桑普逊链霉菌菌株、其分离方法及应用技术

本发明专利技术涉及微生物农药技术领域，具体提供一种桑普逊链霉菌菌株及其分离方法和培养方法，及通过该培养方法所得的桑普逊链霉菌培养物，及该桑普逊链霉菌菌株和桑普逊链霉菌培养物的应用和含有它们的农药。该桑普逊链霉菌菌株，保藏名称为桑普逊链霉菌(Streptomyces sampsonii)SY-FX-31，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M2014516，该菌株16S rRNA基因序列如序列表SEQ ID No.1所示，能够防治多种植物病害，且生长速度快、产孢量大、抑菌谱广，在土壤和植物体能迅速定殖。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物农药
，具体涉及一种桑普逊链霉菌菌株及其分离方法与应用。
技术介绍
微生物农药由于其绿色环保，不易产生抗药性的特性，在防治作物病虫害方面得到越来越广泛的重视和应用。微生物农药的推广和应用技术正逐渐趋于成熟，国家在生物防治领域的政策支持力度逐年加大，微生物农药的使用能克服化学农药对生态环境的污染并减少在农副产品中农药的残留，提升农副产品的品质和价格，既具有环境效益又具有经济效益。目前，市场上推广的主要微生物农药品种集中在芽孢杆菌属和假单胞菌属。链霉菌属是一类能产生抗生素的微生物菌属，作为农用杀真菌类在美国和欧洲登记的种为Streptomyces griseoviridis和Streptomyces lydicus，链霉菌属有望成为继芽孢杆菌属和假单胞菌属后另一类在生物防治领域广泛应用的微生物农药。
技术实现思路
本专利技术提供了一种新的能够防治多种植物病害，且生长速度快、产孢量大、抑菌谱广，在土壤和植物体能迅速定殖的桑普逊链霉菌菌株及其分离方法和培养方法，及通过该培养方法所得的桑普逊链霉菌培养物，及该桑普逊链霉菌菌株和桑普逊链霉菌培养物的应用和含有它们的农药。本专利技术的第一方面提供一种桑普逊链霉菌菌株(Streptomyces sampsonii)SY-FX-31，保藏名称为桑普逊链霉菌SY-FX-31(Streptomyces sampsonii)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址：武汉大学生命科学学院，保藏日期为：2014年10月27日，保藏编号为：CCTCC M 2014516，该菌株16S rRNA基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。该菌株具有以下生物学特性：(1)在高氏一号培养基生长，菌丝浅黄色，随着培养时间延长，菌丝颜色变深。(2)在察氏蛋白胨培养基生长，菌丝土黄色，菌落与培养基结合处出现橘色色素。(3)在玉米粉培养基生长菌丝浅黄色，后逐渐变为深黄色，在液体培养中呈浅黄色菌丝团。其16S rRNA基因序列测序结果表明SY-FX-31菌株的16S rRNA基因序列为序列表SEQ ID No.1中的核苷酸序列。根据测序结果与Genbank中链霉菌16S rRNA基因序列进行同源性比较，结果表明SY-FX-31菌属于链霉菌属(Streptomyces)中的桑普逊链霉菌(Streptomyces sampsonii)。本专利技术的第二方面提供用于分离上述桑普逊链霉菌菌株的分离方法，其步骤包括：S1，从河底采集泥土，加无菌水振荡后使泥土与无菌水混合散开，静止使其澄清，取上清液；S2，采用平板划线法分离纯化桑普逊链霉菌菌株：将步骤S1所得上清液稀释，采用不同稀释浓度的稀释液涂布于高氏一号培养基平板上于10-40℃培养2-7d后，挑取单菌落分离纯化得桑普逊链霉菌菌株；其中，高氏一号培养基的成分包括：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4、FeSO4、MgSO4及水，pH值为7.4-7.6。其中，平板划线法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，可以采用反复分离多次得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的形式有多种，具体可以为将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线，第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落，平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。本专利技术的第三方面提供上述桑普逊链霉菌菌株的培养方法，其步骤包括S1，将上述桑普逊链霉菌菌株于保藏培养基中，在25-33℃下活化12-24h；S2，将活化后的菌株于种子培养基中，于25-33℃，100-150r/min培养1-2天，得到种子液；S3，将所得种子液以体积百分含量4-8％接种比例接种于发酵培养基中，在25-33℃下，100-150r/min振荡培养2-4天得发酵液；其中，保藏分离培养基为高氏一号培养基，所述高氏一号培养基的成分包括：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4、FeSO4、MgSO4及水，pH值为7.4-7.6；种子培养基为察氏蛋白胨培养基，所述察氏蛋白胨培养基的成分包括：蔗糖、蛋白胨、FeSO4、MgSO4、KCl、K2HPO4及水；发酵培养基为玉米粉培养基，所述玉米粉培养基的成分包括：玉米粉、蔗糖、蛋白胨、淀粉、酵母膏、NaCl、K2HPO4、MgSO4、CaCO3及水。