本发明专利技术涉及一种25-羟基维生素D定量检测试纸条及其应用，属于医用试剂领域。本发明专利技术提供的试纸条包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水垫和PVC衬板，所述样本垫上包被有25-OH VD活化的乳胶微粒和/或1，25-(OH)2VD活化的乳胶微粒，所述结合垫上涂布有胶体金标记的抗25-OH VD单克隆抗体及抗VDBP单克隆抗体，所述NC膜依次包括T线和C线，所述T线上包被有25-OH VD-BSA和部分表达的人VDBP，所述C线上包被有羊抗鼠抗体。采用本发明专利技术试纸条，无需样本预处理，能够快速、准确测定样品中维生素D的含量。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种25-羟基维生素D定量检测试纸条及其应用，属于医用试剂领域。本专利技术提供的试纸条包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水垫和PVC衬板，所述样本垫上包被有25-OH VD活化的乳胶微粒和/或1，25-(OH)2VD活化的乳胶微粒，所述结合垫上涂布有胶体金标记的抗25-OH VD单克隆抗体及抗VDBP单克隆抗体，所述NC膜依次包括T线和C线，所述T线上包被有25-OH VD-BSA和部分表达的人VDBP，所述C线上包被有羊抗鼠抗体。采用本专利技术试纸条，无需样本预处理，能够快速、准确测定样品中维生素D的含量。【专利说明】25-哲基维生素D定量检测试纸条及其应用
本专利技术设及一种25-哲基维生素D定量检测试纸条及其应用，属于医药制剂领域。
技术介绍
近年来，随着研究的不断深入，人们对维生素D(VD)有了更多的认识，VD是所有生 物活性物质中一个非常独特的成员，具有多种作用，它是维生素，但本质上是激素，还可能 是细胞因子。因为VD是来源于食物的必需营养物，而且人体需要量非常小，所W说它是维 生素。它主要是在紫外线的照射下从皮肤内的7-脱氨胆固醇转变而来，然后随血液运行到 全身发挥作用，所W属于类固醇类激素。人们逐渐认识到它具有更广泛的生理作用，除了调 节巧磯代谢外，还具有抗增殖、抗分化、调节细胞调亡、介导免疫反应、调节多种内分泌腺激 素的分泌、调节造血组织造血的作用。该些功能是VD的类似物骨S醇（1，25-(0H)2VD)通过 与具有VD受体（VDR)的细胞相结合并经过一系列生理生化过程而起作用的。该些肾外来 源的骨S醇，作用于细胞周围的某一部位，所W按照其作用也可W认为是一种细胞因子。无 论如何，VD及其类似物在临床上的重要意义越来越受到人们的重视，如何更加科学合理使 用将是我们现在面临的重要课题。 维生素D是一种必须经过代谢转变才能达到最佳巧化醇生物活性的脂溶性类固 醇衍生物。皮肤合成的维生素D3或小肠吸收的维生素D由维生素D结合蛋白（vitamin D binding protein, VDB巧运输，需在肝脏25-哲化酶CYP2R1和肾脏1 a -哲化酶 CYP27B1的催化下经2次酶促经化反应形成最终的活性代谢产物1，25 -二哲基维生素 03(1，化-(0H)2VD)，与维生素D受体（vitamin D rec巧tor，VDR)结合发挥生物学功能。VDBP 由肝脏合成，分子量为51335,含有458个氨基酸残基，与维生素D具有高度亲和力。每个 VDBP分子都含有一个VD结合位点，其结合氨基酸位点为35-49氨基酸序列构成的结构域。 因此，在血液中，VDBP存在两种形式，即与VD及其代谢物亲和结合的结合型VDBP (占VDBP 总量的5% )和VD结合位点空缺的游离型VDBP。 人体的维生素D的活性形式是1，25二哲维生素D3 (1, 25-hy化oxyvitamin D3)，是 因为它是在1位和25位有两个哲基，其中25哲化是在肝脏完成的，1哲化是在肾脏完成的， 而25哲VD3可W作为机体缺乏VD的指示指标。VD的主要功能是促进小肠巧磯的吸收，促 进肾脏对巧磯的重吸收，调节体内巧磯代谢。所W，缺乏VD即使膳食中巧的量足够多，也会 有缺巧现象的。不过，VD不易缺乏，因为人体内是可W合成的，晒晒太阳就行了，但是有严 重肝、肾疾病的人就例外了，因为上述的VD3的哲化过程无法进行。 1，25(0H)2VD在体内的半衰期大约是化，其浓度比25-0H VD低约1000倍，并受血 清PTH、Ca2+及磯酸盐浓度的严格调控。1，25(0H) 2VD水平不能反映人体维生素D状态，但是 其升高与甲状腺机能亢进有关。因此，测定血清1，25 (0H) 2VD含量对获得性或遗传性25-0H VD和磯酸盐代谢素乱（如慢性肾病、遗传性磯酸盐缺乏素乱、肿瘤引起的骨软化、缺乏性何 偿病、慢性肉芽肿形成障碍）辅助诊断有重要价值。 