人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术的技术方案包括三部分内容：1、通过蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术检测UC病人和健康志愿者血清中的差异蛋白质。2、免疫组化法检测不同程度UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。3、实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测不同程度的UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。用本发明专利技术方法比较40例UC病人和40例健康志愿者的血清，发现UC病人血清中HSF2的表达明显升高；通过免疫组化法、实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测UC病人结肠粘膜中HSF2的表达，发现随着UC疾病程度的加重，HSF2的表达逐渐增加。因此，HSF2能作为特异性诊断溃疡性结肠炎的分子标记物被应用。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用，属于生物医学
。本专利技术的技术方案包括三部分内容：1、通过蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术检测UC病人和健康志愿者血清中的差异蛋白质。2、免疫组化法检测不同程度UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。3、实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测不同程度的UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。用本专利技术方法比较40例UC病人和40例健康志愿者的血清，发现UC病人血清中HSF2的表达明显升高；通过免疫组化法、实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测UC病人结肠粘膜中HSF2的表达，发现随着UC疾病程度的加重，HSF2的表达逐渐增加。因此，HSF2能作为特异性诊断溃疡性结肠炎的分子标记物被应用。【专利说明】人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用
:本专利技术涉及一种人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用，属于生物医学
。
技术介绍
:溃瘍性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种以反复腹痛、粘液脓血便等为特征的慢性非特异性结肠炎症。近15年来，我国UC患病数逐年增多，至少已过20万。该疾病现正成为我国消化系统常见疾病和慢性腹泻的主要病因。其发病人群多为青壮年，加之其病程迁延，且与结肠癌的发病存在一定关系，严重影响了患者生活质量和社会生产力。有研究表明，30年以上病史的患者每年患结直肠癌的风险高达20 %，已引起临床学者的高度重视。诊断上，主要依靠患者临床表现、内镜特点及病理支持。内镜检查及活检作为有创手段，不仅患者痛苦大，而且其临床及内镜表现缺乏特异性，加之国内病理医师广泛对UC认识不足，常造成误诊；治疗上，部分患者对某些药物产生抵抗或无效，其严重副作用也显著降低患者的生活质量。UC的发病机制尚未明确，目前认为是多因素相互作用的结果，主要包括遗传，感染，环境和免疫因素。对其病因和发病机制的认识概括为:环境因素作用于遗传易感者，在肠道菌丛(或者目前尚未明确的特异性微生物)的参与下，启动了肠道免疫和非免疫系统，最终导致免疫反应和炎症过程。研究表明，热休克因子l(Heat shock factorl, HSF1)和热休克蛋白(heat shock proteins, HSPs)介导炎症性肠病的保护作用，它们通过炎症因子基因中的热休克元件以及影响炎症相关的转录因子的途径产生抗炎作用，但是对于热休克因子2(Heat shock factor2, HSF2)在UC中发挥的作用国内外都尚未有任何报道。寻找UC的特异性诊断标记物已成为国内外研究的热点，目前仍未发现UC特异性诊断标记物。因此，寻找UC患者特异性的生物标记物作为诊断的分子标志、开发其针对性的生物制剂作为治疗靶点显得尤为重要。
技术实现思路
