本发明专利技术提供了一种用于治疗老年性痴呆及改善学习记忆的14肽，其氨基酸序列为：Lys-Ser-Leu-Thr-Leu-Thr-Ser-Ser-Leu-Ser-Tyr-Thr-Asp-Ser。该14肽可以通过化学合成的方法合成，也可以将14肽序列推导成核苷酸序列，然后克隆到表达载体中进行生物合成。通过14肽对神经细胞培养液中NO及NOS的影响试验及14肽对Aβ所致大鼠老年性痴呆的治疗作用的试验的结果本发明专利技术的14肽用于治疗老年性痴呆的活性显著。14肽对东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍的改善作用试验结果表明14肽用于改善学习记忆作用明显。
【技术实现步骤摘要】
具有治疗老年性痴呆及改善学习记忆新用途的14肽化合物
本专利技术涉及一种全合成的14肽，以及该14肽为活性成分在制备治疗老年性痴呆与改善学习记忆的药品及保健食品中的应用。
技术介绍
老年性痴呆又称阿尔茨海默病，临床表现以进行性认知障碍，智力衰退和人格改变为特征。流行病学调查显示，AD患病率占老年人的7%-8%左右，患病率成逐年上升趋势。目前该病列死亡原因第4位，成为当年老年医学所面临的最为严峻的问题之一，据统计显示，目前，我国约有老年性痴呆患者600万人，占世界总病例的四分之一，并且每年平均还有30万的新增病例。老年性痴呆已严重危及老年人的健康，并且给患者、家庭和社会带来了巨大的精神和经济压力。对于记忆力减退的症状常表现为做事丢三落四，注意力分散，不能集中，常伴有头疼、头晕、心悸、健忘、多梦等。中医学认为其因多由五志过极，劳逸失调，素质不强或病后体虚，饮食不节所引发，上述症状属于病症，目前，该病无明显治疗药物，虽有些安神、醒脑、镇静的药物具有一定缓解病症的作用，但疗效并不显著，影响着人们正常生活。近年来，国外对肽类作为增强学习和记忆能力活性成分的研究有一定的进展。2010 年 Matharu B.等人(Peptides, 2010, 31,1866-1872 页)发现一种妝(retro-1nverspeptides)可作为治疗由β _淀粉样蛋白引起的老年痴呆的药物。Gozes 1.等人(Neurobiology of Aging, 2000, 21,169页)选用一种具有神经保护作用的肽的片段(NAP)，通过鼻内途径给药的方式治疗AD。结果显示，用胆碱能阻断剂ethylcholineaziridium(AF64A)处理过的小鼠，经鼻吸入NAP，可显著提高空间学习记忆(水迷宫)能力。实验结果还表明，该物质可通过血脑屏障。体外实验结果表明，NAP增加cGMP和一氧化氮产物的同时具有抗氧化作用。其结果表明，NAP可以作为治疗阿尔茨海默病药物开发的先导化合物。SnowA.D.等人(Alzheimer，s and Dementia, 2008, 4(4),463-464 页)在转基因鼠模型中发现一种新型可改善阿尔茨海默病情的小肽(DP-74)，这种肽具有可穿过血脑屏障降低脑淀粉样蛋白沉积以及增强APP转基因小鼠记忆的作用，揭示了新型小肽对AD和其相关异常疾病的治疗与预防方面的发展提供了新的希望。Kita Y.等人(Neuropeptides,2006, 40(6)，434页)发现一种新型的神经保护性肽Colivelin，它可保护神经免受AD相关损伤及 Αβ 引起的死亡。Windisch Μ.等人(Alzheimer，s and Dementia, 2006, 2(3),643页)研究发现，β-突触核蛋白衍生的小肽在慢性的和急性的神经退行性病变的组织培养中表现出显著地神经保护作用。此小肽同样在AD的动物模型中进行了研究，包括对认知功能的影响和同样的减少淀粉样蛋白的相关病理学改变，结果显示突触核蛋白衍生肽可能成为不同神经退行性病变有效治疗策略发展的基础。本专利技术通过全合成方法得到了此14肽，细胞水平与动物的实验研究结果表明具有较强治疗老年性痴呆以及改善学习记忆能力的活性作用，因此该14肽可能成为良好的治疗老年性痴呆及改善学习记忆的药品及保健食品活性成分。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供了一种14肽具有治疗老年性痴呆的活性。具体的说是14肽用于治疗老年性痴呆的新用途。14肽对神经细胞培养液中NO及NOS的影响试验表明能够明显抑制Αβ 25_35诱导的SH-SY5Y细胞NO含量增加及NOS活性，提示14肽对Αβ 25_35致SH-SY5Y细胞氧化损伤具有较好的保护作用。大鼠Αβ所致老年性痴呆的试验结果表明14肽具有改善大鼠老年痴呆作用，且能恢复到正常大鼠水平。细胞水平和大鼠整体试验结果表明本专利技术的14肽具有较强的治疗老年性痴呆的活性作用。本专利技术的目的之二是提供了一种14肽具有改善学习记忆的活性。具体的说是14肽用于改善学习记忆的新用途。东莨菪碱所致小鼠学习记忆障碍试验表明14肽对小鼠学习记忆障碍有明显的改善作用。在本专利技术之前，尚未见14肽(氨基酸序列为=Lys-Ser-Leu-Thr- Leu-Thr-Ser-Ser-Leu-Ser-Tyr-Thr-Asp-Ser)在治疗老年痴呆及改善学习记忆的药品及保健食品中的应用的报道。