一种十数樟组织培养快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种十数樟组织培养快繁方法，涉及分子生物学实验中植物组织培养技术。本方法是：①外植体消毒；②愈伤诱导；④小苗的伸长；⑤根的诱导；⑥炼苗及移栽。本发明专利技术能将从非洲引进的十数樟通过组织培养快速繁殖获得大量小苗，从而为下游提取十数樟活性药用成分提供充足的植物材料，加快口腔保健品的开发进程。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了，涉及分子生物学实验中植物组织培养技术。本方法是：①外植体消毒；②愈伤诱导；④小苗的伸长；⑤根的诱导；⑥炼苗及移栽。本专利技术能将从非洲引进的十数樟通过组织培养快速繁殖获得大量小苗，从而为下游提取十数樟活性药用成分提供充足的植物材料，加快口腔保健品的开发进程。【专利说明】
本专利技术涉及分子生物学实验中植物组织培养技术，尤其涉及一种十数樟组织培养 快繁方法。
技术介绍
十数樟（Fartorgia )是非洲特有药用植物，该植物的树枝在非洲被用 作"牙棒"，具有广谱抗菌活性。从十数樟提取的天热植物类抗菌剂，将有助于开发一系列 的保健品，尤其是保健牙膏，将来可用于口腔的保健。本专利技术建立了十数樟组织培养再生体 系，可为下游提取分析药用活性成分提供充足的植物材料。经检索，到目前为止，现有技术 中还没有专门针对十数樟组织培养的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于提供，即通过建立十数樟组织 培养的快繁体系，获得大量十数樟小苗，为下一步从十数樟中提取分析药用活性成分提供 充足的植物材料。 本专利技术的目的是这样实现的： 1、本方法包括下列步骤： ① 外植体消毒 用于愈伤诱导的外植体为靠近叶柄处的嫩叶基部或嫩芽基部； 外植体消毒采用0. 1%升汞消毒6min后倒掉废液，又用新的0. 1%升汞消毒6min后倒 掉废液，再使用无菌水冲洗6?8次； ② 愈伤诱导 愈伤诱导所用的培养基为：MS + 1.6mg/L 6BA + lmg/L IBA + 0· lmg/L TDZ ; ③ 芽分化 芽分化所用培养基为：MS + L 6mg/L 6BA + 0· 2mg/L IBA ; ④ 小苗的伸长 小苗伸长所用培养基为：MS + 0. 4?0. 8mg/L 6BA + 0. lmg/L IBA，将芽分化培养基上 获得的丛生芽，分割成小块接种于该培养基上； ⑤ 根的诱导 第一步，根原基诱导培养基为：1/2MS + 0· 4mg/L NAA+ 0?lmg/L IBA ; 第二步，根伸长培养基为1/2MS + 0. 3%活性炭； ⑥ 炼苗及移栽 炼苗及移栽按常规方法。 工作原理： 植物细胞具有全能性，具有通过脱分化再分化生成完整植株的能力。通过在不同阶段 施加不同配比的外源生长调节剂，例如细胞分裂素，使得植物细胞逐步分化成完整植株。 2、本方法的用途 我们的前期研究发现，非洲传统药用植物--十数樟的提取物具有良好的抗细菌和抗 真菌作用；且作为一种天然植物类抗菌剂，不会产生耐药性。 本方法可获得大量十数樟小苗，用于下游提取分析药用活性成分以及园林绿化 等。 本专利技术具有下列优点和积极效果： 能将从非洲引进的十数樟通过组织培养快速繁殖获得大量小苗，从而为下游提取十数 樟活性药用成分提供充足的植物材料，加快口腔保健品的开发进程。 【专利附图】【附图说明】 图1是愈伤的照片； 图2. 1是丛生芽的照片--球状丛生芽横切后两个半球照片，a是挨着空气的球面，b 是位于培养基内部的球面； 图2. 2是丛生芽的照片--球状丛生芽横切面位置的照片； 图3是丛生苗的照片； 图4. 1是诱导根的照片--根原基诱导培养基上发生的白色根点的照片； 图4. 2诱导的根的照片--根伸长培养基上培养5天左右根的照片。 英译汉： 1、 6BA :6_苄基氨基嘌呤； 2、 IBA :卩引哚乙酸； 3、 TDZ :噻重氮苯基脲； 4、 NAA :萘乙酸。 【具体实施方式】 下面结合附图和实施例详细说明： 一、方法 ① 外植体消毒 用于愈伤诱导的外植体为靠近叶柄处的嫩叶基部或嫩芽基部； 多次实验证明该部位出愈率高，而叶片其它部位(包括未展开的嫩叶）在伤口处可发生 愈伤，但出愈率较低。 外植体消毒采用0. 1%升萊消毒6min后倒掉废液，又用新的0. 