一种半夏药材的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种药材的检测方法，具体涉及一种半夏药材的生物碱含量、农药残留量的检测方法。其特征在于该方法包括如下测定，生物碱的测定：取待测样品用氯仿萃取作为供试品溶液，取盐酸麻黄碱制成对照品溶液，紫外分析测定吸光值进行比较计算；农药残留量的测定：首先用乙腈保护制备对照品溶液，用丙酮超声处理、GPC凝胶渗透色谱净化、环乙烷-乙酸乙酯洗脱制备供试品溶液，再采用气相色谱-质谱联用法同时测定半夏药材中多种农药残留，最后进行浓度计算。本发明专利技术解决了传统理化特性的鉴别方法的操作复杂和局限性的技术问题，并且检测方法准确度高，操作简便，成本低廉，具有良好的应用前景和经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药材质量检测领域，具体涉及一种半夏药材的质量检测方法。
技术介绍
半夏药材是来源于天南星科植物半夏的干燥块茎，呈类球形，有的稍偏斜少数为 长远球形，直径1-1. 5cm ;表面呈白色或浅黄色。顶端有凹陷的茎痕，周围密布麻点状根痕； 下面钝圆，较光滑；质坚实，断面洁白，富粉性，粉末嗅之呛鼻；气微，味辛辣、麻舌而刺喉。 半夏具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结之功效。主要用于治疗湿痰冷饮，呕吐，反胃，咳喘 痰多，胸膈胀满，痰厥头痛，头晕不眠，外消痈肿等症，是我国的传统大宗药物。半夏含多种 化学成分，主要含有机酸、生物碱、半夏蛋白、挥发油、氨基酸、淀粉等。现代研究表明半夏含 有的成分具有广泛的生理活性作用，其中生物碱的含量与半夏的镇吐、止咳功效密切相关， 因此所含生物碱含量的多少常作为半夏药材质量控制的重要指标。 近几年半夏的市场需求量持续增加，野生资源逐年减少，人工栽培发展缓慢，使得 半夏资源蕴藏量和产量都在大幅下降。导致市场上出现了很多伪品，其中不少伪品的农药 残留量超标爆表，给半夏药材的质量、用药的安全性及有效性带来了很大的冲击，已成为制 约半夏系列药材开发的瓶颈。 目前，正品半夏的有效检测方法是传统的形态特征和理化特性的鉴别方法，具有 一定的局限性，不足以从整体上控制半夏的质量，作为一味临床常用中药，其真伪优劣受其 理化指标、农药残留量多等诸多因素的影响，因此有必要建立一种科学的质量检测方法对 半夏的质量进行评价。
技术实现思路
为此，本专利技术所要解决的技术问题在于现有技术中半夏药材检测方法复杂，质量 难以调控的问题，进而提供一种准确度高，简单、快速的检测半夏药材的方法。 为解决上述技术问题，本专利技术是通过如下技术方案实现的： 本专利技术提供了，包括总生物碱的含量测定步骤以及农药 残留量的测定步骤，其中： A :所述总生物碱含量的测定包括如下步骤： (1)称取100-1KTC干燥至恒重的盐酸麻黄碱2. 10mg，置于100mL容量瓶，加水 至刻度并摇匀，得浓度为每lml含盐酸麻黄碱21. 0 μ g的溶液；分别精密量取上述溶液1、 2、3、4、5mL，各加水至5mL，并依次精密加入pH值5. 40的缓冲液5mL、体积分数0· 05%的溴 麝香草酚蓝标准液lmL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，分别取各样品的氯仿层备 用，作为标准样品； 另精密取5mL去离子水，依次精密加入pH值5. 40的缓冲液5mL、体积分数0. 05% 的溴麝香草酚蓝标准液lmL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层备用，作为 空白对照样品； 取上述各标准样品及空白对照样品，于414nm波长下进行紫外分光光度检测，以 盐酸麻黄碱浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准回归方程； (2)精密称取干燥至恒重的待测药材粉末0. 3g，加浓氨水0. 5mL，氯仿10mL，冷浸 2?4小时后，冰浴超声提取1?2小时，过滤收集含总生物碱的滤液；另取10mL氯仿分3 次分别为4、3、3mL对过滤得到的残渣进行洗涤，过滤合并滤液，并于80°C下回收氯仿层并 蒸干，得到供试品提取物，备用； 取分液漏斗依次精密加入pH为5. 40的缓冲济液5mL、体积分数为0. 05 %的溴麝 香草酚蓝济液lmL、以及水5mL混匀；并分别精密量取10mL氯仿分3次分别为4、3、3mL依 次将所述备用供试品提取物转入所述分液漏斗，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层作为供 试品； 以步骤（1)中的所述空白对照样品为对照，于414nm波长下进行紫外分光光度检 测，测定其吸光度，并计算所述供试品的总生物碱含量； B :所述农药残留量的测定包括如下步骤： (1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100 μ g三苯基磷酸酯的溶 液，作为内标贮备液； 分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至 100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不 同浓度的溶液，作为混合对照品溶液； 另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山 梨醇适量，加水溶解制成每lml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨 醇溶液各lml混勻，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂； (2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠 lg混匀，精密加入丙酮100ml，冰 浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有lg无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30 分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1 :1的环已烷-乙酸 乙酯溶液溶解样品并定容至l〇ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1 : 1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干； 向上述样品中加入体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至 石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1 :1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗 脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μ 1，加乙腈定容至lml，作为供试 品溶液； (3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400 μ L，并分别加入所 述分析保护剂1〇〇 μ L混匀，随后分别精密吸取1 μ L，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其 中， 所述气相色谱分析条件为：取规格为30mX0. 25mmX0. 25um的弹性石英毛细管柱 DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1. 3ml/分钟，进样量1 μ 1，采用高压不分流进样，设置 进样口温度为230°C，升温程序具体为：初始温度60°C，以30°C /分钟升至120°C、以10°C / 分钟升至200°C、以2°C /分钟升至230°C、以30°C /分钟升至300°C，并保持7分钟； 所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230°C，接口温度 250。。。 其中，所述农药残留量的测定中，所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为： 填料为Bio-Beads S-X3200?400目，净化柱为2. 