一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法技术

技术编号:11368629 阅读:71 留言:0更新日期:2015-04-29 19:50
本发明专利技术提供了一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法,第一步为半抗原的制备及检测:以盐酸丁丙诺啡与丁二酸酐为原料通过游离,接臂,反应得到含羧基的半抗原;第二步为人工抗原的制备与检测:通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备丁丙诺啡的人工抗原即丁丙诺啡-牛血清蛋白。所制备的丁丙诺啡人工抗原可进行动物免疫,取得相应的丁丙诺啡抗体,可用于各种丁丙诺啡类免疫分析法的研究,为丁丙诺啡的检测提供更加方便快速准确的途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物化工
,具体涉及。
技术介绍
丁丙诺啡(BUP)属于麻醉镇痛药,为阿片受体部分激动剂。镇痛作用强于哌替啶。 起效慢,持续时间长。对呼吸有抑制作用。药物依赖性近似吗啡,与吗啡比较,具有作用时 间较长、药物依赖性低的特点。丁丙诺啡除了具有镇痛作用外,还对嗜吸毒品者产生戒毒治 疗作用。其结构式为:【主权项】1. ,其特征在于,包括以下步骤: (1) 制备人工半抗原: (a) 将盐酸丁丙诺啡溶于纯化水,滴加氨水,游离使之pH?9 ;用乙酸乙酯萃取,转干, 得到白色固体产物I ;TLC:层析液为95%乙醇:氨水:二氯甲烷:1,4_二氧六环=8: 1: 10: I (v/v),产物 Rf =〇· 8?0· 9 ; (b) 将产物I溶于5ml无水吡啶中,加入200mg 丁二酸酐,KKTC回流搅拌反应20小 时以上;反应结束后,将溶剂减压蒸馏,用二氯甲烷萃取,转干得棕褐色丁丙诺啡半抗原 II ;TLC:层析液为95%乙醇:氨水:二氯甲烧:1,4-二氧六环=8: 1: 10: l(v/v),产物Rf =0· 3?0· 4 ; (2) 制备丁丙诺啡人工抗原: (c) 将丁丙诺啡半抗原II溶于5ml N,N-二甲基甲酰胺中,加入40mg N-羟基琥珀酰 亚胺、72mg环己基碳酰二亚胺,室温搅拌反应20小时以上,反应结束后离心取上清液记为A 液; (d) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78. 3:4. 2:1溶于双 蒸水中,制备钠离子浓度为〇. lmol/L的PBS缓冲液,pH为7. 2~7. 4 ; (e) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中,得到浓度为5mg/ml的B液; (f) 将A液缓慢滴加到B液,A液与B液的体积比为1:5,得到的混合液在2-8°C条件 下静置保存过夜,得到人工抗原混合液; (g) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析,透析结束后离心取上清液即得到人工抗 原:丁丙诺啡-牛血清蛋白。【专利摘要】本专利技术提供了,第一步为半抗原的制备及检测:以盐酸丁丙诺啡与丁二酸酐为原料通过游离,接臂,反应得到含羧基的半抗原;第二步为人工抗原的制备与检测:通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备丁丙诺啡的人工抗原即丁丙诺啡-牛血清蛋白。所制备的丁丙诺啡人工抗原可进行动物免疫,取得相应的丁丙诺啡抗体,可用于各种丁丙诺啡类免疫分析法的研究,为丁丙诺啡的检测提供更加方便快速准确的途径。【IPC分类】C07K1-107, C07K14-765【公开号】CN104558152【申请号】CN201310522590【专利技术人】韩洁茹, 董媛媛 【申请人】艾博生物医药(杭州)有限公司【公开日】2015年4月29日【申请日】2013年10月29日本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种丁丙诺啡人工抗原的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1) 制备人工半抗原:(a) 将盐酸丁丙诺啡溶于纯化水,滴加氨水,游离使之pH≈9;用乙酸乙酯萃取,转干,得到白色固体产物Ⅰ;TLC:层析液为95%乙醇:氨水:二氯甲烷:1,4‑二氧六环=8: 1: 10: 1(v/v),产物Rf =0.8~0.9;(b) 将产物Ⅰ溶于5ml无水吡啶中,加入200mg丁二酸酐,100℃回流搅拌反应20小时以上;反应结束后,将溶剂减压蒸馏,用二氯甲烷萃取,转干得棕褐色丁丙诺啡半抗原Ⅱ;TLC:层析液为95%乙醇:氨水:二氯甲烷:1,4‑二氧六环=8: 1: 10: 1(v/v),产物Rf =0.3~0.4;(2) 制备丁丙诺啡人工抗原:(c) 将丁丙诺啡半抗原Ⅱ溶于5ml N,N‑二甲基甲酰胺中,加入40mg N‑羟基琥珀酰亚胺、72mg环己基碳酰二亚胺,室温搅拌反应20小时以上,反应结束后离心取上清液记为A液;(d) 将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3:4.2:1溶于双蒸水中,制备钠离子浓度为0.1mol/L的PBS缓冲液,pH为7.2~7.4;(e) 将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中,得到浓度为5mg/ml的B液;(f) 将A液缓慢滴加到B液,A液与B液的体积比为1:5,得到的混合液在2‑8℃条件下静置保存过夜,得到人工抗原混合液;(g) 将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析,透析结束后离心取上清液即得到人工抗原:丁丙诺啡‑牛血清蛋白。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:韩洁茹董媛媛
申请(专利权)人:艾博生物医药杭州有限公司
类型:发明
国别省市:浙江;33

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