通过图案化转移片材的试剂靶向递送制造技术

将固定在平面支持物上离散位置中的分子物质(如凝胶或印迹膜上的蛋白条带或者膜上斑点或点形式的物质)与通过平面支持物上方放置的多孔亲水性转移片材施加的结合试剂发生反应，该片材具有至少一个以阻隔为侧向边界的区域，有边界的区域内留存有结合试剂。将有边界的区域置于平面支持物上的区域的正上方，如果支持物上存在分子物质，则预期这些物质存留在该平面支持物上的区域中。随后将结合试剂递送至支持物以与物质接触。随后以改善的效率实现结合试剂的靶向递送。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过图案化转移片材的试剂靶向递送相关申请的交叉参考本申请根据35U.S.C.§1.119(e)的规定，要求2012年7月25日提交的美国临时申请号61/675,451的权益，该申请内容通过引用全文纳入本文。专利技术背景和概述1.
本专利技术涉及生物结合试验的领域，具体而言涉及将结合成员或其他试剂转移至膜、凝胶或其他平面支持物上的点、条带或其他空间阵列，用于检测、鉴定和定量的目的。2.现有技术说明通常将在平板凝胶上已通过电泳分离的蛋白、核酸或其他生物物质转移至硝酸纤维素、尼龙、聚二氟乙烯或类似材料的膜上以用于鉴定和定量，原因在于与凝胶相比，这些步骤更易于在膜上操作。常用的转移技术是电印迹，其中凝胶和膜的平坦表面直接接触且电流横向通过凝胶和膜，从而通过与凝胶内物质移动相类似的方式转移物质。当该物质是DNA片段时，转移称为Southern印迹，该名称来源于其最初使用者英国生物学家EdwinM.Southern。类似地，RNA片段的转移称为Northern印迹，蛋白或多肽的转移称为Western印迹。其他示例是针对翻译后修饰的“Eastern”印迹和针对蛋白相互作用的“FarWestern”印迹。所有这些类型的电印迹都可以湿、干或半干的形式进行。在湿印迹中，凝胶和膜在层叠体中彼此覆盖，该层叠体浸没于容器中的转移缓冲溶液内，该容器壁上安装有导线或板状电极。随后对电极施加电压以使溶质从凝胶迁移至膜。在半干印迹中，使用了用转移缓冲液湿润的滤纸，且层叠体的顶部和底部含有该滤纸，凝胶和膜位于滤纸之间以形成“印迹夹心”。随后使电极直接接触湿润滤纸的暴露表面。干电印迹不使用除凝胶中残留缓冲液以外的液体缓冲液。湿、干和半干电印迹以及相关材料和设备的描述可参见Margalit等(英杰公司(Invitrogen))的美国专利申请公开号US2006/0272946A1(2006年12月7日公开)、US2006/0278531A1(2006年12月14日公开)和US2009/0026079A1(2009年1月29日公开)；Littlehales(美国伯内特公司(AmericanBionetics))的美国专利号4,840,714(1989年6月20日授权)；Dyson等(阿莫仙国际公司(AmershamInternational))的美国专利号4,889,606(1989年12月26日授权)；Schuette(生命科技公司(LifeTechnologies,Inc.))的美国专利号5,013,420(1991年5月7日授权)；Chan等(雅培实验室(AbbottLaboratories))的美国专利号5,356,772(1994年10月18日授权)；Camacho(胡夫科学仪器公司(HoeferScientificInstruments))的美国专利号5,445,723(2005年8月29日授权)；Boquet(BC公司(Bertin&Cie))的美国专利号5,482,613(1996年1月9日授权)；以及Chen(威泰克企业股份有限公司(WealtecEnterpriseCo.,Ltd.))的美国专利号6,592,734(2003年1月15日授权)。无论电印迹是以湿、干或是半干形式进行，均使用检测试剂进一步处理所得电印迹以在可通过适用于生物物质本身的方法检测的印迹中呈现该物质。例如，在Southern和Northern印迹中，该检测试剂是通过检测荧光或化学发光染料来监测的杂交探针。在Western印迹中，该检测试剂可包括一抗并随后使用二抗以检测抗体，该二抗被荧光团、发色团或酶标记。或者，可使用检测剂(如生物素或亲和素/链霉亲和素)标记二抗，该检测剂是否存在是可以检测的。在FarWestern印迹和Eastern印迹中使用了生物化学技术人员已知的类似或相似方法。生物试验中还使用了除电印迹以外的空间阵列。例如，结合试验可以直接在平板凝胶以及质谱目标、ELISA板和已经以规则间隔或不规则间隔的二维阵列形式沉积在膜或其他支持物表面的蛋白、核酸或其他生物物质上进行，该沉积是通过静电喷雾、真空沉积、针点样法(pinspotting)和其他方法进行的。在所有这些空间阵列中，应用于点的结合试剂(包括检测试剂、杂交探针、抗体或其他物质)是这些步骤成本的重要组分，且由于结合发生的条带或点仅占据支持物表面积的一小部分，浪费了大量体积的任意给定试剂。