1%升萊消毒6min 后倒掉废液，再使用无菌水冲洗6?8次； ② 愈伤诱导 愈伤诱导所用的培养基为：MS + 1.6mg/L 6BA + lmg/L IBA + 0. lmg/L TDZ ;接种1周 即可看到外植体开始膨大，逐步形成黄绿色的愈伤(局部有黑褐色） 见图1 ; ③ 芽分化 芽分化所用培养基为：MS + L 6mg/L 6BA + 0· 2mg/L IBA ; 该培养基诱导丛生芽效率极高，芽诱导后的接种小块外形呈球状，芽密集分布在球状 表面，难以统计个数，且畸形芽较少，见图2. 1、图2. 2 ; ④ 小苗的伸长 小苗伸长所用培养基为：MS + 0.4mg/L 6BA + 0. lmg/L IBA，将芽分化培养基上获得 的丛生芽，分割成小块接种于该培养基上； 2周即可看到小苗明显长大，见图3 ; ⑤ 根的诱导 因高浓度的激素能促进根原基形成，但抑制根的伸长。因此该步采用的是两步生根法。 第一步，根原基诱导培养基为：1/2MS + 0· 4mg/L NAA+ 0· 5mg/L IBA ; 第二步，根伸长培养基为1/2MS + 0. 3%活性炭； 十数樟小苗在第一步上产生根原基后可生根，但生根后根伸长很慢，且多次实验发现 不同批次小苗出现肉眼根点所用时间波动范围较大，范围为7?21天，故不好判断何时将 小苗转至第二步，因此待肉眼观察到根点后，再将小苗转移至第二步(见图4. 1、图4. 2);每 瓶接种小苗个数4?6个，每个小苗生根数目1?12个，根均粗壮；不同批次生根率波动范 围为 21. 1% ?37. 7%。 ⑥炼苗及移栽 炼苗及移栽按常规方法。 生根小苗长至6cm左右，茎段正常生长，进行炼苗与移栽；炼苗时先去除橡皮筋， 松动封口膜，7天后逐步移开封口膜，保持容器内有少量水使培养基不至于干硬，2周完全 去除封口膜，3周后进行移栽；洗净小苗根部培养基后，移栽至小盆；所用基质为1 :1的腐 殖质和蛭石，高温灭菌后使用；移栽后将基质浇透水；为防止水分过度蒸发，移栽后用透明 塑料薄膜罩口，并留通风细缝，防止霉菌滋生；7天后逐步扩大通风口，2周后完全移除塑料 袋。【权利要求】1. ，其特征在于包括下列步骤： ① 外植体消毒 用于愈伤诱导的外植体为靠近叶柄处的嫩叶基部或嫩芽基部； 外植体消毒采用0. 1%升汞消毒6min后倒掉废液，又用新的0. 1%升汞消毒6min后倒 掉废液，再使用无菌水冲洗6?8次； ② 愈伤诱导 愈伤诱导所用的培养基为：MS + 1.6mg/L 6BA + lmg/L IBA + 0· lmg/L TDZ ; ③ 芽分化 芽分化所用培养基为：MS + L 6mg/L 6BA + 0· 2mg/L IBA ; ④ 小苗的伸长 小苗伸长所用培养基为：MS + 0. 4?0. 8mg/L 6BA + 0. lmg/L IBA，将芽分化培养基上 获得的丛生芽，分割成小块接种于该培养基上； ⑤ 根的诱导 第一步，根原基诱导培养基为：1/2MS + 0· 4mg/L NAA+ 0?lmg/L IBA ; 第二步，根伸长培养基为1/2MS + 0. 3%活性炭； ⑥ 炼苗及移栽 炼苗及移栽按常规方法。【文档编号】A01H4/00GK104145819SQ201410393484【公本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种十数樟组织培养快繁方法，其特征在于包括下列步骤：①外植体消毒用于愈伤诱导的外植体为靠近叶柄处的嫩叶基部或嫩芽基部；外植体消毒采用0.1%升汞消毒6min后倒掉废液，又用新的0.1%升汞消毒6min后倒掉废液，再使用无菌水冲洗6～8次；②愈伤诱导愈伤诱导所用的培养基为：MS + 1.6mg/L 6BA + 1mg/L IBA + 0.1mg/L TDZ； ③芽分化芽分化所用培养基为：MS + 1.6mg/L 6BA + 0.2mg/L IBA；④小苗的伸长小苗伸长所用培养基为：MS + 0.4～0.8mg/L 6BA + 0.1mg/L IBA，将芽分化培养基上获得的丛生芽，分割成小块接种于该培养基上；⑤根的诱导第一步，根原基诱导培养基为：1/2MS + 0.4mg/L NAA+ 0～1mg/L IBA；第二步，根伸长培养基为1/2MS + 0.3%活性炭；⑥炼苗及移栽炼苗及移栽按常规方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕世友，张玲玲，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：湖北;42