本发明专利技术提供了一种猪流行性腹泻疫苗组合物，该疫苗组合物含有猪流行性腹泻病毒亚单位抗原和载体；本发明专利技术还提供了一种猪流行性腹泻疫苗组合物，该疫苗组合物包括猪流行性腹泻病毒亚单位抗原、猪流行性腹泻全病毒灭活抗原和载体。本发明专利技术还公开了含该疫苗组合物的制备方法以及其在制备预防和/或治疗猪流行性腹泻的药物中的应用。该疫苗组合物中的S1蛋白可通过基因工程手段对疫苗组合物的组分进行大量重组表达，不仅耗时短，还可便于大规模生产；当该疫苗组合物含S1蛋白及猪流行性腹泻全病毒灭活抗原时，比单独使用全病毒灭活抗原免疫时，免疫效果更优，能够有效预防猪流行性腹泻病毒变异株和普通株导致的疾病。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于兽用生物制品
，具体涉及一种猪流行性腹泻疫苗组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhoea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起猪腹泻的一种重要急性、接触性、病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为特征。该病最早于上世纪70年代发生在英国和比利时，1973年先后在我国上海、辽宁、吉林等地分离到PEDV。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄段的猪均易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100％，尤以哺乳仔猪严重，病死率达100％。目前，还没有特效药物可抵抗PEDV，由于该病发病急，流行快，猪群一旦感染，就会给养殖户带来巨大的经济损失。中国于1980年首次分离到PEDV，以后许多地区相继报道有本病发生，并主要在冬春季节散发，造成的危害巨大。从2010年至今，在我国华南、华北部分省份暴发了严重的猪流行性腹泻，已超过100万只的猪死亡(Sun RQ,Cai RJ,Chen YQ,et al.Outbreak of porcine epidemic diarrhea in suckling piglets,China.Emerging infectious diseases,2012,18(1):161-162)。猪流行性腹泻表现为呕吐、腹泻、脱水，可发生于任何年龄的猪，年龄越小，症状越重，死亡率越高，特别地，7日龄内新生仔猪发生腹泻后3-4天，呈现严重脱水而死亡，死亡率高达50％，最高的死亡率达100％。此外，最新的研究表明还可能通过乳汁进行垂直传播。目前，对于该病的防控主要采取传统的灭活苗、弱毒苗免疫接种。弱毒苗免疫存在潜在的生物风险，全病毒灭活疫苗病毒滴度低，导致抗原含量不足，有PEDV难以分离培养，即使营养液中加入胰酶促使其在Vero细胞中繁殖传代，但病毒滴度只能维持在1×103.01TCID50/mL左右。如采用细胞浓缩的方法使杂蛋白含量增加从而造成副反应。因此，如何解决疫苗免疫效果的问题是猪流行性腹泻本领域急需解决的技术问题。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术提供了一种猪流行性腹泻疫苗组合物及其应用。该猪流行性腹泻疫苗组合物可有效预防和治疗猪流行性腹泻病毒变异株和猪流行性腹泻病毒普通株导致的疾病。本专利技术的主要目的在于提供一种猪流行性腹泻疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括猪流行性腹泻病毒亚单位抗原和载体，所述猪流行性腹泻病毒亚单位抗原包括猪流行性腹泻病毒S蛋白、S1蛋白、M蛋白、N蛋白。术语“猪流行性腹泻病毒亚单位抗原”是指具有免疫原性的猪流行腹泻病毒蛋白片段，包括但不限于猪流行性腹泻病毒S蛋白、猪流行性腹泻病毒S1蛋白、猪流行性腹泻病毒M蛋白、猪流行性腹泻病毒N蛋白的一种或两种混合物；所述“猪流行性腹泻病毒亚单位抗原”优选为猪流行性腹泻病毒S1蛋白。优选地，所述猪流行性腹泻病毒为猪流行性腹泻病毒变异株。术语“猪流行性腹泻病毒S蛋白”是猪流行性腹泻病毒中的四个结构蛋白之一，为纤突蛋白(spike蛋白)，位于病毒粒子表面的纤突糖蛋白，在病毒粒子与细胞表面受体结合后通过膜融合侵入宿主细胞和在感染宿主体内介导中和抗体产生的过程中发挥重要生物学作用。该蛋白是由1384个氨基酸组成的多肽，含有27-29个潜在的糖基化位点，划分为2个功能区即S1(第1-789位氨基酸)和S2(第790-1383位氨基酸)。术语“猪流行性腹泻病毒S1蛋白”位于猪流行性腹泻病毒S蛋白的功能区之一，由789个氨基酸组成(任晓峰，贾文龙.猪流行性腹泻病毒S1蛋白截短表达及多抗制备.东北农业大学学报,2013,44(9):46-50)。术语“猪流行性腹泻病毒M蛋白”是猪流行性腹泻病毒中的四个结构蛋白之一，为膜蛋白(Membrane蛋白)，是PEDV中含量最多的包膜蛋白，由226个氨基酸编码而成，有三方面的生物学作用：参与病毒粒子的组装和出芽、刺激机体产生α-干扰素(α-IFN)、其产生的抗体在不提存在时具有中和病毒的能力。