辐抗肽突变蛋白及其在降低炎症反应中的应用制造技术

本发明专利技术公开了辐抗肽突变蛋白及其在降低炎症反应中的应用。本发明专利技术提供了一种蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列4衍生的蛋白质。本发明专利技术的实验证明，本发明专利技术发现突变辐抗肽蛋白可以降低辐抗肽蛋白引起的验证反应，将辐抗肽第292位亮氨酸突变，其主要参与结合NLRs，降低辐抗肽与NLR的结合能力，进而降低了动物注射辐抗肽后NLR通路介导的炎症性反应，但是并未明显降低TLR5介导的抗辐射生物学活性。

【技术实现步骤摘要】
辐抗肽突变蛋白及其在降低炎症反应中的应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种辐抗肽突变蛋白及其在降低炎症反应中的应用。
技术介绍
Toll样受体(Toll-likereceptor，TLR)家族在机体内参与天然免疫过程，是一种微生物介导的先天免疫受体家族。它能够通过特异性识别细菌、病毒等病原体相关分子模式活化NF-κB信号通路(TakedaK,etal.Toll-likereceptors.AnnuRevImmunol,2003,21:335-376.MedzhitovR.Approachingtheasymptote:20yearlater.Immunity,2009,3:766-775.)。TLR是Lemaitre等人在1996年研究果蝇过程中发现其在参与由真菌感染引起的免疫应答过程并且发挥重要作用。目前研究表明，在人体内发现了11个TLRs家族成员，并且主要表达于免疫细胞等，揭示了大部分成员的特异性配体多为微生物组分(MigginSM,O’NeillLA.NewinsightsintotheregulationofTLRsignaling.JLeukocBiol,2006,80(2):220-226.)。TLR5作为TLRs家族中一员，其唯一配体为细菌的鞭毛蛋白，TLR5高表达于单核巨噬细胞、胃肠道上皮细胞、血管内皮细胞及肺上皮细胞的细胞表面。近期研究表明，细菌鞭毛蛋白能够显著提高致死计量照射下小鼠的存活率，并且初步证明这一防辐射功能是通过激活TLR5-NF-κB信号通路而实现的(Burdelya,L.G.,etal.Anagonistoftoll-likereceptor5hasradioprotectiveactivityinmouseandprimatemodels.Science,2008,320(5783):226-30.)。其中一些细胞因子如IL-6、G-CSF等参与了鞭毛蛋白引起的抗辐射作用(KrivokrysenkoVI,Identificationofgranulocytecolony-stimulatingfactorandinterleukin-6ascandidatebiomarkersofCBLB502efficacyasamedicalradiationcountermeasure.JPharmacolExpTher.2012Nov；343(2):497-508)。然而还有其他一些细胞因子如IL-1和IL-18等也可以被鞭毛蛋白所诱导而在血液中升高，这些因子多参与炎症反应，导致各种免疫性副反应。辐抗肽(CBLB502)是细菌鞭毛蛋白经过人工修饰改构后的一种重组蛋白，分子量约为31KD。此蛋白仍具有较高的防辐射功能并且于细菌鞭毛蛋白相比具有较低的免疫原性，其在室温情况下保存较长时间也不会丧失其生物学活性，对于开发辐射防护药物提供了新的方向(Burdelya,L.G.,etal.Anagonistoftoll-likereceptor5hasradioprotectiveactivityinmouseandprimatemodels.Science,2008,320(5783):226-30.)。但由于辐抗肽蛋白通过TLR以及NLR刺激多种细胞因子，除了发挥抗辐射作用，其中部分细胞因子还参与炎症反应，可导致产生感冒综合征样副反应。研究表明鞭毛蛋白在体内不仅能与细胞表明的TLR5受体结合发挥抗辐射作用以及参与免疫反应，还与体内核苷酸结合寡聚化结构域受体(Nod-likereceptors或NLRs)家族中NLRC4和NAIP5(神经元凋亡抑制蛋白5)两个成员结合(MariathasanS,etal.Differentialactivationoftheinflammasomebycaspase-1adaptorsASCandIpaf.Nature,2004,430:213-218；LightfieldKL,etal.CriticalfunctionforNaip5ininflammasomeactivationbyaconservedcarboxy-terminaldomainofflagellin.NatImmunol,2008,9:1171-1178.)，参与机体内免疫应答过程。NLRs家族是一组进化上保守的胞内模式识别受体在机体先天免疫和生理反应发挥着至关重要的作用，其普遍存在于动物和植物体内。鞭毛蛋白411位异亮氨酸参与结合TLR5，该氨基酸突变后TLR5结合能力减弱；而470位亮氨酸突主要参与结合NLRs，该氨基酸突变后NLR结合能力减弱，当将这两位氨基酸同时突变则丧失生物学活性(GaraudeJ,etal.SimultaneoustargetingofToll-andNod-likereceptorsinduceseffectivetumor-specificimmuneresponses.SciTranslMed,2012,4(120):120ra16.)。鞭毛蛋白通过与TLR5受体结合，激活体内NF-κB信号通路来实现其辐射防护功能，而NLR在体内参与免疫应答过程，多介导炎症细胞因子反应。辐抗肽蛋白来源于沙门氏菌鞭毛蛋白，具有显著的抗辐射作用。研究表明辐抗肽通过细胞表面的TLR5受体激活NF-κB信号通路抑制细胞凋亡参与抗辐射作用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种辐抗肽突变蛋白。本专利技术提供的蛋白，为辐抗肽突变体L292A，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列4衍生的蛋白质。上述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。编码上述蛋白的DNA分子也是本专利技术保护的范围，其是如下(1)-(3)中任一种的DNA分子：(1)编码区为序列表中的序列3所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的蛋白的DNA分子；(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的DNA分子。上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。含有上述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本专利技术保护的范围。上述蛋白在制备抑制其免疫动物引发的炎症反应产品中的应用也是本专利技术保护的范围。或上述蛋白在制备免疫原中的应用，该应用中所述蛋白抑制由其免疫动物引发的炎症反应，也是本专利技术保护的范围。上述应用中，所述抑制其免疫动物引发的炎症反应为不激活炎症反应因子IL-18活性。辐抗肽第292位氨基酸相当于鞭毛蛋白中的470位氨基酸，参与结合NLRs，辐抗肽第292位氨基酸突变后形成辐抗肽突变体L292A，其激活NF-κB信号通路能力较辐抗肽蛋白相比略有降低，辐射防护能力略有降低。但是血液中炎症因子IL-18的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列表中序列4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列4衍生的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白，是由序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。2.编码权利要求1所述蛋白的DNA分子。3.如权利要求2所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子是如下(1)-(3)中任一种的DNA分子：(1)编码区为序列表中的序列3所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；(3)与(1)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，葛常辉，詹逸群，来丽丽，王磊，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11