一种多肽在制备治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种多肽在治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途，涉及炎症和自身免疫性疾病及其他和核因子-κB（NF-κB）活化异常有关疾病的药物的应用。该多肽具有抑制核因子-κB活化，并阻断核因子-κB介导的多个参与炎症过程的炎症因子的表达和产生，达到抑制炎症细胞的增殖和炎症细胞参与的炎症过程的生物效应。应用该多肽及衍生物，或通过转染相应的cDNA在细胞内表达该多肽，能达到有效抑制炎症细胞增殖及炎症过程的作用，在制备炎症，自身免疫病及有关疾病的治疗药物、及诊断试剂的中具有独特的使用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种多肽在制备治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途
本专利技术属于医学生物工程领域，涉及一种多肽在制备治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途。
技术介绍
核因子-κB(NF-κB)是调节细胞基因转录的关键因子之一，活化后的核因子-κB(NF-κB)可直接启动和调节众多参与炎症反应、免疫反应相关基因的转录，调控大量细胞因子、黏附分子的表达，在机体的炎症、免疫反应等方面发挥重要作用。免疫功能失调引起的炎症和炎症相关性疾病(病毒感染，休克，过敏性疾病，炎症和自身免疫病)严重危害人类健康。大量研究表明，这些疾病的发生与发展和NF-κB的活化有密切关系，因此研究表明，通过调控NF-κB的活化，从而对多种疾病的临床治疗发挥良好的干预作用，寻找有效抑制NF-κB活化的化合物和药物就意味着寻找这些疾病的治疗手段。然而目前现代医学和药物所应用的抑制NF-κB活性的多种措施，由于效价、特异性、副反应、可行性等多方面的问题，临床应用往往受到限制。目前人们正加紧研发以NF-κB和它介导的信号转导通路为药物靶点的新化合物用于治疗多种疾病特别是炎症性疾病药物。NF-κB是一种能与免疫球蛋白轻链基因的增强子B序列(GGGACTYrcc)特异性结合的核蛋白，因首先发现其参与B细胞免疫球蛋白的K轻链转录调控而命名。NF-κB家族成员中，由p50/p65亚基形成的二聚体具有NF-κB分子主要的生物活性。在细胞未受刺激的状态下，NF-κB与一类被称为NF-KB抑制因子(IKB)的家族抑制蛋白结合，使NF-κB二聚体无法从细胞质向细胞核内转移，阻止NF-κB结合到相关基因序列，从而抑制NF-κB的调节蛋白质表达的生物活性。当细胞受到各种内源性、外源性的配体以及机械性、化学性等刺激后，IKB不再和NF-κB结合，NF-κB从胞质移位到核内，并经过多个蛋白质激酶的磷酸化激活，激活后的NF-κB并结合到靶基因的启动子或增强子区域的NF-κB结合序列，调节(增加或减少)靶基因转录和蛋白合成。NF-κB可诱导许多因子转录，如细胞因子、趋化因子、黏附分子、生长因子、免疫受体、促/抑凋亡蛋白、补体、病毒、iNOS、COX-2等，特别是NF-KB和多种炎症性因子的表达和产生密切相关，比如：白介素1(IL-1)，白介素2(IL-2)，白介素6(IL-6)，白介素8(IL-8)，肿瘤坏死因子A(TNF-A)，内皮细胞黏附分子如自细胞黏附分子-1(ELAM-1)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)，趋化因子如单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等。所以，NF-κB对免疫功能的调节非常关键，而NF-κB的活化在这一过程中起着至关重要的作用。虽然目前炎症发病的详细机制仍不明确，多数研究认为免疫功能紊乱在炎症疾病发病中起关键作用，同时也发现NF-κB的活化在大多数炎症疾病中存在，所以NF-κB的活化过程目前已成为治疗炎症疾病的靶点，而能阻断NF-κB生物活性的抑制剂具有良好的调节炎症过程的作用。细胞内外的多种刺激可通过多种信号通路激活NF-κB，活化的NF-κB可以调节多种基因的表达，对多种细胞内过程特别是机体免疫反应起着非常重要的作用，我们可以通过调节这些信号通路来抑制NF-κB的活化，从而调节多种炎症因子的产生和分泌，使炎症反应减轻或消除，从而达到治疗多种疾病的目的。所以，开发具有以NF-κB激活的信号通路中任何一个环节为靶点的细胞内阻断剂，以此来获得靶向性强、副作用小的药物，为治疗多种疾病新药开发新的途径。