本发明专利技术公开了一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗β-hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有β-hCG校准品的试剂瓶；装有标记的抗α-TSH单克隆抗体的试剂瓶。此外，本发明专利技术还公开了该试剂盒的制备方法及其在检测β-hCG含量中的应用。本发明专利技术试剂盒的灵敏度高、检测范围广、稳定性好。本发明专利技术可利用全自动时间分辨荧光免疫分析仪进行全自动操作，操作简单省时，灵敏度高，可达到0.01mIU/ml；准确性好、且无辐射污染。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗β-hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有β-hCG校准品的试剂瓶；装有标记的抗α-TSH单克隆抗体的试剂瓶。此外，本专利技术还公开了该试剂盒的制备方法及其在检测β-hCG含量中的应用。本专利技术试剂盒的灵敏度高、检测范围广、稳定性好。本专利技术可利用全自动时间分辨荧光免疫分析仪进行全自动操作，操作简单省时，灵敏度高，可达到0.01mIU/ml；准确性好、且无辐射污染。【专利说明】—种检测β -hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术涉及体外免疫诊断试剂领域，尤其涉及一种检测尿液中β-hCG的时间分辨免疫荧光试剂盒及其制备方法和应用，实现对尿液中β -hCG含量的定量检测。
技术介绍
人绒毛膜促性腺激素(hCG)，是由胎盘绒毛膜的合体滋养层产生的一种糖蛋白，β亚单位是特异性抗原，其结构与其它垂体前叶激素不同。 质量是一家生产型企业的立足之本。许多做hCG测试笔的体外诊断公司，需要利用含一定浓度β -hCG标准品进行测试笔功能性检测，从而确认此批测试笔是否达到标准，能否出售，这是一个关键质量控制点。标准品若不合格，有可能对测试笔的性能进行误判，对企业产生不利的影响。因此有必要发展一种灵敏度高、检测范围广、稳定性好的定量检测试剂盒，用于监测含一定浓度的β -hCG标准品的性能。 目前市售的试剂盒大多以酶联免疫为主，以血清为标本进行定量检测β-hCG含量，灵敏度一般，检测范围偏窄，取样操作复杂、不方便。尿液中β-hCG含量的测定已经是体外快速检测产品的一项重要指标，通过尿液中β-hCG含量的多少，可直接判断出是否怀孕以及怀孕的周数，取样简单、便捷。作为早早孕体外快速检测产品的质控标准品，也是用尿液来配制或者标定的；容易引起疏忽的是:不管是正常男性或妇女的尿液中，本身就存在一定含量(极低水平)的β-hCG抗原。因此定量测定尿液中β-hCG的含量，可为标准品的准确性提供一种定量的保证，也可辅助早期判断妊娠、流产、宫外孕等。 时间分辨免疫突光分析法(Time-resolvedfluoroimmunoassay, TRFIA),是利用具有独特荧光特性的镧系元素作为标记示踪物，代替酶、同位素等，成为发光免疫分析中的一种重要方法，具有灵敏度高、示踪物稳定、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染等许多优点。 目前，对于采用时间分辨免疫荧光分析法检测尿液中β-hCG含量尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种检测尿液中β -hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，其灵敏度高、检测范围广、稳定性好，取样方便，快速。 本专利技术要解决的技术问题之二是提供该试剂盒的制备方法。 本专利技术要解决的技术问题之三是提供该试剂盒在检测β -hCG含量中的应用。 为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案: 在本专利技术的一方面，提供一种检测β-hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，所述盒体内设有放置包被抗β-hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有: 装有分析液的试剂瓶； 装有清洗液的试剂瓶； 装有增强液的试剂瓶； 装有β -hCG校准品的试剂瓶；其中，β -hCG校准品的浓度已知，用于建立标准曲线.