一种茯苓多糖注射剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种茯苓多糖注射剂及其制备方法，所述注射剂包括羧甲基茯苓多糖、注射用水、苯甲醇以及吐温80，其中每毫升注射剂含羧甲基茯苓多糖2mg，每2g羧甲基茯苓多糖加入的苯甲醇、吐温80均为10mL；方法如下：先将茯苓粉末回流提取、除杂后，得到茯苓多糖；然后，加入有机溶剂改造、纯化，得羧甲基茯苓多糖纯品；最后加入注射用水、苯甲醇以及吐温80，即得。本发明专利技术注射剂适合肌肉注射，药物吸收良好，无刺激性反应，使用安全可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种茯苓多糖注射剂及其制备方法
本专利技术涉及一种茯苓多糖注射剂及其制备方法。
技术介绍
茯苓（学名：Poriacocos(Schw.)Wolf.），药用部位是多孔菌科真菌茯苓的菌核。具有利水渗湿，健脾，安神的功效。还可以制作成粉状用来女士爱好的美白面膜。古人称茯苓为“四时神药”，因为它功效非常广泛，不分四季，将它与各种药物配伍，不管寒、温、风、湿诸疾，都能发挥其独特功效。茯苓味甘、淡、性平，入药具有利水渗湿、益脾和胃、宁心安神之功用。现代医学研究：茯苓能增强机体免疫功能，茯苓多糖有明显的抗肿瘤及保肝脏作用。但虚寒精滑或气虚下陷者忌服。目前市场上已有茯苓多糖口服液产品的开发，但未见到注射剂产品的开发。实践表明，茯苓多糖的活性因口服会受到限制，而注射剂茯苓多糖通过静脉注射或腹腔注射能够直接进入人体直接起药效作用，是口服的药效不可比拟的。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一，在于提供一种茯苓多糖注射剂的制备方法，其制备的注射剂适合肌肉注射，药物吸收良好，无刺激性反应，使用安全可靠。本专利技术是这样实现上述技术问题之一的：一种茯苓多糖注射剂的制备方法，所述方法步骤如下：步骤一、羧甲基茯苓多糖的提取、纯化：A、将60-100℃烘干至恒重的茯苓粉末在索氏提取器中回流4-6h，除酯类物质，取药渣，其中回流提取溶剂为乙酸乙酯，回流提取2~3次；B、获得的药渣在回流装置中沸水浴中回流提取4-6h，回流提取2~3次，离心取上清液；C、上清液在旋转蒸发仪中浓缩至含水率为10-15%，用Severge法除蛋白，取上清液加入乙醇沉淀多糖，0-4℃冰箱冷藏过夜，3000-4000r/min离心10-15min取沉淀物，低温干燥得到水溶性茯苓粗多糖；D、将所获得的水溶性茯苓粗多糖依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，低温干燥得到茯苓次多糖；E、将茯苓次多糖加入高碘酸钠氧化10-20min，pH3～4酸解20-30mim，过滤得固体；添加NaOH水溶液溶解固体，碱化40-120min，再依次加入异丙醇、氯乙酸，40-50℃快速搅拌溶解至样品呈糊状，过滤取沉淀；再加入稀盐酸溶液,剧烈搅拌，加入100%乙醇过滤，取沉淀；将沉淀溶解于蒸馏水中，再用蒸馏水的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，低温干燥得到羧甲基茯苓多糖粗品；F、将羧甲基茯苓多糖粗品溶解于蒸馏水中，先进行DEAE-32纤维素层析柱，再进行SephadesG-200层析柱层析，将层析液透析脱盐后，再用透析液的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，冷冻干燥得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖纯品；步骤二、羧甲基茯苓多糖注射剂制备G、取羧甲基茯苓多糖，加入注射用水充分溶解，加入针剂活性炭除热源，充分搅拌20-30min，溶解完全后反复过滤至澄清，取滤液，滤液中加入苯甲醇、吐温80，3000-4000r/min离心10-15min取上清液，上清液用注射用水定容后，分装于安瓶中，每瓶2mL，100℃下热压处理20-30min，冷却后4℃冰箱冷藏保存，48-52h后灯光下检查安瓶是否有沉淀，如有过滤除去，再灌封，121℃高压湿热灭菌20-30min，即为羧甲基茯苓多糖注射液，每毫升注射剂含羧甲基茯苓多糖2mg。进一步地，所述步骤A中，茯苓粉末：乙酸乙酯=1：200-220，即1g茯苓粉末用200-220mL乙酸乙酯溶解，沸点80℃。进一步地，所述步骤B中，茯苓粉末：水=1：250-300，即1g茯苓粉末用250-300mL水溶解，沸点100℃，离心3000-4000r/min,10-15min。