一种烟草镉转运基因NtHMA2及其克隆方法与应用技术

本发明专利技术公开了烟草镉转运基因NtHMA2及其克隆方法与应用，烟草镉转运基因NtHMA2核苷酸序列如SEQID：No.1所示，编码的氨基酸序列如SEQID：No.2所示。本发明专利技术还公开了烟草镉转运基因NtHMA2的克隆方法，具体步骤包括：A、确定NtHMA2基因序列；B、提取烟草RNA，反转录得到第一链cDNA；C、根据NtHMA2基因序列设计合成特异性引物，以cDNA作为模板，进行PCR扩增；D、回收和纯化PCR产物；E、纯化产物与载体连接，转化感受态细胞；F、筛选阳性克隆，对阳性克隆PCR扩增、测序。通过调控烟草镉转运基因NtHMA2的表达，可降低镉从烟草根部转运到叶片的转运率，从而降低烟叶的铬含量，为生产绿色优质烟叶提供了基因资源。

【技术实现步骤摘要】
一种烟草镉转运基因NtHMA2及其克隆方法与应用
本专利技术属于遗传工程
，具体涉及烟草镉转运基因NtHMA2及其克隆方法与应用。
技术介绍
烟草0Vicoiia/?a iaAacw?)是重要的经济作物,是爺科一年生草本植物。烟草属大约有60多种。重金属镉是烟草生长的非必须元素，但容易被吸收，并且通过食物链对人体产生危害。镉随水灌溉和污泥进入土壤中，被土壤吸附的镉一般在(Tl5cm的表层土壤中积累。土壤中过量的镉，不仅能在烟草体内残留，而且也会对烟草的生长发育起明显的危害作用，破坏叶绿体结构，降低叶绿素含量，叶片发黄，光合过程的减弱，生长缓慢，植株矮小，根系受到抑制，生长受阻，产量下降。镉污染对烟草种子出苗、烟草光合特性、烟草体内矿质元素含量、烟草组织结构、烟草酶活性、烟草生长量和烟叶品质均有较大影响。Cd2+的吸收主要是通过一些对Cd2+具有低亲和性的多底物金属离子转运蛋白或通道蛋白进入植物细胞内。例如，小麦的LCTI蛋白在酿酒酵母中表达能够介导Cd2+流入细胞内，并使酵母细胞对Cd2+高度敏感，这种Cd2+高度敏感性可能是由于LCTI蛋白对Cd2+吸收所造成的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种烟草镉转运基因NtHMA2，其特征在于所述的烟草镉转运基因NtHMA2核苷酸序列如SEQ ID：No.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种烟草镉转运基因NtHMA2，其特征在于所述的烟草镉转运基因NtHMA2核苷酸序列如SEQ ID:N0.1所示。2.根据权利要求1所述的烟草镉转运基因NtHMA2，其特征在于所述基因编码的氨基酸序列如SEQ ID:N0.2所示。3.一种权利要求1所述的烟草镉转运基因NtHMA2的克隆方法，其特征在于包括以下步骤: A、确定NtHMA2基因序列； B、提取烟草RNA，反转录得到第一链cDNA； C、根据NtHMA2基因序列设计合成特异性引物，以cDNA作为模板，进行PCR扩增； D、回收和纯化PCR产物； E、纯化产物与载体连接，转化感受态细胞； F、筛选阳性克隆，对阳性克隆PCR扩增、测序。4.根据权利要求3所述的烟草镉转运基因NtHMA2的克隆方法，其特征在于所述的步骤A包括如下步骤: (1)利用同源基因拟南芥AtHMA2序列搜索NCBI烟草EST数据库，得到烟草NtHMA2的EST序列；利用此序列比对烟草基因组数据库，获得一个基因序列(Nsyl0129220)，根据此序列设计 RACE 引物,RACE 利用试剂盒 Clontech Smart RACE cDNA Amplification Kit 进行，反应参考试剂盒说明书，3'端扩增到50(T700bp的片段，5'端扩增到40(T600bp的片段； (2)目标片段回收后进行测序，并与核心序列拼...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文正，王丙武，高玉龙，宋中邦，曾建敏，张家瑞，孔光辉，李永平，
申请(专利权)人：云南省烟草农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：云南;53