一种诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法技术

本发明专利技术提供一种诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法，属林木组培繁育技术领域。主要是以枫香带芽茎段为外植体，诱导定芽萌发，然后用无菌幼芽叶片、叶柄、茎段为材料，诱导产生胚状体，再由胚状体诱导再生植株进行炼苗驯化、移栽上盆的繁殖方法。采用本发明专利技术提供的枫香快繁技术进行批量生产，方法简便，再生周期短，繁殖系数高，移栽成活率高，出苗整齐一致，便于养护管理，节约人力及土地资源，生产成本低，不受季节限制持续获得再生植株，可用于苗木产业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种诱导枫香胚状体再生的组培快速繁殖方法，属于林木组培繁育
。
技术介绍
枫香是我国的彩叶乡土树种，叶色随季节变化，春夏叶色嫩绿，秋天叶色则有由黄逐渐蜕变为鲜红，五彩缤纷，是一种良好的园林景观树种。在北美地区，美国枫香早已被广泛应用于行道树以及其它绿化用树，取得了良好的绿化和美化效果。同时，枫香又有“荒山先锋”树种之称，是优良生态防护树种。由此观赏价值及经济价值，枫香在我国的城市绿化中逐步广泛应用，需求量也日趋增加。目前，枫香的繁殖技术主要以播种育苗和扦插繁殖为主，但这些方式都存在以下不足之处:播种育苗技术出苗率低、不整齐、且易变异，对保存母株的优良性状有一定影响，成苗周期长，出苗受季节限制，如要大批量出苗，需大量人力、物力及土地资源，生产成本高；扦插虽然能很好的保存母株优良性状，但同样受季节影响，也存在生产成本高的缺点。综上所述，寻找方法便捷，可批量出苗，生产成本低的枫香组培快繁方式，推动产业化生产极具必要性。在2008年华中农业大学许林的博士论文《枫香基因转化体系的研究以及枫香AGAM0US基因的初步功能分析》中曾提到建立枫香叶片的植株再生体系，主要是以叶片为材料，诱导形成不定芽生根炼苗。该研究虽然提高了一定的繁殖系数，但培养周期较长、批量移栽成活率低等不足。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术中的不足，通过诱导胚状体再生途径，提供了一种培养简单，繁殖系数高，再生周期短，可持续获得再生植株的方法，同时降低成本，可用于苗木产业化生产。本专利技术是这样实现上述目的的: ，包括以下步骤: (1)茎段诱导萌发:截取当年生无病虫害的红叶枫香萌条的第二个至第四个带芽幼嫩茎段为材料，除去叶片，切段进行常规消毒，将消毒茎段切成1.ο-1.5cm长，每段带一个腋芽，接种到三角瓶内的培养基I上，密封，并在温度为24±2°C下、湿度为75±2%下、光照为14-16h/d下、光强为1800-20001x下的恒温恒湿培养室内，培养7_15d，得到无菌苗； (2)诱导胚状体:将步骤(1)中的无菌苗分为茎段、叶柄、叶片，接种到三角瓶内的培养基II上，密封，在温度24±2°C下、湿度为75±2%下分别进行为期10-15天的暗培养，再将经暗培养后的茎段、叶 柄、叶片转接到三角瓶内的培养基III上，密封，分别进行为期10-25天的第二次暗培养，将经第二次暗培养的茎段、叶柄、叶片移至300-5001x光照条件下，光培养7-10d，形成团状胚状体；(3)胚状体诱导再生:将步骤(2)中的团状胚状体分解成单粒，置于三角瓶内的培养基IV中，密封，于1800-20001x光照条件下培养30_40d，分化成完整的再生植株； (4)炼苗转移:将步骤(3)中完整的再生植株瓶苗移到培养室外，在自然光条件下炼苗5-7d，打开瓶盖继续驯化3-5d后再进行移栽上盆，移栽基质为园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩，其中园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩的体积比为2:1:1:1，移栽后将基质浇透水，放于PVC温室大棚进行养护，第一个月，每天喷洒叶面水1-2次，空气相对湿度保持在80%以上，温度保持为20-25°C，一个月后，每间隔一周施用腐熟饼肥一次，得到枫香组培苗。