5mmX 40cm，具体洗脱参数为净化去杂 900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。 所述农药残留量的测定中，所述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四 氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五 氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克 菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉 硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、三唑醇Α、三唑醇Β、反式 氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、PP' -DDE、PP' -DDD、OP' -DDT、PP' -DDT、狄氏剂、杀扑 磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨 醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种半夏药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下总生物碱的含量测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，A：所述总生物碱含量的测定包括如下步骤：(1)称取100‑110℃干燥至恒重的盐酸麻黄碱2.10mg，置于100mL容量瓶，加水至刻度并摇匀，得浓度为每1ml含盐酸麻黄碱21.0μg的溶液；分别精密量取上述溶液1、2、3、4、5mL，各加水至5mL，并依次精密加入pH值5.40的缓冲液5mL、体积分数0.05％的溴麝香草酚蓝标准液1mL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，分别取各样品的氯仿层备用，作为标准样品；另精密取5mL去离子水，依次精密加入pH值5.40的缓冲液5mL、体积分数0.05％的溴麝香草酚蓝标准液1mL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层备用，作为空白对照样品；取上述各标准样品及空白对照样品，于414nm波长下进行紫外分光光度检测，以盐酸麻黄碱浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准回归方程；(2)精密称取干燥至恒重的待测药材粉末0.3g，加浓氨水0.5mL，氯仿10mL，冷浸2～4小时后，冰浴超声提取1～2小时，过滤收集含总生物碱的滤液；另取10mL氯仿分3次分别为4、3、3mL对过滤得到的残渣进行洗涤，过滤合并滤液，并于80℃下回收氯仿层并蒸干，得到供试品提取物，备用；取分液漏斗依次精密加入pH为5.40的缓冲济液5mL、体积分数为0.05％的溴麝香草酚蓝济液1mL、以及水5mL混匀；并分别精密量取10mL氯仿分3次分别为4、3、3mL依次将所述备用供试品提取物转入所述分液漏斗，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层作为供试品；以步骤(1)中的所述空白对照样品为对照，于414nm波长下进行紫外分光光度检测，测定其吸光度，并计算所述供试品的总生物碱含量；B：所述农药残留量的测定包括如下步骤：(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20‑1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳‑氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱‑质谱联用仪测定；其中，所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3ml/分钟，进样量1μl，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。...

【技术特征摘要】
1. 一种半夏药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下总生物碱的含量测定步骤 以及农药残留量的测定步骤，其中， A :所述总生物碱含量的测定包括如下步骤： (1) 称取100-1KTC干燥至恒重的盐酸麻黄碱2. 10mg，置于lOOmL容量瓶，加水至刻度 并摇匀，得浓度为每lml含盐酸麻黄碱21. 0 μ g的溶液；分别精密量取上述溶液1、2、3、4、 5mL，各加水至5mL，并依次精密加入pH值5. 40的缓冲液5mL、体积分数0. 05 %的溴麝香草 酚蓝标准液lmL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，分别取各样品的氯仿层备用，作 为标准样品； 另精密取5mL去离子水，依次精密加入pH值5. 40的缓冲液5mL、体积分数0. 05%的溴 麝香草酚蓝标准液lmL、以及氯仿10mL，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层备用，作为空白 对照样品； 取上述各标准样品及空白对照样品，于414nm波长下进行紫外分光光度检测，以盐酸 麻黄碱浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准回归方程； (2) 精密称取干燥至恒重的待测药材粉末0. 3g，加浓氨水0. 5mL，氯仿10mL，冷浸2? 4小时后，冰浴超声提取1?2小时，过滤收集含总生物碱的滤液；另取10mL氯仿分3次分 别为4、3、3mL对过滤得到的残渣进行洗涤，过滤合并滤液，并于80°C下回收氯仿层并蒸干， 得到供试品提取物，备用； 取分液漏斗依次精密加入pH为5. 40的缓冲济液5mL、体积分数为0. 05 %的溴麝香草 酚蓝济液lmL、以及水5mL混匀；并分别精密量取10mL氯仿分3次分别为4、3、3mL依次将所 述备用供试品提取物转入所述分液漏斗，振摇并静置至分层稳定，取氯仿层作为供试品； 以步骤（1)中的所述空白对照样品为对照，于414nm波长下进行紫外分光光度检测，测 定其吸光度，并计算所述供试品的总生物碱含量； B :所述农药残留量的测定包括如下步骤： (1) 精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每lml含100 μ g三苯基磷酸酯的溶液，作 为内标贮备液； 分别精密量取各农药对照品贮备溶液lml及所述内标贮备液lml，加丙酮定容至 100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不 同浓度的溶液，作为混合对照品溶液； 另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每lml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇 适量，加水溶解制成每lml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶 液各lml混勻，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂； (2) 精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠 lg混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声 处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有lg无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟； 随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1 :1的环已烷-乙酸乙酯溶 液溶解样品并定容至l〇ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋平顺，李波，韩斌，陈杰，李登鹏，赵建邦，李士博，李冬华，张明童，
申请(专利权)人：甘肃中天药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：甘肃;62