本专利技术的第四方面提供一种桑普逊链霉菌培养物，由上述培养方法制得。本专利技术的第五方面提供上述桑普逊链霉菌菌株和/或其培养物在防治植物病害中的应用。本专利技术的第六方面提供一种农药，该农药包括上述桑普逊链霉菌菌株和/或其培养物。本专利技术所得的桑普逊链霉菌(Streptomyces sampsonii)属于链霉菌属，经过室内生物活性测定发现其对小麦赤霉，水稻纹枯等十几种植物病原菌均有抑制作用。且所发现的桑普逊链霉菌生长速度快、产孢量大、抑菌谱广，在土壤和植物体能迅速定殖。不仅能够防治多种植物病害，而且能够提高植物抗性，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用，是一种有应用前景的生物防治菌株。具体实施方式为了使本专利技术所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供了一种桑普逊链霉菌菌株，保藏名称为桑普逊链霉菌(Streptomyces sampsonii)SY-FX-31，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2014516，该菌株16S rRNA基因序列如序列表SEQ ID No.1所示，属于链霉菌属，不仅能够防治多种植物病害，而且能够提高植物抗性，对提高作物产量和提升品质均具有积极作用，是一种有应用前景的生物防治菌株。本专利技术同时提供了用于分离上述桑普逊链霉菌菌株的分离方法，其步骤包括：S1，从河底采集泥土，加无菌水振荡后使泥土与无菌水混合散开，具体可以为将泥土加入内装无菌水和玻璃珠的容器中，于摇床上振荡一段时间使泥土散开本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种桑普逊链霉菌菌株，保藏名称为桑普逊链霉菌(Streptomyces sampsonii)SY‑FX‑31，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2014516，该菌株16S rRNA基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种桑普逊链霉菌菌株，保藏名称为桑普逊链霉菌(Streptomyces 
sampsonii)SY-FX-31，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：
CCTCC M 2014516，该菌株16S rRNA基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。
2.一种用于分离权利要求1所述的桑普逊链霉菌菌株的分离方法，其
特征在于，包括步骤：
S1，从河底采集泥土，加无菌水振荡后使泥土与无菌水混合散开，静
止使其澄清，取上清液；
S2，采用平板划线法分离纯化桑普逊链霉菌菌株：将步骤S1所得上清
液稀释，采用不同稀释浓度的稀释液涂布于高氏一号培养基平板上于
10-40℃下培养2-7d后，挑取单菌落分离纯化得桑普逊链霉菌菌株；
所述高氏一号培养基的成分包括：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4、
FeSO4、MgSO4及水，pH值为7.4-7.6。
3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述桑普逊链霉菌
菌株在高氏一号培养基生长，菌丝为浅黄色，随着培养时间延长，菌丝颜
色变深；
所述高氏一号培养基的成分包括：可溶性淀粉5-40g，KNO30.1-5g，
NaCl 0.1-3g，K2HPO4·3H2O 0.1-3g，FeSO4·7H2O 0.01-1g，MgSO4·7H2O 0.1-3g
及水1-10L。
4.根据权利要求2所述的桑普逊链霉菌菌株的分离方法，其特征在于，
所述稀释液的浓度包括将上清液稀释10-2、10-3、10-4倍。
5.一种如权利要求1所述的桑普逊链霉菌菌株的培养方法，其特征在
于，包括步骤：
S1，将权利要求1所述的桑普逊链霉菌菌株于保藏培养基中，在25-33℃
下活化12-24h；
S2，将活化后的菌株于种子培养基中，于25-33℃，100-150r/min培养
1-2天，得到种子液；
S3，将所得种子液以体积百分含量4-8％接种比例接种于发酵培养基中，
在25-33℃下，100-150r/min振荡培养2-4天得发酵液；
所述保藏...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥维昌，孙慧，李秀颖，李旭，李丹，盛志，王宇，
申请(专利权)人：沈阳化工研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21