含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用，该靶向敲除载体由pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9质粒用EcoRI和SacII酶切、补平后连接经BstXI酶切、补平的pAdTrack-CMV质粒，然后用BbsI线性化后连入目的基因的特异靶序列，再用PmeⅠ线性化和CIAP碱性磷酸酶去磷酸化后与pAdEasy-1质粒重组而得，获得的靶向敲除载体能够在靶序列区域突变基因序列，且突变率高，达30.6％-45.8％，可以用于基因定点突变，为基因治疗奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用
本专利技术属于表达系统领域，具体涉及含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体及其腺病毒和应用。
技术介绍
CRISPR/Cas9系统是一种存在于细菌和古细菌中的一种后天免疫系统，以消灭外来的核酸或噬菌体，并在自身基因组中CRISPR位点留下能表达与入侵病毒基因组序列相匹配的小分子RNA，用以保护细菌和古细菌不受病毒的侵害。当含有CRISPR/Cas9系统的细菌和古细菌感染病毒后，CRISPR RNA就能通过互补序列结合病毒基因组，并表达CRISPR相关酶，由于CRISPR相关酶属于核酸酶，能切割病毒DNA分子，从而阻止病毒复制。自2013年以后,研究者们在《Science》、((Nature Biotechnology))等杂志上发表多篇文章介绍CRISPR/Cas9系统，并且已成功在人类、小鼠、斑马鱼等物种上实现精确的基因修饰。但是，目前CRISPR/Cas9相关的实验对象都局限在细胞水平的操作，例如，细胞系或者单细胞胚胎等，并未将CRISPR/Cas9基因靶向操作技术直接用于活体动物。腺病毒载体法 是基因治本文档来自技高网...

【技术保护点】
含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于：所述靶向敲除载体由pX330‑U6‑Chimeric_BB‑CBh‑hSpCas9质粒用EcoRI和SacII酶切、补平后连接经BstXI酶切、补平的pAdTrack‑CMV质粒，然后用BbsI线性化后连入目的基因的特异靶序列，再用PmeⅠ线性化和CIAP碱性磷酸酶去磷酸化后与pAdEasy‑1质粒重组而得。

【技术特征摘要】
1.含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于:所述靶向敲除载体由pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9 质粒用 EcoRI 和 SacII 酶切、补平后连接经 BstXI 酶切、补平的PAdTrack-CMV质粒，然后用BbsI线性化后连入目的基因的特异靶序列，再用Pme I线性化和CIAP碱性磷酸酶去磷酸化后与pAdEasy-Ι质粒重组而得。2.根据权利要求1所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于:所述目的基因为GFP或c-myc基因。3.根据权利要求2所述含有CRISPR/Cas9系统的靶向敲除载体，其特征在于:目的基因为GFP的特...

【专利技术属性】
技术研发人员：周勇，温平，申友锋，杨晓芳，李建均，何久香，王蜀英，牟浪，陈小雨，
申请(专利权)人：重庆高圣生物医药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆;85