进一步地，所述步骤C中，旋转蒸发仪转速100-150r/min，65-75℃水浴；Severge法：加入溶液1/5-1/4体积的三氯甲烷，随之再加入1/5-1/4体积的正丁醇，剧烈震荡10-15min，重复三次，直至蛋白除尽；沉淀多糖的乙醇用量：3倍量溶液体积，95%浓度；低温干燥温度在40℃以下，在真空干燥箱中进行。进一步地，所述步骤D中，无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤用量为茯苓粗多糖的2-3倍，即1g茯苓粗多糖依次用2-3mL的无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤；低温干燥温度在40℃以下，在真空干燥箱中进行。进一步地，所述步骤E中，添加的NaOH水溶液为茯苓粗多糖的5-10倍，即1g茯苓粗多糖用5-10mL的NaOH溶解，浓度1%；添加的异丙醇量为同体积的NaOH用量；氯乙酸量为茯苓多糖质量的15-20%；稀盐酸溶液加入量为至反应液中和pH5-6；低温干燥温度在40℃以下，在真空干燥箱中进行。进一步地，所述步骤F中，DEAE-32纤维素层析条件：10*50cm，0～4moL/L的NaCl溶液梯度洗脱，流速0.5mL/min．每10mL为1个单位分部收集；SephadesG-200层析条件：0～4moL/L的NaCl溶液梯度洗脱，流速0.5mL/min．每10mL为1个单位分部收集；冷冻干燥条件：在真空冷冻干燥机中进行。进一步地，所述步骤G中，针剂活性炭的质量分数为0.5%，即0.5g活性炭溶解于100mL的无菌水中；每2g羧甲基茯苓多糖加入的苯甲醇、吐温80均为10mL；两次过滤均使用0.22um的尼龙微孔滤膜过滤。本专利技术要解决的技术问题之二，在于提供一种茯苓多糖注射剂，该注射剂适合肌肉注射，药物吸收良好，无刺激性反应，使用安全可靠本专利技术是这样实现上述技术问题之二的：一种茯苓多糖注射剂，所述注射剂包括羧甲基茯苓多糖、注射用水、苯甲醇以及吐温80，其中每毫升注射剂含羧甲基茯苓多糖2mg，每2g羧甲基茯苓多糖加入的苯甲醇、吐温80均为10mL。本专利技术具有如下优点：实践表明，茯苓多糖的活性因口服会受到限制，而注射剂茯苓多糖通过静脉注射或腹腔注射能够直接进入人体直接起药效作用，是口服的药效不可比拟的。本专利技术提取工艺从中药茯苓中提取多糖，并进行羧甲基化结构改性、纯化，提高其水溶性和生物学活性，制备出羧甲基茯苓多糖注射剂。本专利技术的茯苓多糖注射剂为水溶性茯苓多糖，经试验证明其澄明度检查符合国家药典规定；pH7.2±0.2；在4℃冰箱或室温下存放6个月，均未发现任何固体析出，外观形态符合国家药典要求。安全性试验表明：注射剂对小鼠动物的血细胞生成、血细胞形态、造血功能及肝、肾功能均无损害作用；茯苓多糖注射剂在注射停药一段时间后，无毒性反应的迟发作用及可逆性毒性反应。热原性检查表明彻底高压灭菌消毒后，该注射剂无热原质存在，使用安全可靠。刺激性检查试验表明该注射剂适合肌肉注射，药物吸收良好，无刺激性反应，使用安全可靠。因此，本专利技术茯苓多糖注射液是安全、有效的，可供临床医学使用，特别是在肿瘤化疗方面起辅助治疗作用。具体实施方式本专利技术涉及一种茯苓多糖注射剂的制备方法，所述方法步骤如下：步骤一、羧甲基茯苓多糖的提取、纯化：A、将60-100℃烘干至恒重的茯苓粉末在索氏提取器中回流4-6h，除酯类物质，取药渣，其中回流提取溶剂为乙酸乙酯，回流提取2~3次；B、获得的药渣在回流装置中沸水浴中回流提取4-6h，回流提取2~3次，离心取上清液；C、上清液在旋转蒸发仪中浓缩至含水率为10-15%，用Severge法除蛋白，取上清液加入乙醇沉淀多糖，0-4℃冰箱冷藏过夜，3000-4000r/min离心10-15min取沉淀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茯苓多糖注射剂的制备方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤一、羧甲基茯苓多糖的提取、纯化：A、将60‑100℃烘干至恒重的茯苓粉末在索氏提取器中回流4‑6h，除酯类物质，取药渣，其中回流提取溶剂为乙酸乙酯，回流提取2~3次；B、获得的药渣在回流装置中沸水浴中回流提取4‑6h，回流提取2~3次，离心取上清液；C、上清液在旋转蒸发仪中浓缩至含水率为10‑15%，用Severge法除蛋白，取上清液加入乙醇沉淀多糖，0‑4℃冰箱冷藏过夜，3000‑4000r/min离心10‑15min取沉淀物，低温干燥得到水溶性茯苓粗多糖；D、将所获得的水溶性茯苓粗多糖依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，低温干燥得到茯苓次多糖；E、将茯苓次多糖加入高碘酸钠氧化10‑20min，pH 