目前，用于血清1，25 (0H)2VD测定方法有HPLC、LC-MS/MS、RIA、化IA等方法，其中 由于HPLC、LC-MS/MS样本处理难、检测成本高等原因，在临床应用较少。目前，由于侧向层 析技术的灵敏度高、特异性好、操作简便、检测成本低等特点，应用越来越广。 侧向层析技术，按其原理可分为两类，一类是W酶促反应显色为基础，W显色高度 来定量；另一类则使用着色标记物如乳胶微粒、胶体砸、胶体金W及脂质体等，层析时，标记 物与待测物反应形成的复合物被相应的固定在层析材料上的配体捕获而富集显色，根据层 析材料上显色条带的有无或多少来定性或定量。W酶促反应显色为基础的免疫层析技术由 于待测物的定量是W试纸条上W酶活性为依据，故其测量结果受酶稳定性W及样品基质、 抑值、温育时间和温度等环境因素的影响。 [000引免疫胶体金技术是继=大标记技术（巧光素、放射性同位素和酶）后发展起来的 固相标记免疫测定技术。80年代出现在临床诊断领域的胶体金免疫层析（colloidal gold immunoc虹omatography assay, GICA)快速诊断试纸条是建立在金标免疫渗滤基础上的一 种免疫检测技术。它具有简单快速、结果明确、无需复杂操作技巧和特殊设备、灵敏度高、携 带方便等优点，己成为临床实验诊断领域发展的一个新方向。因此，开发25-哲基维生素D 测试试纸条在维生素D缺乏症的辅助诊断中有重要价值。 但是，在血清中80%w上25-0H VD与VDBP结合，通常的免疫检测方法是利用样本 预处理液（如有机溶剂等蛋白变性剂）处理，将25-0H VD从VDBP解离释放后测定；或采用 酸性的反应体系（pH4. 0-6. 0)进行测定；或采用高浓度的VDBP亲和结合物竞争释放25-0H VD，该些方法存在样本稀释过程或25-0H VD释放不完全或亲和结合物的亲和性等因素限 审IJ。因此，研发一种无需样本预处理、检测结果准确的25-哲基维生素D含量测定方法成为 目前的难题。
技术实现思路
根据上述领域的不足和需求，本专利技术提供一种W 25-哲基维生素D为目标物的检 测试纸条，所述试纸条利用侧向层析原理，无需样本前处理，直接测定样本中25-0H VD的含 量。 本专利技术请求保护的技术方案如下： 一种用于25-哲基维生素D定量检测的试纸条，包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水垫 及PCV衬板；所述样本垫、结合垫、NC膜和吸水垫按样品层析方向依次设置于PCV衬板上； 其特征在于；所述样本垫采用具有网状结构且可W捕获粒径为2. 0-2. 6 ym之间 的颗粒物的纤维垫，且包被有25-哲基维生素D活化的乳胶微粒和/或1，25-二哲基维生 素D活化的乳胶微粒； 所述结合垫上涂布有胶体金标记的抗25-哲基维生素D单克隆抗体和胶体金标记 的抗人维生素D结合蛋白单克隆抗体； 所述NC膜上包括检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫，包被有25-哲基 维生素D-牛血清白蛋白偶联物和重组人维生素D结合蛋白，所述质控线靠近吸水垫，包被 有羊抗鼠抗体。 所述样本垫上25-哲基维生素D活化的乳胶微粒和/或1，25-二哲基维生素D活 化的乳胶微粒的包被本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于25‑羟基维生素D定量检测的试纸条，包括样本垫、结合垫、NC膜、吸水垫及PCV衬板；所述样本垫、结合垫、NC膜和吸水垫按样品层析方向依次设置于PCV衬板上；其特征在于：所述样本垫采用具有网状结构且可以捕获粒径为2.0‑2.6μm之间的颗粒物的纤维垫，且包被有25‑羟基维生素D活化的乳胶微粒和/或1，25‑二羟基维生素D活化的乳胶微粒；所述结合垫上涂布有胶体金标记的抗25‑羟基维生素D单克隆抗体和胶体金标记的抗人维生素D结合蛋白单克隆抗体；所述NC膜上包括检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫，包被有25‑羟基维生素D‑牛血清白蛋白偶联物和重组人维生素D结合蛋白，所述质控线靠近吸水垫，包被有羊抗鼠抗体。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：肖智，焦守恕，李全，
申请(专利权)人：同昕生物技术北京有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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