所述的培养基I 为 WPM、0.2-1.0mg/L 的 6_ΒΑ、0.05-0.lmg/L 的 ΝΑΑ、0.01-0.lmg/L的TDZ、10-3(^/1的蔗糖、2-68/1的琼脂粉；其中，1?1、6-84、應4、了02、蔗糖、琼脂粉的质量比为 2500-3000:0.1-1.5:0.02-0.22:0.02-0.35:21000-38000:3500_7500。所述的WPM、0.5mg/L 的 6_BA、0.08mg/L 的 ΝΑΑ、0.04mg/L 的 TDZ、30g/L 蔗糖、5g/L 琼脂粉的质量比为 2700:0.85:0.15:0.22:30000:5000。 所述的培养基II 为 WPM,0.2-1.0mg/L 的 6_BA、0.05-0.lmg/L 的 NAA、10_30g/L的蔗糖、2-6g/L的琼脂粉；其中，WPM、6-BA、NAA、蔗糖、琼脂粉的质量比为2500-3000:0.1-1.5:0.02-0.22:21000-38000:3500_7500。所述的培养基II 为 WPM、0.33 mg/L 的 6_BA、0.02mg/L 的 NAA、27g/L 的蔗糖、3.8g/L的琼脂粉；其中，1?1、6-84、應么、蔗糖、琼脂粉的质量比为2850:0.46:0.17:3000:7500。所述的培养基III 为 WPM,0.01-0.lmg/L 的 TDZ,0.05-0.lmg/L 的 NAA、10_30g/L的蔗糖、2_6g/L的琼脂粉；WPM、TDZ、NAA、蔗糖、琼脂粉的质量比为2500-3000:0.02-0.35:0.05-0.lmg/L:21000-38000:3500_7500。所述的培养基III 为 WPM、0.36mg/L 的 TDZ、0.03 的 NAA、18g/L 的蔗糖、3.4g/L 的琼脂粉；WPM、TDZ、NAA、蔗糖、琼脂粉的质量比为2750:0.35:0.8:29000:7500。所述的培养基IV为WPM、10_30g/L的蔗糖、2_6g/L的琼脂粉；其中，WPM、蔗糖、琼脂粉的质量比为 2500-3000 =21000-38000:3500_7500。所述的培养基IV为WPM、30g/L的蔗糖、5g/L的琼脂粉；其中，WPM、蔗糖、琼脂粉的质量比为 2500:21000:3500o本专利技术的优点在于:枫香诱导胚状体再生组培快繁实用技术方法简便，从外植体诱导到植株再生，移栽炼苗整个培养周期打破传统组培繁殖方式，将芽诱导和生根培养一步完成，缩短培养周期，提高了繁殖系数，减少了组培实验过程中过多的人力和物力的消耗，从根本上提高了工作效率,节约了生产成本,并能达到工厂化育苗的目的；枫香胚状体诱导再生植株，移栽炼苗成活率高，植株适应自然环境的能力强，移栽炼苗后生长迅速，植株健壮。【附图说明】图1枫香茎段诱导萌发。图2为枫香叶片、叶柄、茎段诱导获得胚状体。图3为枫香胚状体颗粒团。图4为枫香胚状体诱导再生植株。图5为枫香炼苗移栽。[0021 ] 图6为枫香移栽两个月。【具体实施方式】实施例1 茎段诱导萌:选择生长迅速、无病虫害等性状优良的红叶枫香为母株，截取当年生红叶枫香萌条的第二个至第四个带芽幼嫩茎段为材料，除去叶片，切段进行常规消毒。将消毒茎段切成1.0-1.5cm长，每段带一个腋芽，接种到启动培养基WPM (1300g) + 6-BA (0.2mg/L，0.13g) + NAA (0.05mg/L,0.12g) + TDZ (0.01mg/L，0.08g) + 蔗糖(30g/L，14000g)+琼脂粉(5g/L，2300g)上，置于环境条件为温度24±2°C、湿度75±2%、光照14h/d、光强1800-20001x的恒温恒湿培养室内，培养IOd后从腋芽处开始有定芽萌动，继续培养12d后其诱导率达100%，且平均每个腋芽均可诱导3-4个芽，生长健壮，叶色嫩绿(图1)。