明日叶叶片组织培养快繁技术制造技术

本发明专利技术公开了一种明日叶叶片组织培养快繁技术，选取明日叶叶片，用流水冲洗,75％酒精溶液浸泡，无菌水冲洗，放入0.1％升汞溶液中消毒，之后再用无菌水冲洗；切块；种于愈伤组织诱导培养基中培养20-30天叶片切口处长出愈伤组织团；再将愈伤组织团切块,转接至愈伤组织增殖培养基上培养20-30天对愈伤组织增殖；将增殖的愈伤组织切块，转接于丛生芽诱导培养基中进行培养30天分化产生丛生芽；将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，将芽接种于生根培养基中培养20天得到再生植株幼苗；驯化练苗一周后移栽入灭菌处理的椰壳土中直至幼苗成活。本发明专利技术的有益效果是明日叶叶片做繁殖材料，成本低，材料来源广。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种明日叶叶片组织培养快繁技术，选取明日叶叶片，用流水冲洗,75％酒精溶液浸泡，无菌水冲洗，放入0.1％升汞溶液中消毒，之后再用无菌水冲洗；切块；种于愈伤组织诱导培养基中培养20-30天叶片切口处长出愈伤组织团；再将愈伤组织团切块,转接至愈伤组织增殖培养基上培养20-30天对愈伤组织增殖；将增殖的愈伤组织切块，转接于丛生芽诱导培养基中进行培养30天分化产生丛生芽；将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，将芽接种于生根培养基中培养20天得到再生植株幼苗；驯化练苗一周后移栽入灭菌处理的椰壳土中直至幼苗成活。本专利技术的有益效果是明日叶叶片做繁殖材料，成本低，材料来源广。【专利说明】明日叶叶片组织培养快繁技术
本专利技术属于植物培育
，涉及明日叶叶片组织培养快繁技术。
技术介绍
明日叶药食两用，尤其在药用方面的价值更是被各界公认为极具发展潜力的新兴 蔬菜。我国20多年前从日本引进明日叶，目前国内仅有少数几家公司刚引种，栽培面积很 小，原料在国际市场价格很高，需求量大。在生产过程中，明日叶植株通常在种植后1-2年 即进入繁殖期，开花结实后立即死亡。明日叶花期持续较长，果实结实率较低，在采收时种 子成熟度不一，并且其果实为双悬果，造成明日叶的种子发芽率极低，不易大规模栽培。如 今明日叶种苗的繁育及栽培技术已成为制约明日叶及其加工品发展的瓶颈，而文献中关于 明日叶的种苗繁育及栽培报道甚少，导致市场上明日叶及其产品的价格居高不下。 为扩大明日叶的工业化生产规模，曾先后有一些关于明日叶组织培养方面的研究 报道。目前，已发表的研究结果分为三种：一是李佳等研究发现明日叶的叶柄和叶片均不适 宜作为外植体进行组织培养，只是利用带芽茎段进行了愈伤组织的诱导及分化等培养；二 是吕秀立等报道利用明日叶种子获取无菌苗进而分化增殖的培养方法；三是郭志友等报道 了利用叶柄及叶片作为外植体进行组织培养的方法。 本研究和上述三者的研究相比，虽然同为利用组织培养的手段构建明日叶的繁育 体系，但是却和三者有着极大的区别。首先，和李佳等的研究相比，本研究打破了叶片不能 作为外植体进行诱导的结论，且带芽茎段和本研究所选用的叶片相比，材料有极大的限制 性；其次，和吕秀立等研究相比，本研究的材料受:限性大大降低；最后，和郭志友等的研究 结果相比，虽然取材相似，但本研究结果显示MS作为基础培养基效果较好，而郭志友的报 道却认为N 6基础培养基适合进行培养效果明显，因此两者选用的基础培养基有着极大的不 同。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种明日叶叶片组织培养快繁技术，解决了明日叶种子发 芽率低，市场上原材料不足、价格昂贵的问题。 本专利技术所采用的技术方案是按照以下步骤进行： (1)选取明日叶叶片，用流水冲洗，放入无菌操作台上备用； (2)用75 %酒精溶液浸泡，无菌水冲洗3次，放入0. 1 %升汞溶液中消毒灭菌，之后 再用无菌水冲洗5次； (3)用无菌滤纸吸干叶片的水，然后切割； (4)将叶片接种于愈伤组织诱导培养基中，置于24°C培养箱中20001x光强下培 养，光照条件为每天16小时光照，8小时黑暗，培养20-30天叶片切口处长出愈伤组织团； (5)再将愈伤组织团切块，转接至愈伤组织增殖培养基上，培养温度25°C，光照条 件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20-30天对愈伤组织增殖； (6)将增殖的愈伤组织切块，转接于丛生芽诱导培养基中进行培养，培养温度 25°C，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养30天分化产生丛生芽； (7)将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，将芽接种于生根培养基中，培 养温度25°C，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20天得到再生植 株幼苗； (8)选取健壮幼苗于组培瓶中，移至自然环境条件下3天，打开组培瓶盖3天驯化 练苗，经过驯化炼苗一周后移栽入灭菌处理的椰壳土中，上覆薄膜，浇水，保持空气湿度，1 周后逐渐打开薄膜，直至幼苗成活。 