SV40LT基因诱导构建T淋巴细胞模型及其细胞库制造技术

本发明专利技术涉及用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库，以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外研究T淋巴细胞免疫机制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及SV40LT基因(猴肾病毒40大T抗原基因)诱导(介导)构建T淋巴细胞模型及其细胞库，主要用于医学免疫学研究领域，为开展T淋巴细胞或与T淋巴细胞相关的各种研究提供细胞模型并保存其科研资源。
技术介绍
人类血液中的有形成份分为红细胞、白细胞和血小板。其中的白细胞以中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞为主。淋巴细胞又分为T淋巴细胞(T细胞)和B淋巴细胞(B细胞)等。已知T细胞是由胸腺内的淋巴干细胞分化而成，是淋巴细胞中数量最多，功能最复杂的一类细胞。按其功能可分为三个亚群：辅助性T细胞、抑制性T细胞和细胞毒性T细胞。T细胞的细胞膜上有许多不同的标志，主要是表面抗原和表面受体。这些表面标志都是结合在细胞膜上的巨蛋白分子。T细胞是相当复杂的不均一体、又不断在体内更新、在同一时间可以存在不同发育阶段或功能的亚群。按免疫应答中的功能不同，又可将T细胞分成若干亚群，一致公认的有：辅助性T细胞(Helper T cells，Th)，具有协助体液免疫和细胞免疫的功能；抑制性T细胞(Supp本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(‑)DNA及SV40LTag DNA构建SV40LTag‑pcDNA3.1(‑)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导...

【技术特征摘要】
1.一种用于医学研究领域的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其主
要特征是按常规以T4DNA连接酶、BamHI、pcDNA3.1(-)DNA及SV40LTag DNA构建
SV40LTag-pcDNA3.1(-)重组子、以感受态大肠杆菌纯化重组子、以脂质体转染法将其导入体
外培养的T淋巴细胞，使重组子与细胞的DNA整合，以G418筛选的含阳性重组子的细胞，
作传代、扩大培养，筛选细胞形态、细胞生长曲线、染色体核型、裸鼠致瘤试验、转染细胞
DNA中SV40大T基因检测、mRNA表达产物测定及DNA序列测定结果符合永生化细胞生物特性
者作为T淋巴细胞模型冻存于液氮中，以此构建SV40LT基因介导T淋巴细胞模型及其细胞库，
以建立在体外长期传代培养T淋巴细胞的方法并用于体外(替代人体或动物直接试验)研究T
淋巴细胞免疫机制。
2.根据权利要求1所述的SV40LT基因诱导T淋巴细胞模型及其细胞库的构建，其特征
是所指细胞模型为(1)T淋巴细胞转染了SV40LT基因而成为可长期传代培养的永生化T淋巴
细胞模型；(2)T淋巴细胞模型的染色体核型为二倍体“46，XX”或“46，XY”；(3)细胞的
生长曲线如以培养时间为横轴，细胞数量为纵轴，在hepato ZYME-SFM无血清培养基中呈
“S”特征或“穹隆”形成；(4)细胞不能在软琼脂内生长(形成克隆)；(5)细胞为非恶化细
胞，裸鼠致瘤试验阴性；(6)因细胞的DNA中整合了SV40大T抗原基因，所以表达SV40大T
抗原mRNA产物；(7)体外连续培养6-8周(第55代)仍处于对数生长期；(8)能反复冻存、长
期传代培养；(9)用于研究T淋巴细胞的功能和免疫机制；⑩可再生...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁炳焕，黄荷凤，徐晨明，鲁林荣，袁武锋，张燕，
申请(专利权)人：翁炳焕，
类型：发明
国别省市：浙江;33