本发明专利技术公开了一种磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体的制备方法。本发明专利技术公开一种制备磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体的方法，包括如下步骤：通过戊二醛将磺胺二甲基嘧啶与载体蛋白进行偶联，得到免疫原；用免疫原免疫蛋鸡，得到免疫蛋鸡的鸡卵；提取鸡卵卵黄中的磺胺二甲基嘧啶抗体。利用本发明专利技术公开的方法制备磺胺二甲基嘧啶抗体具有制备过程简单、经济，产量高等独特优点，在磺胺二甲基嘧啶残留检测中具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种磺胺二甲基嘧啶抗体的制备方法；特别涉及一种磺胺二甲基嘧啶 卵黄抗体的制备方法，属于抗体制备领域。
技术介绍
磺胺二甲基嘧啶（sulfamethazine，SMZ)为广谱抗菌剂，对大多数革兰氏阳性菌 和革兰氏阴性菌都具有抑制作用，临床上主要用于治疗各种溶血性链球菌、脑膜炎球菌、肺 炎球菌等感染所引发的呼吸道感染、肠道感染等细菌性疾病，因而在畜牧养殖中广泛使用， 在动物性食品中的残留现象较为严重。由于磺胺二甲基嘧啶在体内作用和代谢时间较长， 通过任何途径摄入的磺胺二甲基嘧啶都有可能在人体内蓄积，超过一定浓度时，就会对人 体造成损害，长期或者过量使用可造成泌尿系统、造血系统、神经系统等的损伤，甚至有致 癌的可能性。我国、欧盟等国家和机构均规定动物性食品中磺胺类药物总量及磺胺二甲基 嘧啶等单个药物的最高残留限量为IOOy g/kg。 卵黄抗体（Egg yolk antibody，IgY)是从免疫禽蛋卵黄中提取的特异性抗体，为 禽类所特有。卵黄抗体化学性质稳定，生产制备过程简单、经济，产量高，适合大规模生产， 并且制备时无需对动物进行采血，便于采集，不会对动物造成损伤，符合动物福利要求。但 是目前卵黄抗体在兽药残留检测领域应用较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。 本专利技术提供一种制备磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体的方法，包括如下步骤：通过戊二 醛将磺胺二甲基嘧啶与载体蛋白进行偶联，得到免疫原；用免疫原免疫蛋鸡，得到免疫蛋鸡 的鸡卵；提取鸡卵卵黄中的磺胺二甲基嘧啶抗体。 上述方法中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白。 上述任一所述的方法中，所述用免疫原免疫蛋鸡的方法如下：将所述免疫原用等 体积的弗氏完全佐剂乳化后首次免疫蛋鸡，再将首次免疫中所用的免疫原剂量减半，并用 等体积的弗氏不完全佐剂乳化后对首次免疫的蛋鸡进行加强免疫。 上述任一所述的方法中，所述免疫的方式为背部多点免疫。 上述任一所述的方法中，所述免疫原用PBS溶液溶解； 所述PBS溶液的浓度具体为0? 01mol/L。 上述任一所述的方法中，所述首次免疫的所述免疫原的剂量为300-400ug ; 所述加强免疫的次数为7-8次，具体为7次； 所述加强免疫具体为在首次免疫后第15天、29天、43天、55天、79天、91天以及 121天各进行一次加强免疫。 上述任一所述的方法中，所述提取鸡卵卵黄中的磺胺二甲基嘧啶抗体的方法为饱 和硫酸铵沉淀法，步骤如下： 1)将免疫蛋鸡的鸡卵中的卵黄与纯水混匀，调节pH至5. 0-5. 2,放置，得溶液I ; 2)将溶液1离心，收集上清，加入pH 7. 2-7. 4的饱和（NH4)2SO4水溶液，使饱和 (NH4) 2S04水溶液的体积占总体积的30-40%，放置，得溶液2 ; 3)将溶液2离心，取沉淀即得。 上述任一所述的方法中，所述卵黄和所述纯水的体积比为1:5-6,具体为1:6 ; 所述放置的条件为4°C -KTC放置12-20h,具体为4°C放置12-20h ; 所述饱和（NH4) 2S04水溶液占总体积的体积百分含量为40% ; 所述调节pH至5. 0-5. 2所用的试剂为盐酸。 由上述任一所述的方法制备得到的磺胺二甲基嘧啶抗体也属于本专利技术的保护范 围。 上述磺胺二甲基嘧啶抗体在制备具有结合磺胺二甲基嘧啶的活性的产品中的应 用也属于本专利技术的保护范围； 或， 上述磺胺二甲基嘧啶抗体在制备检测磺胺二甲基嘧啶的产品中的应用也属于本 专利技术的保护范围。 本专利技术的有益效果在于，利用本专利技术的方法制备的磺胺二甲基嘧啶抗体产量高， 在整个试验周期（43周）内收集卵黄抗体的量大约为20g。