本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体地，本发明专利技术涉及一种受黄嘌呤调控的启动子A及其重组表达载体及其应用。本发明专利技术的受黄嘌呤调控的启动子A，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的用于黄嘌呤诱导的DNA片段，包括上述受黄嘌呤调控的启动子A、调控蛋白HucR的编码基因、转运蛋白YgfU的编码基因、驱动调控蛋白HucR的编码基因和转运蛋白YgfU的编码基因表达的启动子CP6以及红色荧光蛋白基因，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术通过改造大肠杆菌lac启动子-35区和-10区，得到一个新的启动子，该启动子可在调控蛋白HucR和转运蛋白YgfU的配合下，利用黄嘌呤诱导目的蛋白的表达。
【技术实现步骤摘要】
一种受黄嘌呤调控的启动子A及其重组表达载体和应用
本专利技术涉及分子生物学领域，具体地，本专利技术涉及一种受黄嘌呤调控的启动子A及其重组表达载体及其应用。
技术介绍
在合成生物学蓬勃发展的今天，研发受不同类型诱导物开启的调控元件，灵敏、实时地调节代谢流，有助于设计合理有效的代谢通路，对最终目的产物的高效合成具有重要意义。如Keasling等人通过设计大肠杆菌脂肪酸代谢中间关键代谢产物的转录调控元件而构建的动态调节感应系统（Dynamicsensor-regulatorsystem,DSRS），最终将脂肪酸转化生成生物柴油的生产能力提高了3倍（Designofadynamicsensor-regulatorsystemforproductionofchemicalsandfuelsderivedfromfattyacids，NatureBiotechnology,2012）。大肠杆菌的乳糖操纵子作为经典的启动子元件已被深入研究。许多启动子的构建都是在乳糖操纵系统的功能元件上改造而成。如tac启动子和trc启动子，均由色氨酸启动子的-35区和lac启动子的-10区组合拼接而成，改造后的启动子较之lac启动子具有更高的表达效率。而T7启动子则利用安慰诱导物异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）来调控T7RNA聚合酶的表达，进而开启T7启动子系统表达下游重组蛋白；这一技术已被Novagen等公司研发出系列商业化载体，作为异源蛋白的高表达载体。具强耐辐射特性的极端微生物耐辐射球菌（Deinococcusradiodurans）的基因组分析揭示了该菌抗逆特性相关的部分功能组件。其中，对编码区dr1159编码的调控蛋白（hypotheticaluricaseregulator，HucR）的研究显示，HucR可通过形成蛋白二聚体的形式，既能结合于其自身编码序列的启动子区域，也能结合于与其自身编码序列方向相反的尿酸酶编码序列的启动子区域（hucO）；当与尿酸或黄嘌呤结合后，HucR蛋白结构发生变化，从DNA结合位点解离，从而开启下游基因的表达；因此，HucR调控系统成为耐辐射球菌根据环境情况变化，有效调控HucR蛋白本身及改善外界胁迫环境的系统。其中，黄嘌呤是嘌呤代谢、咖啡因等生物碱代谢及微生物应对外界胁迫环境的中间代谢产物的节点。因此，设计对黄嘌呤含量有效灵敏的检测系统有助于设计生物合成（尤其是微生物合成）嘌呤类药物、生物碱等代谢通路，有助于构建上述代谢通路中关键酶的高通量筛选方法，有助于微生物快速灵敏的对外界胁迫环境的应激反应等。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种受黄嘌呤调控的启动子A。本专利技术的另一目的是提供一种用于黄嘌呤诱导的DNA片段。本专利技术的再一目的是提供一种用于黄嘌呤诱导表达蛋白的重组表达载体。本专利技术的再一目的是提供包括上述重组表达载体的重组菌株。本专利技术的再一目的是提供一种受黄嘌呤诱导表达蛋白的转基因细胞系。本专利技术的再一目的是提供上述启动子A、DNA片段、重组表达载体、重组菌株或转基因细胞系的应用。本专利技术的受黄嘌呤调控的启动子A，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示：tttacataggtagacatctaagtatatgttgtgtggaaccgatttaataaaacaattt58本专利技术的用于黄嘌呤诱导的DNA片段，其中，所述DNA片段包括权利要求1所述的受黄嘌呤调控的启动子A、调控蛋白HucR的编码基因、转运蛋白YgfU的编码基因、驱动调控蛋白HucR的编码基因和转运蛋白YgfU的编码基因表达的启动子CP6以及红色荧光蛋白基因，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示：tttacataggtagacatctaagtatatgttgtgtggaaccgatttaataaaacaatttca60cacaggaaacagctatgaccatgattacgccaagcttgcatgcctgcaggtcgactctag120tggatccccgggtaccgatggcctcctccgaggacgtcatcaaggagttcatgcgcttca180aggtgcgcatggagggctccgtgaacggccacgagttcgagatcgagggcgagggcgagg240gccgcccctacgagggcacccagaccgccaagctgaaggtgaccaagggcggccccctgc300ccttcgcctgggacatcctgtccccccagttccagtacggctccaaggtgtacgtgaagc360accccgccgacatccccgactacaagaagctgtccttccccgagggcttcaagtgggagc420gcgtgatgaacttcgaggacggcggcgtggtgaccgtgacccaggactcctccctgcagg480acggctccttcatctacaaggtgaagttcatcggcgtgaacttcccctccgacggccccg540taatgcagaagaagactatgggctgggaggcctccaccgagcgcctgtacccccgcgacg600gcgtgctgaagggcgagatccacaaggccctgaagctgaaggacggcggccactacctgg660tggagttcaagtccatctacatggccaagaagcccgtgcagctgcccggctactactacg720tggactccaagctggacatcacctcccacaacgaggactacaccatcgtggagcagtacg780agcgcgccgagggccgccaccacctgttcctgtagagatctccaactgagcgccggtcgc840taccattaccaacttgtctggtgtcaaaaataataggcctactagtcggccgtacgggcc900ctttcgtctcgcgcgtttcggtgatgacggtgaaaacctctgacacatgcagctcccgga960gacggtcacagcttgtctgtaagcggatgccgggagcagacaagcccgtcagggcgcgtc1020agcgggtgttggcgggtgtcggggctgggctagcttattctccatgctcatttttcttca1080gcttgcgcatcagaagccacatacgtactgtcctgacttttaaatctttatcagagacgg1140attccttcaccaggtcagcatgatgctgatagccattaaagaagacgttcagcacaacgg1200cgctaagggttgcgagcataatgccgctatgtagcagcggttgcagtacggccggtaact1260tagaaaagaaatcgtgagagagcgtcggagtcatgccaacgccgagactgatcgccacaa1320tatagaggttgtaacggttggtggtgtagttacagcgcgacagaattcgaatccctgtcg1380ccagtaccatgccgaacatcactagacca本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种受黄嘌呤调控的启动子A，其特征在于，所述启动子A的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
2013.07.10 CN 201310287829.X1.一种受黄嘌呤调控的启动子A，其特征在于，所述启动子A的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种用于黄嘌呤诱导的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段包括权利要求1所述的受黄嘌呤调控的启动子A、调控蛋白HucR的编码基因、转运蛋白YgfU的编码基因、驱动调控蛋白HucR的编码基因和转运蛋白YgfU的编码基因表达的启动子CP6以及红色荧光蛋白基因，所述DNA片段的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种用于黄嘌呤诱导表达蛋白的重组表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的启动子A。4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为质粒SHY，包括权利要求2所述的DNA片段，所述质粒SHY的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。5.包含权利要求3或4所述重组表达载体的重组菌株。6.根据权利要求5所述的重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁朝宁，邢建民，
申请(专利权)人：中国科学院过程工程研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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