3～4酸解20‑30mim，过滤得固体；添加NaOH水溶液溶解固体，碱化40‑120min，再依次加入异丙醇、氯乙酸，40‑50 ℃快速搅拌溶解至样品呈糊状，过滤取沉淀；再加入稀盐酸溶液,剧烈搅拌，加入100%乙醇过滤，取沉淀；将沉淀溶解于蒸馏水中，再用蒸馏水的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，低温干燥得到羧甲基茯苓多糖粗品；F、将羧甲基茯苓多糖粗品溶解于蒸馏水中，先进行DEAE‑32纤维素层析柱，再进行SephadesG‑200层析柱层析，将层析液透析脱盐后，再用透析液的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，冷冻干燥得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖纯品；步骤二、羧甲基茯苓多糖注射剂制备G、取羧甲基茯苓多糖，加入注射用水充分溶解，加入针剂活性炭除热源，充分搅拌20‑30min，溶解完全后反复过滤至澄清，取滤液，滤液中加入苯甲醇、吐温80，3000‑4000r/min 离心10‑15min取上清液，上清液用注射用水定容后，分装于安瓶中，每瓶2mL，100℃下热压处理20‑30min，冷却后4℃冰箱冷藏保存，48‑52h后灯光下检查安瓶是否有沉淀，如有过滤除去，再灌封，121℃高压湿热灭菌20‑30min，即为羧甲基茯苓多糖注射液，每毫升注射剂含羧甲基茯苓多糖2mg。...

【技术特征摘要】
1.一种茯苓多糖注射剂的制备方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤一、羧甲基茯苓多糖的提取、纯化：A、将60-100℃烘干至恒重的茯苓粉末在索氏提取器中回流4-6h，除酯类物质，取药渣，其中回流提取溶剂为乙酸乙酯，回流提取2~3次；B、获得的药渣在回流装置中沸水浴中回流提取4-6h，回流提取2~3次，离心取上清液；C、上清液在旋转蒸发仪中浓缩至含水率为10-15%，用Severge法除蛋白，取上清液加入乙醇沉淀多糖，0-4℃冰箱冷藏过夜，3000-4000r/min离心10-15min取沉淀物，低温干燥得到水溶性茯苓粗多糖；D、将所获得的水溶性茯苓粗多糖依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，低温干燥得到茯苓次多糖；E、将茯苓次多糖加入高碘酸钠氧化10-20min，pH3～4酸解20-30mim，过滤得固体；添加NaOH水溶液溶解固体，碱化40-120min，再依次加入异丙醇、氯乙酸，40-50℃快速搅拌溶解至样品呈糊状，过滤取沉淀；再加入稀盐酸溶液,剧烈搅拌，加入100%乙醇过滤，取沉淀；将沉淀溶解于蒸馏水中，再用蒸馏水的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，低温干燥得到羧甲基茯苓多糖粗品；F、将羧甲基茯苓多糖粗品溶解于蒸馏水中，先进行DEAE-32纤维素层析柱，再进行SephadesG-200层析柱层析，将层析液透析脱盐后，再用透析液的3倍量体积的95%乙醇沉淀，过夜，离心取沉淀，冷冻干燥得白色粉末状固体物，即为羧甲基茯苓多糖纯品；步骤二、羧甲基茯苓多糖注射剂制备G、取羧甲基茯苓多糖，加入注射用水充分溶解，加入针剂活性炭除热源，充分搅拌20-30min，溶解完全后反复过滤至澄清，取滤液，滤液中加入苯甲醇、吐温80，3000-4000r/min离心10-15min取上清液，上清液用注射用水定容后，分装于安瓶中，每瓶2mL，100℃下热压处理20-30min，冷却后4℃冰箱冷藏保存，48-52h后灯光下检查安瓶是否有沉淀，如有过滤除去，再灌封，121℃高压湿热灭菌20-30min，即为羧甲基茯苓多糖注射液，每毫升注射剂含羧甲基茯苓多糖2mg；针剂活性炭的质量分数为0.5%，即0.5g活性炭溶解于100mL的无菌水中；每2g羧甲基茯苓多糖加入的苯甲醇、吐温80均为10mL；两次过滤均使用0.22um的尼龙微孔滤膜过滤。2.如权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：林标声，胡晓冰，杨生玉，陈小红，朱德霞，
申请(专利权)人：龙岩学院，
类型：发明
国别省市：福建;35