本专利技术的14肽，是通过以下的方法来制备的: (1)将0.1 mmol Tenta Gel Amide树脂放入反应器中，加入二氯甲烧溶胀半小时,然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基被9-芴甲氧羰基保护的丝氨酸0.2 mmol, 二异丙基乙胺0.2 mmol，适量的二甲基甲酰胺和二氯甲烷，此处适量是指以可使树脂充分鼓动起来为宜，用氮气鼓泡反应60 min,然后加入约I mmol当量甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、甲醇洗净； (2)加入适量20%哌啶和80 % 二甲基甲酰胺去除9-芴甲氧羰基保护基，露出氨基，洗净，茚三酮检测； (3)往反应器中加入序列中第二个氨基酸天冬氨酸Immol，0.2 mmol N, N’-二异丙基碳二亚胺及1-羟基苯并三唑，氮气鼓泡反应半小时，抽掉液体，用二甲基甲酰胺、甲醇洗净，茚三酮检测； (4)依步骤1.2,1.3的方式依次加入序列中氨基酸.抽掉液体，用二甲基甲酰胺洗净，茚三酮检测； (5)将树脂用氮气吹干后，从反应柱中取下并称取重量，倒入烧瓶中，然后往烧瓶中加一定量的95 %三氟乙酸切割液，震荡反应2小时； (6)滤掉树脂，得到滤液，然后向滤液中加入大量乙醚，析出粗产物，然后离心，清洗即可得到该序列的粗产物； (7)分析提纯和质谱检测:用电喷雾电离离子源质谱仪检测该序列分子量的正确性，用凝胶色谱将粗品提纯至要求纯度； (8)收集纯化好的目标多肽溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末，收率为85%。本专利技术的14肽，除通过上述的化学方法合成外，也可以将14肽序列推导成核苷酸序列，然后克隆到表达载体中进行生物合成。本专利技术的14肽，可以根据需求与其他载体共同制成药物制剂，这些载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、香味剂、甜味剂。药物制剂可以是硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、口服液、液体饮料、注射剂中的一种或多种。I本专利技术的14肽具有治疗老年性痴呆及改善学习与记忆的用途，是通过以下活性试验得到证实。一、本专利技术14肽对神经细胞培养液中NO及NOS的影响 1.实验方法 本专利技术实例中SH-SY5Y细胞获得自中国科学院细胞库。1.1细胞培养 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y培养于含10%小牛血清的DMEM培养基中，37°C饱和湿度5% C02培养。每周更换培养基2~3次，0.125%胰蛋白酶工作液消化分散细胞，进行传代培养。1.2八运25_35老化实验 将A β 25_35用超纯水配制成浓度为500 μ mol/L的溶液，在37°C培养箱中放置7天老化，分装至EP管中，-20 V保存备用。 1.3 A β 25_35致SH-SY5Y细胞损伤浓度的测本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种14肽在制备治疗老年性痴呆的药品、保健食品中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种14肽在制备治疗老年性痴呆的药品、保健食品中的应用。2.—种14肽在制备改善学习记忆的药品、保健食品中的应用。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的14肽的氨基酸序列为=Lys-Ser-Leu-Thr-Leu-Thr-Ser-Ser-Leu-Ser-Tyr-Thr-Asp-Ser04.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于所述的14肽的制备方法为: (1)将0.1 mmol Tenta Gel Amide树脂放入反应器中，加入二氯甲烧溶胀半小时,然后抽掉二氯甲烷，加入序列中第一个氨基被9-芴甲氧羰基保护的丝氨酸0.2 mmol，二异丙基乙胺0.2 mmol，适量的二甲基甲酰胺和二氯甲烷，此处适量是指以可使树脂充分鼓动起来为宜，用氮气鼓泡反应60 min,然后加入约I mmol当量甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用二甲基甲酰胺、甲醇洗净； (2)加入适量20%哌啶和80 % 二甲基甲酰胺去除9-芴甲氧羰基保护基，露出氨基，洗净，茚三酮检测； (3)往反应器中加入序列中第二个氨基酸天冬氨酸Immol，0.2 mmol N, N’-二异丙基碳二亚...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗浩铭，王颖，陈英红，姜瑞芝，
申请(专利权)人：罗浩铭，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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