一种毒品检测酶联免疫试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了属于违禁品检测分析技术领域的一种检测尿液、唾液、血液、毛发中毒品的酶联免疫试剂盒及其检测方法。该试剂盒包含以下物质：毒品标准品溶液，毒品特异性抗体；包被有毒品特异性抗体的酶标板；毒品抗原酶标记物；显色剂；浓缩洗涤液；终止液和样品稀释液。本发明专利技术的酶联免疫试剂盒具有高特异性、高灵敏度、高准确度等特点，在毒品检测中发挥重要作用。

【技术实现步骤摘要】
-种毒品检测酶联免疫试剂盒及其检测方法
本专利技术属于违禁品检测分析
，具体涉及一种检测尿液、唾液、血液、毛发 中毒品的酶联免疫试剂盒及其检测方法。
技术介绍
在国际毒潮泛滥影响下，我国的毒品形势十分严峻，截止到2013年5月底的统计 数字，中国当前吸毒群体222万人，此外还有不少隐性吸毒人员。因此，为了预防和惩治毒 品违法犯罪行为，保护公民身也健康，维护社会秩序的工作，建立准确可靠、灵敏度高的毒 品检测是十分必要的。 鸦片类毒品大都有致幻性和麻醉性，具有镇痛作用，主要包括鸦片、大麻、海洛因、 吗啡、6-单己醜吗啡、可待因等。苯丙胺类毒品是指W苯丙胺为母体的一类人工合成的化合 物。在我国管制的精神药品中，属于该类毒品的有苯丙胺、甲基苯丙胺（冰毒）、还有其苯 环上的取代衍生物3,4-亚甲二氧基苯丙胺、3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺（摇头丸）等。K 粉，医学上称氯胺丽，属于静脉全麻药品，具有一定的精神依赖性。K粉成癒后，在毒品作用 下，吸食者会疯狂摇头，很容易摇断颈椎；同时，疯狂的摇摆还会造成也力、呼吸衰竭。吸食 过量或长期吸食，可W对也、肺、神经都造成致命损伤，对中枢神经的损伤比冰毒还厉害。据 近年国家食品药品监督管理局发布的《药物滥用监测报告》显示，我国目前主要受到的是W 吗啡、海洛因、杜冷下等为主的传统毒品和W冰毒、摇头丸、K粉、咖啡因等为主的新型毒品 的危害。 目前报道用于检测毒品的方法主要有气相色谱法（GC)、气相色谱-质谱联用法 佑C / MS)、高效液相色谱（-HPLC)、高效液相色谱-质谱联用法（HPLC / MS)、毛细管电泳 法（CE) W及免疫分析法（IA)等。色谱法是目前国际上普遍采用的检测方法，灵敏度高、准 确性好，常作为药物残留检测的确认方法，但其对仪器和操作人员要求都较高，成本也比较 高，一个样品检测要几百元，检测时间也很长，不利于在基层单位推广使用。免疫分析法是 国际上通用的一种毒品筛选方法。目前常用的胶体金法受所用的生物制剂的影响，假阳性 出现的概率很高，而且由于胶体金法灵敏度低，颜色判断有人为因素致使准确性差。 因此建立一种快速、灵敏、准确，并可W大批量应用于毒品检测的方法是具有非常 重要的现实意义的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测尿液、唾液、血液、毛发中毒品的酶联免疫试剂 盒，解决目前的检测毒品方法快而不灵，灵而不快的技术问题。 本专利技术的目的还在于提供一种应用上述试剂盒进行毒品检测的方法。 -种毒品检测酶联免疫试剂盒，包含W下物质：毒品标准品溶液，毒品特异性抗 体；包被有毒品特异性抗体的酶标板；毒品抗原酶标记物；显色剂；浓缩洗涂液；终止液和 样品稀释液。 所述毒品为吗啡，氯胺丽，大麻，海洛因，6-单己醜吗啡，可待因或苯丙胺类化合 物。 所述苯丙胺类化合物为苯丙胺，甲基苯丙胺，3,4-亚甲二氧基苯丙胺或3,4-亚甲 二氧基甲基苯丙胺。 所述毒品特异性抗体为用毒品与载体蛋白通过碳化二亚胺法合成的偶联物，所述 载体蛋白为鼠血清蛋白、牛血清蛋白、甲状腺蛋白、兔血清蛋白或血蓝蛋白。 所述毒品抗原酶标记物中的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磯酸醋酶。 所述显色剂为邻苯二胺或四甲基联苯胺。 所述浓缩洗涂液为含有0. 5%吐温-20,0. Olmol / L的磯酸盐缓冲液；终止液为 l-2mol / L的硫酸，盐酸或氨氧化轴缓冲液；样品稀释液为0. Olmol / L的磯酸盐缓冲液。 采用上述试剂盒进行毒品检测的方法，按照如下步骤进行： [001引 （1)样品前处理 当被检样品为尿液，唾液，血液时，直接进行检测；当被检样品为毛发时，先用甲 醇溶液清洗，清洗晒干后用剪刀剪成1-lOmm的片段，称取2-20mg的上述毛发片段，加入 0. 5-2ml甲醇溶液，70-75C水浴两小时后静止冷却至室温，取上清液37C氮吹干，残渣用 100-200U1样品稀释液稀释，振荡器上振荡充分溶解，待检测； (2)向包被有毒品特异性抗体的酶标板上，加入样品溶液或毒品标准品溶液W及 毒品抗原酶标记物溶液室温赔育15-30分钟，待测样品中的毒品与酶标记的毒品竞争酶标 板上的毒品抗体，洗板3次，通过洗涂除去未结合的酶标记物，加显色剂室温赔育5-15分 钟，显色后用终止液终止，酶标仪测定样品的吸光度值； [001引 做步骤似获得的吸光度值与样品中毒品的量呈负关系，与标准曲线比较即可 得出样品中毒品的浓度。 