进一步，所述步骤3、步骤5、步骤6切块为1cm2。 进一步，所述愈伤组织诱导培养基为MS+lmg/L6-BA+3mg/LNAA ;所述愈伤组 织增殖培养基为MS+6-BA2mg/L+2, 4-Dlmg/L ;所述丛生芽诱导培养基为MS+6-BAlmg/ L+NAAO. 5mg/L ;所述生根培养基为 1/2MS+0. 02mg/LNAA。 本专利技术的有益效果是明日叶叶片做繁殖材料，成本低，材料来源较广。 【具体实施方式】 下面结合【具体实施方式】对本专利技术进行详细说明。 本专利技术采用MS为基础培养基，配置不同植物生长物质的组合： 愈伤组织诱导培养基：MS+lmg/L6-BA+3mg/LNAA ; 愈伤组织增殖培养基：MS+6-BA2mg/L+2, 4-Dlmg/L ; 丛生芽诱导培养基：MS+6-BAlmg/L+NAAO. 5mg/L ; 生根诱导：l/2MS+0. 〇2mg/LNAA。 本专利技术按照以下步骤进行： (1)以叶片为外植体，叶片优选上端的，稍微幼嫩的叶片，但避免采集新叶，用流水 冲洗15-20min后，放入无菌操作台上备用。 (2)在接种室，超净工作台上用75%酒精溶液浸泡植物材料30s后取出，无菌水冲 洗3次，放入0. 1 %升汞溶液中消毒7min，无菌水冲洗7次。 (3)用无菌滤纸吸干叶片的水，然后切成1cm2大小。 (4)将叶片接种于愈伤组织诱导培养基中，置于24°C培养箱中20001x光强下培 养，光照条件为每天16小时光照，8小时黑暗，培养20-30天至叶片切口处长出愈伤组织团 并增大。 (5)再将愈伤组织团均匀切割为1cm2,转接至愈伤组织增殖培养基上，培养温度 25°C左右，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20-30天愈伤组织 可增殖至6cm 2左右。 (6)将增殖的愈伤组织切割为1cm2大小，转接于丛生芽诱导培养基中进行培养，培 养温度25°C左右，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养15-20天后 愈伤组织再分化产生丛生芽，30天后丛生芽生长良好。 (7)将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，将芽接种于生根培养基中，培 养温度25°C左右，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20天后芽基 部分化产生根，生长良好，得到再生植株幼苗。 (8)选取健壮幼苗于组培瓶中，移至自然环境条件下3天，打开组培瓶盖3天驯化 练苗，经过驯化炼苗一周后移栽入灭菌处理的椰壳土中，上覆薄膜，注意浇水，保持空气湿 度，1周后逐渐打开薄膜，并减少浇水频率，成活率可达94%以上。 本专利技术通过叶片组织培养构建明日叶的新型繁育体系，打破了由于种子发芽率低 而造成的生产瓶颈，为规模化生产提供了条件。 以上所述仅是对本专利技术的较佳实施方式而已，并非对本专利技术作任何形式上的限 制，凡是依据本专利技术的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与本文档来自技高网...

【技术保护点】
明日叶叶片组织培养快繁技术，其特征在于按照以下步骤进行：(1)选取明日叶叶片，用流水冲洗,放入无菌操作台上备用；(2)用75％酒精溶液浸泡，无菌水冲洗，放入0.1％升汞溶液中消毒，之后再用无菌水冲洗；(3)用无菌滤纸吸干叶片的水，然后切块；(4)将叶片接种于愈伤组织诱导培养基中，置于24℃培养箱中2000lx光强下培养，光照条件为每天16小时光照，8小时黑暗，培养20‑30天叶片切口处长出愈伤组织团；(5)再将愈伤组织团切块,转接至愈伤组织增殖培养基上，培养温度25℃，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20‑30天对愈伤组织增殖；(6)将增殖的愈伤组织切块，转接于丛生芽诱导培养基中进行培养，培养温度25℃，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养30天分化产生丛生芽；(7)将丛生芽基部的愈伤组织切除，分割为单个芽，将芽接种于生根培养基中，培养温度25℃，光照条件为16小时光照，8小时黑暗，光照强度3000Lx，培养20天得到再生植株幼苗；(8)选取健壮幼苗于组培瓶中，移至自然环境条件下3天，打开组培瓶盖3天驯化练苗，经过驯化炼苗一周后移栽入灭菌处理的椰壳土中，上覆薄膜，浇水，保持空气湿度，1周后逐渐打开薄膜，直至幼苗成活。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：罗充，辛柯，姚红艳，冯晓英，陈显刚，吴涛，罗开源，赵敏，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52