Db跨膜区编码序列的片段记作片段A，将所述片段A整合入小鼠的受精卵，由该受精卵得到小鼠，即为所述HLA-A11首建鼠。上述任一所述的方法中，所述HLA-A11启动子序列如SEQIDNo.1中自5’末端起第6-1202位核苷酸所示；所述人β2-微球蛋白基因序列如SEQIDNo.1中自5’末端起第1203-1571位核苷酸所示；所述HLA-A11重链α1和α2功能区编码序列如SEQIDNo.1中自5’末端起第1617-2159位核苷酸所示；所述H-2Db的α3功能区编码序列和H-2Db的跨膜区编码序列如SEQIDNo.1中自5’末端起第2160-2630位核苷酸所示。上述任一所述的方法中，所述片段A的序列如SEQIDNo.1所示。上述任一所述的方法中，所述将所述片段A整合入小鼠的受精卵的方法为受精卵雄原核显微注射法。上述任一所述的方法中，所述受精卵来源于C57BL/6J小鼠，其雌原核和雄原核均来自C57BL/6J小鼠。为了解决以上技术问题，本专利技术还提供SEQIDNo.1所示的DNA分子。为了解决以上技术问题，本专利技术还提供按照上述任一所述的方法构建的转基因小鼠或上述DNA分子在如下(1)或(2)任一所示中的应用；(1)制备评价和/或筛选产品对人体引起的免疫保护水平的动物模型；(2)制备和/或筛选能引起人体免疫反应的产品。上述应用中，所述产品为疫苗或蛋白或多肽；所述疫苗具体为乙肝疫苗；所述乙肝疫苗具体为商业化的CHO细胞表达的HBV表面抗原S基因工程疫苗；所述商业化的CHO细胞表达的HBV表面抗原S基因工程疫苗在文献“王四清，田淑芳，等。CpG对乙型肝炎基因重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响。病毒学报，2002，18，2。”中公开过；所述多肽具体为HIV-1多表位重组蛋白；所述HIV-1多表位重组蛋白具体为HIV-1多表位重组蛋白HIV-MEP1，该蛋白为按照名称为“一种HIV-1多表位重组蛋白及其编码基因与应用”申请号为201410394686.7的专利技术专利的实施例1的方法制备得到的蛋白，并且为该专利的权利要求1所述的蛋白；所述免疫具体为细胞免疫或体液免疫；所述细胞免疫具体为细胞毒T淋巴细胞参与的免疫。本专利技术将人MHC转基因小鼠模型通过转入HLAI类及II类分子，同时敲除小鼠H-2-I/II基因的重要组分，排除小鼠内源性H-2分子对免疫应答的竞争性抑制作用。该动物模型体内的细胞免疫反应完全受人HLA(humanleukocyteantigen，人类白细胞抗原)分子的调节，HLA分子所呈递的表位与人体基本相同，能够有效反应人体免疫反应特征，可以部分替代以人体为基础的实验，用于T细胞表位和表位特异性T细胞的免疫致病和免疫保护作用研究，弥补了缺乏预测人体细胞免疫反应小动物模型的不足。因此，该模型有望发展成为一种可替代传统动物模型的新型实验动物模型。附图说明图1为HLA-A11转基因载体的模式图。图2为HLA-A11转基因载体(pET32a-A11)的鉴定结果。图3和图4为HLA-A11-/HLA-DR1-transgenicH-2classⅠ-/classⅡ-KO转基因小鼠模型纯合子基因型的鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种转基因小鼠的构建方法，包括如下步骤：将小鼠β2m基因和小鼠H‑2IAβ基因敲除，并将HLA‑A11基因和HLA‑DR1基因整合入小鼠的基因组，得到HLA‑A11和HLA‑DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ和ClassⅡ双基因敲除的转基因小鼠。

【技术特征摘要】
1.一种转基因小鼠的构建方法，包括如下步骤：将HLA-A11基因整合入小鼠的基因组，获得HLA-A11首建鼠；将HLA-A11首建鼠与HLA-A2.1-/HLA-DR1-transgenicH-2classⅠ-/classⅡ-KO小鼠杂交，得到F1代杂合子小鼠，再将F1代杂合子小鼠自交得到HLA-A11和HLA-DR1双转基因且小鼠内源性ClassⅠ和ClassⅡ双基因敲除的转基因小鼠；所述将HLA-A11基因整合入小鼠的基因组的方法包括如下步骤：将含有HLA-A11启动子序列、人β2-微球蛋白基因序列、HLA-A11重链α1和α2功能区编码序列、H-2Db的α3功能区编码序列和H-2Db跨...

【专利技术属性】
技术研发人员：周育森，孙世惠，曾扬，赵光宇，寇志华，郭彦，于虹，李军锋，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11