目前研究已证实PI3K(三磷酸肌醇-3-激酶)参与了NF-κB的活化和免疫反应过程，所以抑制PI3K的活性是一个切实可行的抑制NF-κB信号转导从而达到治疗NF-κB活化异常引起的疾病特别是炎症相关疾病的方法，目前也有多种PI3K抑制剂正在进行临床前或临床研究应用于治疗NF-κB异常激活比如炎症性疾病，但是，由于目前开发的PI3K抑制剂存在抑制特异性低等问题，体内毒性和副作用大，严重影响了PI3K抑制剂应用于治疗NF-kB异常活化相关疾病药物中。PI3K由多个亚型成员构成，其中p55PIK就是PI3K家族成员，以前研究结果证明p55PIK参与了激活NF-κB信号转导，特别是高表达p55PIK促进了NF-κB信号转导活化，比如p65蛋白质的磷酸化。所以，如果能阻断p55PIK信号转导是可以阻断NF-κB活化，从而影响NF-κB介导的生物学功能。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种抑制NF-κB活化的信号通路的多肽，该多肽具备抑制NF-κB活化的信号通路特别是降低NF-κB中p65亚基的磷酸化的生物学功能，从而调节NF-κB转录因子结合目的基因的能力，影响NF-κB目的基因产物蛋白质的转录和表达。由于NF-κB参与了多种疾病过程，所以该多肽可以有效治疗由于NF-κB异常活化相关疾病特别是炎症。除炎症外，该多肽还可以用于治疗其他由于NF-κB参与的疾病比如：病毒感染，休克，神经退化性疾病，过敏性疾病和自身免疫病等。上述抑制NF-κB活化的信号通路的多肽的氨基酸序列为：甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸，简称P15多肽。P15多肽具备抑制NF-κB活化的信号通路特别是降低NF-κB中p65亚基的磷酸化的生物学功能，从而调节NF-κB转录因子结合目的基因的能力，影响NF-κB目的基因产物蛋白质的转录和表达。由于NF-κB参与了多种疾病过程，所以该多肽可以有效治疗由于NF-κB异常活化相关疾病特别是炎症。除炎症外，该多肽还可以用于治疗其他由于NF-κB参与的疾病比如：病毒感染，休克，过敏性疾病和自身免疫病等。本专利技术提供的是P15多肽在治疗NF-κB异常活化疾病(如病毒感染，休克，过敏性疾病和自身免疫病)的药物中的应用，和P15多肽现已公开的阻断PCNA结合DNA聚合酶，从而阻止细胞DNA合成抑制细胞增殖的用途并不相同。在研究中，我们发现了一个多肽片段在细胞中抑制了NF-κB中p65亚基蛋白质的磷酸化。该多肽片段的序列为：甲硫氨酸－脯氨酸－酪氨酸－丝氨酸－苏氨酸－谷氨酸－亮氨酸－异亮氨酸－苯丙氨酸－酪氨酸－异亮氨酸－谷氨酸－甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸；(见《氨基酸和核苷酸序列表》)，在以后该多肽称为P15，由于NF-κB的p65蛋白质的磷酸化改变了NF-κB转录因子和其目的基因的结合及NF-κB的目的基因的转录水平，从而改变了这些目的基因编码的蛋白质的表达和产生。由于这些蛋白质很多参与了多种细胞过程特别是免疫过程和炎症过程，所以P15多肽片段是NF-κB信号通路的抑制剂。根据这一结果，我们设想，如果在细胞中表达P15，这一多肽能抑制NF-κB的p65和/或其他蛋白的磷酸化，从而抑制了NF-κB介导的信号转导通路。证明上述模型的关键之处在于把P15多肽导入细胞中，再观察P15多肽对NF-κB介导的信号转导通路(比如p65磷酸化)和NF-κB调节目的基因(比如肿瘤坏死因子A，TNF-α)表达和产生的影响。为达到这一目的，我们采用分子生物学的手段，制造一个DNA构建体，这一构建体编码含有P15多肽片段的融合蛋白，再把这种构建体转入培养的人细胞中，然后观察表达P15多肽片段本文档来自技高网...

【技术保护点】
P15多肽在制备治疗核因子‑κB异常活化疾病药物中的用途，所述P15多肽的氨基酸序列为：甲硫氨酸‑脯氨酸‑酪氨酸‑丝氨酸‑苏氨酸‑谷氨酸‑亮氨酸‑异亮氨酸‑苯丙氨酸‑酪氨酸‑异亮氨酸‑谷氨酸‑甲硫氨酸‑天门冬氨酸‑脯氨酸，该多肽通过抑制核因子‑κB的活化，从而阻断核因子‑κB介导的信号转导通路，影响核因子‑κB结合DNA有关基因序列而改变多个参与炎症过程的蛋白质因子的表达和产生。

【技术特征摘要】
1.P15多肽在制备核因子-κB活化抑制剂中的用途，所述P15多肽的氨基酸序列为：甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸，该多肽通过抑制核因子-κB的活化，从而阻断核因子-κB介导的信号转导通路，影响核因子-κB结合DNA有关基因序列而改变多个参与炎症过程的蛋白质因子的...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡俊波，夏献民，王桂华，王晶，
申请(专利权)人：武汉益承生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42