一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液及其制备和应用，中草药为五倍子，通过抑制多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌筛选试验，五倍子可以抑制多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌生长，运用枯草芽孢杆菌AP139对五倍子进行发酵，在动物养殖舍中进行喷雾，发酵后中草药对空气中多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌生长具有显著的抑制特性，效果优于枯草芽孢杆菌AP139单独发酵组和中草药对照组，具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液及其制备和应用
本专利技术属于微生物发酵杀菌剂领域，具体涉及一种中草药五倍子的枯草芽孢杆菌 发酵液及其制备方法，和其用于抑制多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的应用。
技术介绍
多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌是畜、禽、野生动物和人类的一种重要共患性病 原体，主要通过呼吸道传播。多杀性巴氏杆菌可引发禽霍乱、猪肺疫和牛出血型败血症等， 产毒多杀性巴氏杆菌还可引起猪萎缩性鼻炎，金黄色葡萄球菌可引起奶牛乳腺炎、食品污 染、伤口化脓等。金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌遍布空气、水、人畜排泄物，在畜禽养殖 场中普遍存在多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌，在不使用抗生素的畜禽舍发病率较高。 随着畜禽养殖集约化和规模化程度不断提高，养殖场空气质量逐渐降低，多杀性 巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌引起动物发病的概率和损害程度不断增加。目前，养殖场对多 杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌引起的疾病进行控制主要通过抗生素进行预防和治疗。然 而，抗生素的大量使用引起内源性感染和二重感染、细菌耐药菌株的产生、畜禽免疫力下降 和畜产品及环境中残留引起二次污染等一系列严重问题，很多国家和地区比如欧盟和韩国 都已经禁止使用抗生素。因此，如何在对人和环境影响较小或不影响的条件下，有效预防多 杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的感染与传播，是一个急需解决的问题。 本专利技术研制的中草药枯草芽孢杆菌发酵液能有效抑制畜禽养殖场中多杀性巴氏 杆菌和金黄色葡萄球菌的生长，降低畜禽养殖场多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌发病 率，减少常规消毒剂的使用，具有环保、无毒副作用等优点，在我国养殖业生产中具有良好 的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种中草药五倍子的枯草芽孢杆菌发酵液及其制备和 应用方法，该发酵液能显著的抑制养殖舍中多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的生长繁殖， 降低养殖场由多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌引起的发病率，减少畜禽养殖场消毒剂和 抗生素的使用。 -种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法：由保藏编号为CCTCCN0:M 2014053的枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)AP139和中草药五倍子进行液体发酵培养 制成。 上述方法发酵培养后枯草芽孢杆菌含量为108CFU/ml-109CFU/ml。 上述方法中五倍子添加质量比例为液体发酵培养基的1-5%。 上述方法具体是将经过摇瓶培养所得到的枯草芽孢杆菌AP139液体培养液，按照 液体发酵培养基体积百分比1-5%接种量，接种到发酵罐中，液体发酵培养基成分及质量百 分比为：细菌学蛋白胨1%、氯化钠0. 5%、葡萄糖1%，七水硫酸镁1%，五倍子粉1-5%，pH 值自然；发酵条件为：装液量体积百分比40-70%，发酵温度30-40°C，pH值自然，发酵时间 24-36h，转速，200-400r/min。 上述方法发酵前先将保存的枯草芽孢杆菌AP139进行复活： 枯草芽孢杆菌AP139在LB固体培养基上，在恒温生化培养箱中进行划线培养， 培养温度30-37°C，培养时间18-24h ;LB固体培养基成分及质量百分比为：细菌学蛋白胨 1 %、酵母浸出物〇? 