一种白花杜鹃组织培养的方法技术

本发明专利技术涉及一种白花杜鹃的组织培养方法，所述的方法包括：1)外植体的选取，2)外植体消毒，3)初始诱导培养，4)增殖培养，5)生根培养，6)炼苗和移栽。采用本方法繁育白花杜鹃，可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，尤其是白花杜鹃组织培养
。 一种白花杜輯组织培养的方法
技术介绍
白花杜胃$ (Rhododendron mucronatum(Bl. )G. Don)，为杜胃$花科植物，半常绿灌 木，高1一3米；幼枝开展，分枝密，密被灰褐色开展的长柔毛，混生少数腺毛。幼枝、叶、花 柄，子房被褐色粗伏毛或有腺毛。叶二型，叶椭圆形至椭圆状披针形，长3- 5厘米，宽1一2 厘米，顶端钝而有小而短尖头，基部楔形；叶上表面深绿色，疏被灰褐色贴生长糙伏毛，混生 短腺毛，中脉、侧脉及细脉在上面凹陷，在下面凸出或明显可见；叶柄长2-4毫米，密被灰褐 色扁平长糙伏毛和短腺毛。花1一3朵，顶生，有芳香；萼片披针形，长约1. 5厘米，有腺毛， 宿存；花冠纯白色，有时有淡蔷薇色或有条纹，宽钟状或宽漏斗形，长3. 5- 5厘米，5裂，裂 片卵状椭圆形；雄蕊10,有时8,近基部有腺毛。蒴果长约1厘米，短于花萼。花期4一5月。 本种分布于华东及日本，在日本经长期栽培后已部分引入中国；半常绿灌木。暖地 为常绿。 白花杜鹃枝干优美，花期长，为优良的园林绿化植物。 白花杜鹃还具有较大的经济价值，常常被作为药物使用。 目前，白花杜鹃多采用嫁接繁育来进行生产栽培，这繁育技术提高品种的纯度，保 持了品种特性，但成活率较低及繁殖速度较慢，制约了白花杜鹃产业的发展。而组织培养育 苗技术既可以保持种的纯度和特性，也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。 现有技术中，尚无白花杜鹃的组织培养方法的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，可实现白花杜 鹃快速大量繁殖。 为了解决上述技术问题，本专利技术提出下列技术方案： ，其特征在于所述的方法包括以下步骤： 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪 成2_3cm的莖段； 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度 30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min ;随后在超净工作台上以70-75 %的酒 精消毒25-35秒，0. 1 %升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养 皿备用； 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始 诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3000LX、光周期10-14h/d，温度25°C ±2°C ;培 养6-8d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d 至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0. 3-0. 6mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ; 4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件 为光强2500-3000LX、光周期10h/d，温度25°C ±2°C ;培养20d后，至新芽长出并伸长 到 lcm 以上；所述的培养基组成 MS+6-BA0. 4-0. 6mg/L+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 8-L 2mg/ L+KTO. 8-1. 2mg/L。 5)生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强 2500-3000LX、光周期12h/d，温度25°C ±2°C;培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为 1/2MS+IBA0. 2-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ； 6)炼苗和移栽：将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d 后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度 70% -80%，适当遮荫即可； 所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KN031900mg/L，硝酸铵NH 4N031650mg/ L，磷酸二氢钾 KH2P03170mg/L，硫酸镁MgS04 ·7Η20370π^/1 ;钙盐：氯化钙 CaCl2 ·2Η20440π^/ L ;微量元素：碘化钾 ΚΙ(λ 83mg/L，硼酸 Η3Β036· 2mg/L，硫酸锰 MnS04 · 4Η2022· 3mg/L，硫酸 锌 ZnS04 · 7Η208· 6mg/L，钥酸钠 Na2Mo04 · 2Η200· 25mg/L，硫酸铜 CuS04 · 5Η200· 025mg/L， 氯化钴CoCl2 · 6H200. 025mg/L ;铁盐：乙二胺四乙酸二钠 Na2-EDTA37. 25mg/L，硫酸亚铁 FeS04 · 7Η2027· 85mg/L ;有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0· 5mg/L，盐酸吡 哆醇 0· 5mg/L，烟酸 0· 5mg/L ;蔗糖 30g/L，琼脂粉 7g/L，pH 为 5. 7 ; 所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KN039 50mg/L，硝酸铵NH4N038 2 5mg/ L，磷酸二氢钾KH2P0385mg/L，硫酸镁MgS04 · 7H20185mg/L ;余同上述MS培养基； 所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤； 所述的NAA为α -萘乙酸； 所述的ΙΒΑ为吲哚-3- 丁酸； 所述的ΚΤ为激动素； 所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。 优选的，所述步骤3)中初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 2mg/L。 优选的，所述步骤4中分化和增殖培养用培养基为：MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 3mg/ L+IBA1. Omg/L+KTl. Omg/L。 优选的，所述步骤6)中生根用培养基为：1/2MS+IBA0. 4mg/L+PVP8mg/L。 采用本专利技术繁殖白花杜鹃，可实现白花杜鹃组培苗的大量组织培养，为白花杜鹃 生产栽培和品种改良奠定基础。 为了更好的阐述技术方案，下面结合【具体实施方式】对本专利技术作进一步的说明，但 本专利技术所要求的保护范围不限于下列实施例。 【具体实施方式】 实施例1 1)外植体的选取：取当年生直径2-5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪 成2_3cm的莖段； 2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗中保持温度 30°C处理30min，然后以自来水冲洗10min ;随后在超净工作台上以70%的酒精消毒25秒， 0. 