本发明专利技术涉及一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变样品制备试剂盒。具体的涉及一种应用大规模平行测序平台技术检测拟盐皮质激素增多症相关基因的产品，该试剂盒包括：A.独特设计并制备捕获探针，针对基因HSD11B2全部外显子片段；B.设计独特带有标签序列的接头；C.通用引物对探针序列进行PCR扩增；D.设计独特的混合后目的片段的捕获操作。这个方法和试剂盒制备的大规模平行测序平台样品通量大、效率高、操作简便，极大地降低了测序检验成本。
【技术实现步骤摘要】
一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学诊断和生物技术，涉及一种检测拟盐皮质 激素增多症相关基因突变的体外诊断试剂盒，是一种应用于新一代测序平台技术的一种拟 盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒。 技术背景 拟盐皮质激素增多症（Apparent mineralocorticoid excess，ΑΜΕ)AME 患者体内 并不存在盐皮质激素过多，恰恰相反，这类患者血压异常升高的原因是糖皮质激素过多，主 要是皮质醇增多所致。 人体盐皮质激素受体和糖皮质激素受体同源性高达94%。体外实验证明，糖皮质 激素和盐皮质激素对醛固酮受体具有同样的亲和性。考虑到血中糖皮质激素浓度远远高于 盐皮质激素，因此体内必然存在一种机制以保证盐皮质激素和其受体特异结合，这种机制 便是 11 β -轻固醇脱氧酶（11 β -hydroxysteroid dehydrogenase，11 β -HSD)对皮质醇的 灭活作用。 11 β-HSD有两种异构体，11 β-HSD I主要存在于肝脏，11 β-HSD II主要存在于肾 脏和胎盘。AME是由于11 β-HSD II缺陷造成的。已报道的11 β-HSD II基因突变多达十 几种，分别位于第3、4、5外显子和内含子3。 HSD11B2基因位于16q22,该基因发生突变可导致11 β -HSD II酶无活性或活性 降低，大量皮质醇不能被转化成皮质酮，大量蓄积的皮质醇占据远端肾小管的盐皮质激 素受体，激活转录因子及血清糖皮质类固醇激酶，使泛素连酶Nedd4-2磷酸化，磷酸化的 Nedd4-2不能与ENaC结合进而灭活ENaC，导致ENaC活性升高，钠重吸收增加，出现类似醛 固酮增高的临床表现-高血压和低血钾，即称类盐皮质激素增多症（AME)。HSD11B2基因突 变不仅导致基因表达降低或对底物的亲和力降低，也可导致11 β-HSD II蛋白酶的稳定性 降低，半衰期显著缩短。 拟盐皮质激素增多症是一种常染色体隐性遗传性疾病，可导致高血压和低血钾， 糖皮质激素治疗有效。该病是由于HSD11B2基因突变所致，该基因可编码肾2型11 β羟 固醇脱氢酶同工酶。正常情况下，该酶可将血循环中的皮质醇灭活为较低活性的代谢产物 皮质酮，而基因的失活性突变可导致肾皮质醇浓度升高。皮质醇浓度较高时可激活盐皮 质激素受体，从而产生类醛固酮效应，出现低钾血症、高血压和高钠血症等。其他疾病，如 Liddle综合征，也可表现出拟盐皮质激素增多症的相似症状，可通过计算尿游离皮质醇/ 尿游离皮质酮比值做出诊断，由于拟盐皮质激素增多症患者的皮质酮水平降低，因此该值 较正常人偏高。另外，还可以通过患者对于留钾类利尿剂的反应对这两种综合征做鉴别诊 断，Liddle综合征的患者只对与上皮钠离子通道结合的利尿剂有效，而拟盐皮质激素增多 症的患者除了该类利尿剂，还可通过盐皮质激素受体结合剂被纠正。拟盐皮质激素增多症 极为罕见，目前世界范围内报道的病例不超过100例。 (原文： Apparent mineralocorticoid excess syndrome Apparentmineralocorticoidexcess (AME) isan autosomal recessive[1]disorder causing hypertension and hypokalemia(abnormally low levels of potassium). The condition responds to glucocorticoid treatment. It results from mutations in the HSD11B2 gene, which encodes the kidney isozyme of 11β -hydroxysteroid dehydrogenase type 2. In an unaffected individual, this isozyme inactivates circulating cortisol to the less-active metabolite cortisone. The inactivating mutation leads to elevated local concentrations of cortisol in the kidney. Cortisol at high concentrations can cross-react and activate the mineralocorticoid receptor (MR)， leading to aldosterone-like effects in the kidney. This is what causes the hypokalemia, hypertension, and hypernatremia associated with the syndrome. Other conditions such as Liddlei s Syndrome can mimic the clinical features of AMEj so diagnosis can be made by calculating the ratio of free urinary cortisol to free urinary cortisone. Since AME patients create less cortisone, the ratio will much be higher than non-affected patients. [2] Alternatively, one could differentiate between the two syndromes by administering a potassium-sparing diuretic. Patients with Liddlei s Syndrome syndrome will only respond to a diuretic that binds the ENaC channel, whereas those with AME will respond to a diuretic that binds to ENaC or the mineralcorticoid receptor. AME is exceedingly rare, with less than 100 cases recorded worldwide. [2] ) 对于拟盐皮质激素增多症综合征的鉴别诊断传统的方法主要依靠生化检查和影 像学检查。这些手段存在很大的缺点： 1.检查种类多； 2.灵敏度和特异度低； 3.易受药物和精神状况等因素的影响； 4.检测时间要求苛刻； 基因诊断的优势在于： 1.方便，安全，快捷：仅抽取2-4毫升血； 2.任何时间都可以检查； 3.不限制饮食，服药，任何身体状况都可以检测； 4.相本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒，其包括：捕获目的HSD11B2基因全部外显子片段以及邻近50bp的非编码区的探针；用于扩增待测片段的通用引物；测序接头序列；缓冲液；dNTP；高保真聚合酶；链霉素磁珠。
【技术特征摘要】
1. 一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒，其包括：捕获目的HSD11B2 基因全部外显子片段以及邻近50bp的非编码区的探针；用于扩增待测片段的通用引物；测 序接头序列；缓冲液；dNTP ;高保真聚合酶；链霉素磁珠。2. 根据权利要求1所述一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒，全部 探针在3'采用生物素修饰。3. 根据权利要求1所述一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒这种 探针是寡聚核糖核酸（RNA)，或寡聚脱氧核糖核酸（DNA)，但是不仅限于RNA和DNA，可以包 括生物素、荧光或者同位素等修饰后的DNA或者RNA。4. 根据权利要求1所述一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒的探 针是结合在磁珠上的，或结合在载玻片上，但不仅限于这些介质。5. 根据权利要求1所述一种检测拟盐皮质激素增多症相关基因突变的试剂盒的探 针针对目标区域以高密度叠瓦式设计，探针序...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘哲，
申请(专利权)人：百世诺北京医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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