本专利技术的有益效果；本专利技术所述的毒品检测酶联免疫试剂盒可W定性、定量检测 尿液、唾液、血液、毛发中毒品的含量，试剂盒对样品的前处理要求低，样品前处理过程简 单，能同时快速检测大批样品；主要采用直接竞争酶联免疫测定法，将W前酶联免疫法中繁 琐的操作步骤进行精简、优化，主要试剂又W溶液的形式提供，可减少试剂盒的操作步骤， 为使用者节省时间并降低因操作步骤繁琐而造成的误差；同时可W根据酶标板上的样品颜 色的深浅，与毒品标准品系列浓度的颜色进行比较，不需要仪器即可判断毒品的浓度范围， 在定性检测中，对仪器设备要求低，可实现现场的监控；试剂盒保持时间长、自动化程度高、 成本低、无放射性同位素污染，经过对试剂盒的精密度和准确度测试实验表明，本专利技术的酶 联免疫试剂盒具有高特异性、高灵敏度、高准确度等特点，将在毒品检测中发挥重要作用。 【附图说明】 图1为鸦片类检测标准曲线图。 图2为苯丙胺类检测标准曲线图。 图3为氯胺丽检测标准曲线图。 【具体实施方式】 下面结合附图和具体实施例对本专利技术做进一步说明。 实施例1试剂盒组分的制备 [002引 （1)抗原的合成 A.吗啡人工抗原的合成 称取吗啡原料500mg，加入50mL苯和Ig玻巧酸酢，加热回流她。装好蒸发装置， 蒸去苯。沉淀分别用无水己離、无水己醇洗涂，残留物真空干燥，即得到粉末状物质6-玻巧 酸-吗啡。称取上述粉末状物质20mg溶于10ml PBS缓冲液（磯酸盐缓冲液）中，加入30ul H己胺，再加入30ul氯甲酸异下醋，反应半小时。称取20mg BSA溶解于PBS缓冲液中，加入 上述反应液，揽拌反应过夜，透析3天，高速冷冻离也机离也，收集上清液，得到吗啡抗原。 B.甲基苯丙胺人工抗原的合成 称取甲基苯丙胺盐酸盐原料350mg溶于蒸觸水中，滴加Imol / L的化0H溶液至 甲基苯丙胺完全游离出来，加入无水Na2S〇4干燥过夜后，再加入氯仿萃取，分离出游离的甲 基苯丙胺油状物，溶于适量的无水己醇，加入约200mg的玻巧酸酢，冰浴冷却，加入约Ig无 水H氯化铅。混合物在冰浴下揽拌4她，然后在低于1(TC的条件下滴加6mol / L的盐酸水 解。直到凝结状的固体物质粘附在烧瓶壁上，分去二氯甲焼层。加适量的水，滴加碱液调至 pH = 14,氯仿萃取后蒸干即得。将产物溶于少量水中，加入13. 5mgNHS，20. 24m班DC，揽拌 化后完成。取18. 32m浊SA溶于2mlPBS(0. 025mol / L，抑=7. 4)中，揽拌中将之前完成 的溶液滴入其中，偶联化。最后在PBS透析液中低温透析3天，高速冷冻离也机本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，包含以下物质：毒品标准品溶液，毒品特异性抗体；包被有毒品特异性抗体的酶标板；毒品抗原酶标记物；显色剂；浓缩洗涤液；终止液和样品稀释液。

【技术特征摘要】
1. 一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，包含以下物质：毒品标准品溶液，毒品 特异性抗体；包被有毒品特异性抗体的酶标板；毒品抗原酶标记物；显色剂；浓缩洗涤液； 终止液和样品稀释液。2. 根据权利要求1所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述毒品为吗啡， 氯胺酮，大麻，海洛因，6-单乙酰吗啡，可待因或苯丙胺类化合物。3. 根据权利要求2所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述苯丙胺类化 合物为苯丙胺，甲基苯丙胺，3,4_亚甲二氧基苯丙胺或3,4_亚甲二氧基甲基苯丙胺。4. 根据权利要求1所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述毒品特异性 抗体为用毒品与载体蛋白通过碳化二亚胺法合成的偶联物，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、 牛血清蛋白、甲状腺蛋白、兔血清蛋白或血蓝蛋白。5. 根据权利要求1所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述毒品抗原酶 标记物中的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶。6. 根据权利要求1所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述显色剂为邻 苯二胺或四甲基联苯胺。7. 根据权利要求1所述一种毒品检测酶联免疫试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液 为...

【专利技术属性】
技术研发人员：高颖，魏建良，
申请(专利权)人：杭州优玛达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33