一种同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的方法及试剂盒技术

本发明专利技术属于生物技术应用领域，涉及一种以TaqMan探针为基础的同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的含内质控的多重荧光RT-PCR方法。本发明专利技术针对人的冠状病毒229E、OC43、NL63代表株的N基因的保守序列设计特异性引物和探针，建立了含内质控的一步法多重荧光RT-PCR快速检测方法，操作简便快捷，克服了常规单重荧光RT-PCR单孔单检的繁琐，简化了操作程序，节省了试验成本，利用其较高的特异性、灵敏度、高效性和稳定性为病毒的现场检测、卫生评价、临床诊断等方面提供了有力的技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
—种同时检测人的冠状病毒229E、0C43、NL63的方法及试剂盒
本专利技术涉及生物技术应用领域，尤其是用于人的冠状病毒229E、0C43、NL63的同时检测与鉴定。
技术介绍
人冠状病毒(Human coronaviruses)属于冠状病毒科,是病毒中的一个大家族，因电镜下病毒颗粒形似王冠而得名。冠状病毒颗粒形态呈圆形、椭圆形或轻度多形性，直径IOOnm~120nm,其基因组为单股正链RNA,是目前已知的RNA病毒中最大的(大小介于27kb~32kb之间)，基因组含有约7~10个功能基因，其中4~5个编码结构蛋白，从5’端至3’端依次为5’-多聚酶-HE-S-E-M-N-3’。冠状病毒具有严格的宿主特异性，只感染自然宿主或亲缘关系密切的宿主，冠状病毒感染广泛分布于全世界各地，主要发生在冬春季节。人冠状病毒HCoV-229E和HCoV-0C43是在1960年发现的，SARS-CoV是在2003年流行的，HCoV-NL63和HCov-HKUI分别在2004、2005年被确定，目前，在人群中常发的是HCoV_229E、HCoV-0C43及HCoV-NL63，是人群呼吸道感染的重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测人的冠状病毒229E、OC43、NL63的方法，其特征在于是含内质控的一步法多重荧光RT‑PCR，其特异性引物和探针序列分别为：1)SEQ NO：1、2、4、5、7、8、10、11所示的引物；2)SEQ NO：3、6、9、12所示的探针。

【技术特征摘要】
1.一种同时检测人的冠状病毒229E、0C43、NL63的方法,其特征在于是含内质控的一步法多重荧光RT-PCR，其特异性引物和探针序列分别为: 1)SEQNO:1、2、4、5、7、8、10、11 所示的引物； 2)SEQ NO:3、6、9、12 所示的探针。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于如SEQNO:3所示的人冠状病毒229E的N基因探针5’端由FAM标记，3’端由BHQl标记；如SEQ NO:6所示的人冠状病毒0C43的N基因探针5’端由JOE标记，3’端由BHQl标记；如SEQ NO:9所示的人冠状病毒NL63的N基因探针5’端由ROX标记，3’端由BHQ2标记；如SEQ NO:12所示的质控基因LDHA基因探针5’端由CY5标记,3’端由BHQ2标记。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述多重荧光RT-PCR的反应体系: a)反应缓冲液； b)反应酶； c)SEQNO:1、2、4、5、7、8、10、11 所示的引物； d)SEQ N...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔淑娟，石伟先，黄芳，田丽丽，张新，陈萌，孙玉兰，王海滨，张玉松，
申请(专利权)人：崔淑娟，
类型：发明
国别省市：北京;11