在免疫后前10周，抗体效价上 升速度较快，然后趋向稳定，抗体效价可在一个较高的水平维持20周以上，并且抗体的最 高效价达1 :218。抗体灵敏度较高，随着免疫的进行，各抗体灵敏度不断提高，所制标准曲线 的IC5tl逐渐下降，直至低于15ng/mL，并且最低可降至7. 74ng/mL。抗体特异性良好，除与磺 胺甲基嘧啶存在12. 63%的交叉反应率，与其它磺胺类药物均不存在交叉反应。 利用本专利技术提供的方法制备磺胺二甲基嘧啶抗体具有制备过程简单、经济，产量 高等独特优点，在磺胺二甲基嘧啶残留检测中具有良好的应用前景。 【附图说明】 图1为磺胺二甲基嘧啶免疫原结构图。 图2为磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体效价变化趋势图。 图3为磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体灵敏度变化趋势图。 【具体实施方式】 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。 磺胺二甲基嘧啶标准品购自Sigma公司，产品目录号为S6256-25G。 磺胺二甲基嘧啶类似物标准品（磺胺甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺间二甲氧嘧啶、 磺胺对二甲氧嘧啶、磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺氯 咕嗪、磺胺醋酰、磺胺多辛、氨苯磺胺、磺胺胍、磺胺苯批唑、磺胺乙氧咕嗪）均购自Sigma公 司。 弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂均购自Sigma公司，产品目录号分别为F-5881和 F-5506。 蛋鸡购自北京市西苑农贸市场。 Proclin 300生物防腐剂购自Sigma公司。 0. 05 M的碳酸盐缓冲液（pH 9. 6)的组成成分及含量为： Na2CO3 I. 59g NaHCO3 2. 93g 纯水 1000mL。 PBST缓冲液（pH 7. 2)的组成成分及含量为： Na2HPO4 ? 12H20 3. 12g NaH2PO4 ? 2H20 I. 76g Tween-20 500 U L 蒸馏水 lOOOmL。 封闭液的组成成分及含量为： 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体的方法，包括如下步骤：通过戊二醛将磺胺二甲基嘧啶与载体蛋白进行偶联，得到免疫原；用免疫原免疫蛋鸡，得到免疫蛋鸡的鸡卵；提取鸡卵卵黄中的磺胺二甲基嘧啶抗体。
【技术特征摘要】
1. 一种制备磺胺二甲基嘧啶卵黄抗体的方法，包括如下步骤：通过戊二醛将磺胺二甲 基嘧啶与载体蛋白进行偶联，得到免疫原；用免疫原免疫蛋鸡，得到免疫蛋鸡的鸡卵；提取 鸡卵卵黄中的磺胺二甲基嘧啶抗体。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述用免疫原免疫蛋鸡的方法如下： 将所述免疫原用等体积的弗氏完全佐剂乳化后首次免疫蛋鸡，再将首次免疫中所用的免疫 原剂量减半，并用等体积的弗氏不完全佐剂乳化后对首次免疫的蛋鸡进行加强免疫。4. 根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述免疫的方式为背部多点免疫。5. 根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述免疫原用PBS溶液溶解； 所述PBS溶液的浓度具体为0. Olmol/L。6. 根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述首次免疫的所述免疫原的剂 量为 300-400ug ; 所述加强免疫的次数为7-8次，具体为7次。7. 根据权利要求1-6任一所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：王战辉，沈建忠，史为民，张素霞，江海洋，温凯，盛雅洁，张会艳，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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