-^4 ， 装有标记的抗a -TSH单克隆抗体的试剂瓶。 作为本专利技术优选的技术方案，所述容器孔内还放置有:装有包被液的试剂瓶、装有封闭保护液的试剂瓶、以及装有洗脱液的试剂瓶。 作为本专利技术优选的技术方案，所述酶标板为带保护膜的96孔酶标板。 作为本专利技术优选的技术方案，所述抗β _hCG单克隆抗体的浓度为l-ΙΟμ g/ml。 所述标记的抗a -TSH单克隆抗体的标记物可以采用本领域常用的标记物，例如镧系元素。作为本专利技术优选的技术方案，所述标记的抗a-TSH单克隆抗体的标记物优选是三价铕离子。 作为本专利技术优选的技术方案，所述标记的抗a-TSH单克隆抗体中抗体与标记物的标记重量比例是(6-10):1。 作为本专利技术优选的技术方案，所述β-hCG校准品为尿液配制的β-hCG标准品。 在本专利技术的另一方面，还提供了一种上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤: (I)抗β -hCG单克隆抗体包被酶标板的制备: 将抗β -hCG单克隆抗体在包被液中透析，再加入到酶标板上，于2_8°C包被48小时以上；用清洗液清洗酶标板后，加入封闭保护液，室温封闭20小时以上；甩干封闭保护液干燥密封，置于2-8°C冰箱备用； (2)三价铕标记的抗a -TSH单克隆抗体的制备: 将抗C1-TSH单克隆抗体，用标记液进行透析，取透析好的抗a-TSH单克隆抗体，用标记液稀释；将抗体加入到冻干的铕标记液中缓慢摇匀后置于2-8°C冰箱中过夜；用纯化柱纯化2-8°C过夜的标记液，收集标记物，加入0.1 % BSA置于_80± 10°C冷冻保存备用； (3) β -hCG校准品的制备: 用3-1^6干粉和阴性尿液配制浓度为0、15、25、37.5、50、75和100mIU/ml的β -hCG校准尿液，置于_80± 10°C冷冻保存备用； 所述清洗液、分析液和增强液为市售商品。 作为本专利技术优选的技术方案，步骤(2)中，所述将抗体加入到冻干的铕标记液中，其中抗体与铕标记液的重量比例为(6-10):1。 作为本专利技术优选的技术方案，步骤(2)中，所述用纯化柱纯化2_8°C过夜的标记液，收集标记物具体为:取纯化柱，用洗脱液洗脱平衡至少2小时，将2-8°C过夜的标记液全部转入柱子的顶端，重力自然洗脱，以0.25ml/管为单位进行收集。 在本专利技术的另一方面，还提供该试剂盒在检测β-hCG含量中的应用，该检测方法包括如下步骤: (I)将β -hCG校准品和待检样品依次加入到抗β -hCG单克隆抗体包被的酶标板上，再加入分析液，震荡孵育； (2)将清洗液用去离子水进行稀释，然后用已稀释的清洗液清洗酶标板并甩干； (3)将纯化好的三价铕标记的抗a-TSH单克隆抗体，用分析液稀释，加入酶标板中，震汤鮮育； (4)用清洗液清洗酶标板并甩干； (5)加入增强液，使用全自动时间分辨荧光免疫分析仪检测荧光信号； (6)根据荧光数值建立标准曲线，将待检样品的荧光信号代入到标准曲线中，求得待检样品的浓度。 上述术语说明如下: 本专利技术所述的“分析液”:Assay Buffer,市售商品，采购自Perkin Elmer,货号:4002-0010。在检测时使用的缓冲液。 本专利技术所述的“清洗液”:Wash Solut1n,市售商品,采购自Perkin Elmer,货号:B117-100。用于酶标板清洗的溶液。 本专利技术所述的“增强液” !Enhancement Solut1n,市售商品，采购自PerkinElmer，货号:Β118_100。可使标记物从反应复合物上解离下来的溶液。 本专利技术所述的“包被液”本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测β‑hCG含量的时间分辨免疫荧光试剂盒，包括盒体和盒体上方的盒盖，其特征在于，所述盒体内设有放置包被抗β‑hCG单克隆抗体的酶标板的隔层；所述盒体内设有放置试剂瓶的容器孔，所述容器孔内放置有：装有分析液的试剂瓶；装有清洗液的试剂瓶；装有增强液的试剂瓶；装有β‑hCG校准品的试剂瓶；装有标记的抗α‑TSH单克隆抗体的试剂瓶。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵金博，张展英，周蓓昕，
申请(专利权)人：美艾利尔上海诊断产品有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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