限制成本的一种方式是使用高度稀释形式的结合试剂，但需要延长接触时间，这限制了给定时间内可完成的分析数目。概述现在已发现，通过使用转移片材上侧向限定区域中含有结合试剂的多孔亲水性转移片材，可高效地将结合试剂应用于点样在平坦表面上的物质。该片材可由阻隔侧向限定。合适的阻隔包括疏水性阻隔(如蜡阻隔)或由多孔亲水性转移片材的气相或液相硅烷化形成的阻隔。合适的阻隔还包括不可透过阻隔。这类不可透过阻隔包括包含塑料、聚合物或树脂的阻隔。在一些情况下，该不可透过阻隔是支持亲水性转移片材的框架，该转移片材悬浮于框架内。在一些情况下，该阻隔由疏水性(如蜡或硅烷化纤维素)和不可透过阻隔的组合构成。例如，在一些情况下，多孔亲水性转移片材被不可透过(如塑料或树脂)阻隔框架围绕并由蜡或硅烷化纤维素阻隔进一步细分。随后在使结合试剂向表面转移的条件下使转移片材与平坦表面接触，从而应用于经点样物质。结合成员可通过扩散充满限定的区域而不跨过阻隔，并在接触具有经点样表面的转移片材后，结合成员将其接触限于点或者包括该点、与该区域对准的小面积区域。从片材至点的转移可通过简单扩散发生，或可通过多种已知方法中的任意一种(如电印迹)诱导。例如，为使试剂针对印迹膜上所需位点处感兴趣的分析物，需放置多孔片材使得限定区域与膜上分析物(如果存在)所占据的位置对准。对准可通过多种已知方式实现，如对准膜和多孔片材上的标记或特征。在一些实施方式中，可以定向的方式递送试剂，使得转移片材在侧向限定区域中含有结合试剂并将结合试剂转移至不与转移片材的侧向限定区域垂直对准的平坦表面的侧向限定区域。例如，限定该侧向限定区域的阻隔可形成一个或多个通道以在转移期间指导结合试剂的流动。作为另一个示例，可从转移片材通过一个或多个额外的具有偏移侧向限定亲水性区域的亲水性片材至平坦表面来影响转移。作为另一个替代方案，各自具有仅部分穿透各转移片材的侧向限定区域的第一和第二转移片材可相对放置以建立垂直通道。随后该垂直通道可使来自第一转移片材的结合试剂转移至不与第一转移片材对准的平面支持物上的区域。该限定区域可以是毫米大小的比例(如10mm或更少)、微米大小(100微米或更少)甚至亚微米大小，且其宽度可基本等于：电印迹中单个泳道、横跨一系列平行泳道的单个条带、一部分泳道(其中具有不同检测试剂的两个或多个区域可置于单个泳道的不同片段上)或限制与印迹膜上感兴趣的特定区域接触的任何小区域。对于凝胶或含有具有潜在兴趣的分子物质的条带或点的任何其他表面上的应用也是如此。在一些情况下，限定区域的宽度基本相当于电印迹中1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或更多条泳道的宽度。该转移片材可含有任何大小的圆形、矩形、方向等限定区域的阵列。例如，该转移片材可以是圆形本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过使水基结合试剂接触分子物质以确定所述分子物质是否固定在平面支持物上的方法，所述方法包括：(a)使所述平面支持物与具有侧向限定区域的多孔亲水性片材接触，所述侧向限定区域以疏水性或不可透过的阻隔为边界并将所述水基结合试剂保留在所述侧向限定区域内，同时将所述侧向限定区域对准所述平面支持物上可能固定了所述物质的点；(b)使所述水基结合试剂从所述多孔亲水性片材的所述侧向限定区域向所述点转移；以及(c)检测所述水基结合试剂与所述分子物质之间发生的任何结合反应，以所述结合作为所述点中存在所述分子物质的指示。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.25 US 61/675,4511.一种通过使抗体接触抗原以确定所述抗原是否固定在印迹膜上的方法，所述方法包括：(a)使所述印迹膜与具有侧向限定区域的多孔亲水性片材接触，所述侧向限定区域以疏水性的阻隔为边界并将所述抗体保留在所述侧向限定区域内，同时将所述侧向限定区域对准所述印迹膜上可能固定了所述抗原的点；(b)使所述抗体从所述多孔亲水性片材的所述侧向限定区域向所述点转移，这包括：将第一缓冲溶液湿润的吸收材料片材置于所述印迹膜中与所述多孔亲水性片材接触一侧相对的一侧，并将第二缓冲溶液湿润的吸收材料片材置于所述多孔亲水性片材中与所述印迹膜接触一侧相对的一侧，从而形成转移叠层，并使电流以导致所述转移的方向通过所述转移叠层；以及(c)检测所述抗体与所述抗原之间发生的任何结合反应，以所述结合作为所述点中存在所述抗原的指示。2.如权利要求1所述的方法，所述疏水性阻隔是蜡或硅烷化转移片材。3.如权利要求2所述的方法，所述硅烷化转移片材包含硅烷化...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·T·麦基，W·斯特朗，
申请(专利权)人：生物辐射实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US