术语“猪流行性腹泻病毒N蛋白”是猪流行性腹泻病毒中的四个结构蛋白之一，为核衣壳蛋白(Nucleocapsid蛋白)，由1326个核苷酸组成，编码441个氨基酸，是PEDV在感染细胞中产生最多的病毒蛋白，结构十分保守。术语“猪流行性腹泻病毒变异株”是又称高致病性猪流行性腹泻病毒，包括但不限于其S1蛋白具有与SEQ ID No.1基本相同的核苷酸序列的PEDV。优选地，猪流行性腹泻病毒变异株其S1蛋白具有与SEQ ID No.1基本相同的核苷酸序列的PEDV。与SEQ ID No.1基本相同是指，PEDV的核苷酸序列优选包含与SEQ ID No.1有85％-100％相同的序列，优选在猪流行性腹泻病毒变异株并非本文所述PEDV的条件下，例如与作为参考病毒分离物的CH/YNKM/2012相比，S1的核苷酸同源性低于91％，优选低于92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。猪流行性腹泻病毒变异株核苷酸序列优选有超过80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％或89％，与SEQ ID No.1相同，同样优选在猪流行性腹泻病毒变异株并非本文所述PEDV的条件下，例如与作为参考病毒分离物的CH/YNKM/2012相比，S1的核苷酸同源性低于91％，优选低于92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。术语“同源性”是指两条氨基酸序列或两条核苷酸序列的相似程度。氨基酸序列或核苷酸序列的同源性可以通过本领域公知的任何适当的方法计算得到，例如，可以将目标氨基酸(或核苷酸)序列与参比氨基酸(或核苷酸)序列进行序列比对，必要时可以引入空缺，使得两条比对的序列间相同的氨基酸(或核苷酸)数目达到最优化，并在此基础上计算两条氨基酸(或核苷酸)序列之间相同氨基酸(或核苷酸)的百分比。氨基酸(或核苷酸)序列的比对和同源性的计算可以通过本领域公知的软件实现，例如，但不限于，BLAST软件(在美国国立生物技术信息中心NCBI的网址上可获得：http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi，或者见，例如，Altschul S.F.et al，J.Mol.Biol.，215：403-410(199本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猪流行性腹泻疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括猪流行性腹泻病毒亚单位抗原和载体；其中，所述猪流行性腹泻病毒亚单位抗原包括猪流行性腹泻病毒S蛋白、S1蛋白、M蛋白、N蛋白。
【技术特征摘要】
1.一种猪流行性腹泻疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物
包括猪流行性腹泻病毒亚单位抗原和载体；其中，所述猪流行性腹泻病
毒亚单位抗原包括猪流行性腹泻病毒S蛋白、S1蛋白、M蛋白、N蛋白。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述猪流行性
腹泻病毒S1蛋白核苷酸序列编码SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID
No.6、SEQ ID No.8或SEQ ID No.10氨基酸序列；优选地，所述猪流行
性腹泻病毒S1蛋白核苷酸序列编码SEQ ID No.2氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述猪流行性
腹泻病毒S1蛋白的含量为0.5-20μg/mL。
4.一种猪流行性腹泻疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物
包括权利要求1-2任一项所述猪流行性腹泻病毒亚单位抗原、猪流行性
腹泻全病毒灭活抗原和载体。
5.根据权利要求4所述的疫苗组合物，其特征在于，所述猪流行性
腹泻病毒亚单位抗原为猪流行性腹泻病毒S1蛋白，其核苷酸序列编码
SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.6、SEQ ID No.8或SEQ ID No.
10氨基酸序列；所述猪流行性腹泻全病毒灭活抗原为灭活的猪流行性腹
泻病毒HN1301株。
6.根据权利要求5所述的疫苗组合物，其特征在于，所述猪流行性
腹泻病毒S1蛋白的含量为0.5-20μg/mL；所述猪流行性腹泻全病毒灭活
抗原的含量为灭活前1×104.0-1×107.0TCID50/mL。
7.根据权利要求1-6任一项所述的疫苗...
【专利技术属性】
技术研发人员：张许科，孙进忠，王莹，王延辉，田克恭，
申请(专利权)人：普莱柯生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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