诱导胚状体:(I)将腋芽诱导而来的无菌苗分为茎段、叶柄、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）茎段诱导萌发：截取当年生无病虫害的红叶枫香萌条的第二个至第四个带芽幼嫩茎段为材料，除去叶片，切段进行常规消毒，将消毒茎段切成1.0‑1.5cm长，每段至少带一个腋芽，接种到三角瓶内的培养基I上，密封，并在温度为24±2℃下、湿度为75±2%下、光照为14‑16h/d下、光强为1800‑2000lx下的恒温恒湿培养室内，培养7‑15d，得到无菌苗；（2）诱导胚状体：将步骤（1）中的无菌苗分为茎段、叶柄、叶片，接种到三角瓶内的培养基II上，密封，在温度24±2℃下、湿度为75±2%下分别进行为期10‑15天的暗培养，再将经暗培养后的茎段、叶柄、叶片转接到三角瓶内的培养基III上，密封，分别进行为期10‑25天的第二次暗培养，将经第二次暗培养的茎段、叶柄、叶片移至300‑500lx光照条件下，光培养7‑10d，形成团状胚状体；（3）胚状体诱导再生：将步骤（2）中的团状胚状体分解成单粒，置于三角瓶内的培养基IV中，密封，于1800‑2000lx光照条件下培养30‑40d，分化成完整的再生植株；（4）炼苗转移：将步骤（3）中完整的再生植株瓶苗移到培养室外，在自然光条件下炼苗5‑7d，打开瓶盖继续驯化3‑5d后再进行移栽上盆，移栽基质为园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩，其中园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩的质量比为2：1：1：1，移栽后将基质浇透水，放于PVC温室大棚进行养护，第一个月，每天喷洒叶面水1‑2次，空气相对湿度保持在80%以上，温度保持为20‑25℃，一个月后，每间隔一周施用腐熟饼肥一次，枫香组培苗。...

【技术特征摘要】
1.一种诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)茎段诱导萌发:截取当年生无病虫害的红叶枫香萌条的第二个至第四个带芽幼嫩茎段为材料，除去叶片，切段进行常规消毒，将消毒茎段切成1.ο-1.5cm长，每段至少带一个腋芽，接种到三角瓶内的培养基I上，密封，并在温度为24±2°C下、湿度为75±2%下、光照为14-16h/d下、光强为1800-20001x下的恒温恒湿培养室内，培养7-15d，得到无菌苗； (2)诱导胚状体:将步骤(1)中的无菌苗分为茎段、叶柄、叶片，接种到三角瓶内的培养基II上，密封，在温度24±2°C下、湿度为75±2%下分别进行为期10-15天的暗培养，再将经暗培养后的茎段、叶柄、叶片转接到三角瓶内的培养基III上，密封，分别进行为期10-25天的第二次暗培养，将经第二次暗培养的茎段、叶柄、叶片移至300-5001X光照条件下，光培养7-10d，形成团状胚状体； (3)胚状体诱导再生:将步骤(2)中的团状胚状体分解成单粒，置于三角瓶内的培养基IV中，密封，于1800-20001x光照条件下培养30_40d，分化成完整的再生植株； (4)炼苗转移:将步骤(3)中完整的再生植株瓶苗移到培养室外，在自然光条件下炼苗5-7d，打开瓶盖继续驯化3-5d后再进行移栽上盆，移栽基质为园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩，其中园土，腐叶土，泥炭土，珍珠岩的质量比为2:1:1:1，移栽后将基质浇透水，放于PVC温室大棚进行养护，第一个月，每天喷洒叶面水1-2次，空气相对湿度保持在80%以上，温度保持为20-25°C，一个月后，每间隔一周施用腐熟饼肥一次，枫香组培苗。2.根据权利要求1所述的诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法，其特征在于:培养基 I为 WPM,0.2-1.0mg/L 的 6_BA、0.05-0.lmg/L 的 NAA,0.01-0.lmg/L 的 TDZ、10_30g/L 的蔗糖、2-6g/L的琼脂粉；其中，WPM、6-BA、NAA、TDZ、蔗糖、琼脂粉的质量比为2500-3000:0.1-1.5:0.02-0.22:0.02-0.35:21000-38000:3500_7500。3.根据权利要求2所述的诱导枫香胚状体再生的组培快繁方法，其特征在于:WPM、0.5mg/L 的 6...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨兰芳，张国禹，黄桂云，邱利文，马晓波，汪磊，吴笛，赵华萍，胡梅香，张海波，徐芳，李翩翩，
申请(专利权)人：中国长江三峡集团公司，长江三峡生态园林有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42