5%、氯化钠0? 5%、琼脂粉L 5%，pH值6. 8-7. 2。 然后从LB固体培养基上挑取复活的枯草芽孢杆菌AP139单个克隆株至装有100 毫升LB液体培养基的500毫升锥形瓶中，在恒温生化摇床中进行培养，得到枯草芽孢杆菌 AP139液体培养液，培养温度30-37°C，转速180-220r/min，培养时间18-24h，LB液体培养基 成分及质量百分比为：细菌学蛋白胨1 %、酵母浸出物〇. 5%、氯化钠0. 5%，pH值6. 8-7. 2。 上述方法使用的中草药五倍子在烘箱中烘干，烘干温度75-80°C，烘干时间1-2 天；用粉碎机粉碎至300目备用。 一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液，是由上述的方法制备而成的。 所述的中草药的枯草芽孢杆菌发酵液用于抑制多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球 菌，或者用于制备抑制多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的制剂。具体是用于制备养殖舍 消毒的制剂或者动物饲料的添加剂。 将所述枯草芽孢杆菌中草药发酵液制备成溶液（枯草芽孢杆菌含量为5 X IO8CFU/ ml)，1000倍稀释后在养殖舍中进行喷雾，喷雾后养殖舍枯草芽孢杆菌AP139的浓度为 5X 105CFU/m3,喷雾后，养殖舍中的多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌的含量显著降低。 本专利技术的有益效果在于： 本专利技术的中草药五倍子的枯草芽孢杆菌发酵液能通过抑制空气多杀性巴氏杆菌 和金黄色葡萄球菌生长繁殖，降低多杀性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌发病率和危害程度。 本专利技术枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)AP139的筛选 从动物肠道中分离得到200多株芽孢杆菌，分别对这200多株芽孢杆菌进行大肠 杆菌、金黄色葡萄球菌、副伤寒沙门氏菌、巴氏杆菌439 (低毒巴氏杆菌）、巴氏杆菌2010 (中 毒巴氏杆菌）、巴氏杆菌2011 (强毒巴氏杆菌）抑菌试验，结果芽孢杆菌139菌株对巴氏杆 菌的抑制效果最佳，达到18-25_，芽孢杆菌139菌株经生化及分子生物学鉴定为枯草芽孢 杆菌，并将其命名为枯草芽孢杆菌AP139。 表1、部分芽孢杆菌菌株对巴氏杆菌及其它致病菌的抑制效果 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：由保藏编号为CCTCC NO:M 2014053的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AP139和中草药五倍子进行液体发酵培养制成。

【技术特征摘要】
1. 一种中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：由保藏编号为CCTCC NO:M 2014053的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)AP139和中草药五倍子进行液体发酵 培养制成。2. 根据权利要求1所述的中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：发 酵培养后枯草芽孢杆菌含量为l〇8_l〇9CFU/ml。3. 根据权利要求1所述的中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：五 倍子添加质量比例为液体发酵培养基的1-5%。4. 根据权利要求1所述的中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：将 经过摇瓶培养所得到的枯草芽孢杆菌AP139液体培养液，按照液体发酵培养基体积百分比 1-5%接种量，接种到发酵罐中，液体发酵培养基成分及质量百分比为：细菌学蛋白胨1%、 氯化钠0. 5%、葡萄糖1 %，七水硫酸镁1 %，五倍子粉1-5%，pH值自然；发酵条件为：装液 量体积百分比40-70%，发酵温度30-401：，口11值自然，发酵时间24-3611，转速，200-4001'/ min〇5. 根据权利要求4所述的中草药的枯草芽孢杆菌发酵液的制备方法，其特征在于：发 酵前先将保存的枯草芽孢杆菌AP139进行复活： 枯草芽孢杆菌AP139在LB固体培养基上，在恒温生化培养箱中进行划线培养，培养温 度30-37°C，培养时间18-24h ;LB固体培养基成分...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒燕，王升平，刘惠知，郭照辉，张德元，邬理洋，周映华，胡新旭，高书锋，周小玲，缪东，曾发姣，
申请(专利权)人：湖南省微生物研究院，
类型：发明
国别省市：湖南;43