1 %升汞溶液中处理5分钟，然后以无菌水冲洗4遍，置于无菌培养皿备用； 3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2_3mm，茎段按末端向下插入初始 诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3000LX、光周期10-14h/d，温度25°C ±2°C ;培 养8d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养18d至新芽 长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0. 3mg/L+NAA0. lmg/L ; 4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为 光强2500-3000LX、光周期10h/d，温度25°C ±2°C ;培养20d后，至新芽长出并伸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：1)外植体的选取：取当年生直径2‑5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成2‑3cm的茎段；2)外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度30‑35℃处理30‑45min，然后以自来水冲洗10‑20min；随后在超净工作台上以70‑75％的酒精消毒25‑35秒，0.1％升汞溶液中处理5‑7分钟，然后以无菌水冲洗4‑5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2‑3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期10‑14h/d,温度25℃±2℃；培养6‑8d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12‑18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6‑BA0.3‑0.6mg/L+NAA0.1‑0.3mg/L；4)增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期10h/d,温度25℃±2℃；培养20d后，至新芽长出并伸长到1cm以上；所述的培养基组成MS+6‑BA0.4‑0.6mg/L+NAA0.2‑0.5mg/L+IBA0.8‑1.2mg/L+KT0.8‑1.2mg/L。5)生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强2500‑3000Lx、光周期12h/d,温度25℃±2℃；培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为1/2MS+IBA0.2‑0.5mg/L+PVP5‑10mg/L；6)炼苗和移栽：将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3‑5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20‑25℃，湿度70％‑80％，适当遮荫即可；所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO31900mg/L，硝酸铵NH4NO31650mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O0.025mg/L，氯化钴CoCl2·6H2O0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2‑EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7；所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO3950mg/L，硝酸铵NH4NO3825mg/L，磷酸二氢钾KH2PO385mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O185mg/L；余同上述MS培养基；所述的6‑BA为6‑苄氨基嘌呤；所述的NAA为α‑萘乙酸；所述的IBA为吲哚‑3‑丁酸；所述的KT为激动素；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。...

【技术特征摘要】
1. 一种白花杜鹃组织培养的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤： 1) 外植体的选取：取当年生直径2-5mm的白花杜鹃枝条为外植体，剪去叶片后剪成 2-3cm的茎段； 2) 外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20KHz超声波清洗机中保持温度 30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10-20min ;随后在超净工作台上以70-75 %的酒 精消毒25-35秒，0. 1 %升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养 皿备用； 3) 初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始诱导 培养基中培养，培养条件为光强2500-3000LX、光周期10-14h/d，温度25°C ±2°C;培养6-8d 后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽 长出；所述的初始诱导培养基组成为：MS+6-BA0. 3-0. 6mg/L+NAA0. 1-0. 3mg/L ; 4) 增殖培养：将步骤3)新芽剪下并转接到新芽伸长和增殖培养基中，培养条件为光强 2500-3000LX、光周期10h/d，温度25°C ±2°C;培养20d后，至新芽长出并伸长到lcm以上； 所述的培养基组成 MS+6-BA0. 4-0. 6mg/L+NAA0. 2-0. 5mg/L+IBA0. 8-1. 2mg/L+KT0. 8-1. 2mg/ L〇 5) 生根培养：将步骤4)的新芽剪下，转接到生根培养基中，培养条件为光强 2500-3000LX、光周期12h/d，温度25°C ±2°C;培养15d后，生出新根；生根培养基的配方为 1/2MS+IBA0. 2-0. 5mg/L+PVP5-10mg/L ； 6) 炼苗和移栽：将有生根的白花杜鹃幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3 - 5 d 后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25 °C，湿度 70% -80%，适当遮荫即可； 所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KN...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴勤，王冬梅，李慧珍，
申请(专利权)人：芜湖欧标农业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34