【技术实现步骤摘要】
肠杆菌Z0206细菌富硒多糖的制备方法及应用
本专利技术涉及一种耐硒菌株驯化、富硒研究及利用该菌制备富硒多糖的方法和该富 硒多糖在提高免疫调节功能和抗氧化功能中的应用，它属于微生物学及生物工程技术领 域。
技术介绍
硒作为一种重要的微量元素，越来越受到科学界的重视。研究表明，硒具有提高机 体免疫力、抗氧化、解毒、抑制肿瘤、预防心血管疾病发生等功能。 无机硒化合物毒性远高于有机硒化合物，且生物利用率低。只有将无机硒转化为 有机硒，才具有食用和保健价值。 硒的生物有机化主要是通过动物、植物、微生物转化无机硒生产有机硒。通过生物 进行硒的有机化不仅可以为人类提供富含有机硒的食品及保健品，而且又可以为畜牧业生 产提供富含有机硒的添加剂，是一个极具有广阔前景的方法。 部分可以进行硒有机化的微生物分泌的多糖具有免疫增强活性，表现出对宿主免 疫的介导和调节作用，通过刺激免疫细胞的成熟、分化和增殖，改善宿主机体平衡，达到恢 复和提高宿主细胞对淋巴因子、激素及其他生理因子的反应性。以此为基础，这些多糖表现 出与免疫力相关的多种活性功能，如抗肿...
【技术保护点】
一种肠杆菌Z0206富硒多糖的制备方法，其特征包括以下步骤：(1)肠杆菌Z0206耐硒菌株驯化：挑取肠杆菌Z0206耐硒菌株，先后涂布于含硒量分别为10、20、30、40以及50μg/mL的PDA加富培养基上，进行硒浓度梯度驯化；每个梯度于28‑32℃培养24‑36h；最后从含硒量50μg/mL的PDA加富培养基平板上挑取生长良好的菌落于平板上划线分离，纯化后斜面保存；(2)肠杆菌Z0206富硒研究：通过测定细菌的生长曲线，确定最佳加硒时间和培养时间；从斜面上挑取驯化好的菌种，PDA培养基平板活化培养24‑36h后，接种于装有PDA液体培养基的三角瓶中；28‑32℃振荡培养...
【技术特征摘要】
1. 一种肠杆菌Z0206富硒多糖的制备方法，其特征包括以下步骤： (1) 肠杆菌Z0206耐硒菌株驯化： 挑取肠杆菌Z0206耐硒菌株，先后涂布于含硒量分别为10、20、30、40以及50μ g/mL的 PDA加富培养基上，进行硒浓度梯度驯化；每个梯度于28-32°C培养24-36h ;最后从含硒量 50 μ g/mL的PDA加富培养基平板上挑取生长良好的菌落于平板上划线分离，纯化后斜面保 存； (2) 肠杆菌Z0206富硒研究： 通过测定细菌的生长曲线，确定最佳加硒时间和培养时间；从斜面上挑取驯化好的菌 种，PDA培养基平板活化培养24-36h后，接种于装有PDA液体培养基的三角瓶中；28-32°C 振荡培养，每隔lh无菌操作取出lmL培养液，用分光光度计测定580nm下的吸光值；绘制耐 硒菌的生长曲线；通过生长曲线确定加硒时间及培养时间； 从斜面上挑取已经驯化好的耐硒菌种，接种于含硒量分别为10、15、20、25、30以及 35 μ g/mL的PDA加富培养基上，28-32 °C培养24-48h，选取培养基上菌体颜色略红、生长良 好的硒浓度作为最佳硒浓度； (3) 发酵液获取： 将耐硒驯化后的肠杆菌Z0206菌种，接种至PDA加富液体培养基中进行摇瓶发酵， 28-321：往复振荡培养，培养时间18-1911，得到发酵罐发酵种子液；发酵罐内加入70%发酵 培养基，121°C蒸汽灭菌20min后，接种种子液，培养13h时加入无菌亚硒酸钠溶液，使培养 基最终含硒量为25 μ g/mL，发酵时间48-72h，得到含有肠杆菌Z0206富硒多糖的发酵液； (4) 多糖粉末获取： 将步骤（3)所得的发酵液于60-70 °C浓缩为原体积的1/10, 80-90 °C水浴1-1. 5h， 5000rpm离心10_15min，收集上清液，加入3-5倍体积的预冷95%乙醇，静置12h，5000rpm 离心10-15min，沉淀依次用无水乙醇、丙酮和无水乙醚洗涤2-3次，离心，沉淀真空干燥，得 到富硒粗多糖粉末； (5) 蛋白酶处理： 将步骤（4)所得的富硒粗多糖粉末溶解于20倍体积的热蒸馏水中，用Na2COjMpH至 7. 0-9. 0,加入质量为多糖质量1/40-1/20的胰蛋白酶，55°C水解l_2h后，用草酸调pH值至 5. 0-5. 7,加质量为多糖质量1/40-1/20的木瓜蛋白酶，65-70...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪以真，徐春兰，靳明亮，姚国佳，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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