一种构建犬瘟热病毒反向遗传系统的方法技术方案

本发明专利技术的目的是提供一种构建犬瘟热病毒反向遗传系统的方法，本发明专利技术中引物设计充分考虑到在构建质粒FA、FB和FC时要保证各段基因开放阅读框的完整性，尤其是质粒FB含有完整H基因和F基因，H和F基因是CDV主演的研究内容，对毒力和免疫原性有重要影响，质粒FB的构建为本发明专利技术在以后使用中对CDV主要研究内容的基因操作提供了便利，此外个各引物和酶切位点的选择也是基于这方面的考虑，可以将各主要基因片段完整酶切替换等基因克隆操作。总之，本方法中通过间质粒FA、FB和FC的构建相比有方法大量减少了基因克隆的次数，位后期不同目的用途提供了便利条件。

【技术实现步骤摘要】
一种构建犬瘍热病毒反向遗传系统的方法
本专利技术属于病源微生物基因组学研究
，具体涉及。
技术介绍
犬痕热是由犬痕热病毒(Canine Distemper Virus,CDV)感染引起的,具有高度接触性、致死性的急性败血症。CDV在副粘病毒家族中与麻疹病毒、牛瘟病毒同属麻疹病毒属，是副粘病毒科中一个血清学上密切相关的属，宿主特异性却各自不相同。犬瘟热病毒感染犬可导致隐性感染，有肠道症状，或有呼吸道症状，有时伴有中枢神经系统症状。神经症状也可能是犬瘟热感染的晚期表现。犬瘟热病毒基因组是不分节段RNA病毒全长15690bp，在自然界分离的病毒基因长度上存在高度一致性，并遵循六碱基原则。其3’ -端和5’ -端分别是先导序列和尾随序列，它们在调苄基因复制和转录中起作用，5’-端的非编码区可能含有核衣壳化起始位点和编码反基因3’ -端 复制启动子。犬瘟热病毒自3’ -端至5’ -端非重叠方式表达6个结构蛋白分别为核衣壳蛋白(Nucleocapsidprotein, NP)、磷蛋白(Phosphoprotein, PP)、基质蛋白(Matrix protein, MP)、融合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种构建CDV反向遗传全基因载体的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤：1)首先设计用于扩增CDV基因组不同片段的9对引物，引物的序列信息如下：引物名称引物序列序列表顺序F1f5’‑ACCAGACAAAGTTGGCTAT‑3’SEQ ID NO:1F1r5’‑AGTAAGCATCCTCATCTTGG‑3’SEQ ID NO:2F2f5’‑ATGAGGATGCTTACTAAGATGC‑3’SEQ ID NO:3F2r5’‑TGGATCTATTACTCTGACTTGG‑3’SEQ ID NO:4F3f5’‑AGAGTAATAGATCCAGGACTCG‑3’SEQ ID NO:5F3r5’‑A...

【技术特征摘要】
1.一种构建CDV反向遗传全基因载体的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤: I)首先设计用于扩增CDV基因组不同片段的9对引物，引物的序列信息如下: 2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的HamRz pUHdv Rz pUHdv Rz p2的引物序列信息如下: ...

【专利技术属性】
技术研发人员：单虎，蒋文明，杜翔，黄娟，杨瑞梅，张传美，秦志华，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37