:本专利技术的目的在于提供一种人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用。本专利技术的作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用的人源HSF2，其分子量为58293.18道尔顿,等电点为4.70,全序列一级结构为:MKQSSNVPAF LSKLffTLVEE THTNEFITffS QNGQSFLVLD EQRFAKEILP KYFKHNNMASFVRQLNMYGF RKVVHIDSGI VKQERDGPVE FQHPYFKQGQ DDLLENIKRK VSSSKPEENK IRQEDLTKIISSAQKVQIKQ ETIESRLSEL KSENESLffKE VSELRAKHAQ QQQVIRKIVQ FIVTLVQNNQ LVSLKRKRPLLLNTNGAQKK NLFQHIVKEP TDNHHHKVPH SRTEGLKPRE RISDDIIIYD VTDDNADEEN IPVIPETNEDVISDPSNCSQ YPDIVIVEDD NEDEYAPVIQ SGEQNEPARE SLSSGSDGSS PLMSSAVQLN GSSSLTSEDPVTMMDSILND NINLLGKVEL LDYLDSIDCS LEDFQAMLSG RQFSIDPDLL VDSENKGLET TKNNVVQPVSEEGRKSKSKP DKQLIQYTAF PLLAFLDGNP ASSVEQASTT ASSEVLSSVD KPIEVDELLD SSLDPEPTQSKLVRLEPLTE AEASEATLFY LCELAPAPLD SDMPLLDS?本专利技术的技术方案包括三部分内容:1、通过蛋白质组学双向凝胶电泳(two-dimens ional gel electrophoresis, 2-DE)和质谱技术(Mass Speetrum, Ms)检测 UC病人和健康志愿者血清中的差异蛋白质。2、免疫组化法检测不同程度UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。3、实时定量PCR(real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blotting)技术检测不同程度的UC病人结肠粘膜HSF2的表达量。本专利技术通过双相凝胶电泳和质谱技术比较40例溃疡性结肠炎(UC)病人和40例健康志愿者的血清，发现UC病人血清中HSF2的表达明显升高；通过免疫组化法、实时定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测UC病人结肠粘膜中HSF2的表达，发现随着疾病的加重(轻、中、重三级)，HSF2的表达增加；因此，HSF2能作为特异性诊断溃疡性结肠炎的分子标记物被应用。【专利附图】【附图说明】:图1.溃疡性结肠炎(UC)病人与健康志愿者血清中蛋白质表达的差异分析。A为阴性对照组，B为UC病人组。箭头所示为差异表达蛋白HSF2。图2.免疫组化检测HSF2在不同程度UC病人粘膜组织中的差异表达分析。A为阴性对照，B、C和D分别任对应轻、中、重度UC病人的HSF2表达水平。HSF2表达特征为胞质或胞核显棕黄色或棕色颗粒。图3.实时定量PCR和蛋白免疫印迹检测HSF2在不同程度UC病人粘膜组织中的差异表达分析。A为实时定量PCR检测HSF2的结果，相对量以GAPDH为内参。B为蛋白免疫印迹检测HSF2的结果，相对量以β -actin为内参。【具体实施方式】:实施例一:溃疡性结肠炎(UC)病人与健康志愿者血清中蛋白质表达的差异分析。1、血清标本收集与处理取研究对象的空腹静脉血5ml,室温放置30min, 2000rpm离心20min,收集血清(不能溶血)。同组40例血清样品，每例取30ul混合均匀。然后使用白蛋白/IgG去除试剂盒去除血清样品中的白蛋白和IgG。再用蛋白沉淀试剂盒对样品蛋白进行浓缩。2、第一向固相梯度等电聚焦电泳及胶条的平衡:(I)从冰箱中取_20°C冷冻保存的水化上样缓冲液(I)(不含DTT，不含Bio-Lyte)一小管(lml/管)，置室温溶解。在小管中加入0.01g DTT, 25 μ I Bio-Lyte的量加，充分混匀。从小管中取出400 μ I水化上样缓冲液，加入100 μ I样品，充分混匀。其中水化缓冲液与样品的体积百分比不得小于4:1。(2)沿着聚焦盘或水化盘中槽的边缘至左而右线性加入样品。(3)分清胶条的正负极，轻轻地将IPG胶条胶面朝下置于聚焦盘或水化盘中样品溶液上，使得胶条的正极(标有+)对应于聚焦盘的正极。确保胶条本文档来自技高网...

【技术保护点】
分子量为58293.18道尔顿，等电点为4.70，全序列一级结构为MKQSSNVPAF LSKLWTLVEE THTNEFITWS QNGQSFLVLD EQRFAKEILP KYFKHNNMAS FVRQLNMYGF RKVVHIDSGI VKQERDGPVE FQHPYFKQGQ DDLLENIKRK VSSSKPEENK IRQEDLTKII SSAQKVQIKQ ETIESRLSEL KSENESLWKE VSELRAKHAQ QQQVIRKIVQ FIVTLVQNNQ LVSLKRKRPL LLNTNGAQKK NLFQHIVKEP TDNHHHKVPH SRTEGLKPRE RISDDIIIYD VTDDNADEEN IPVIPETNED VISDPSNCSQ YPDIVIVEDD NEDEYAPVIQ SGEQNEPARE SLSSGSDGSS PLMSSAVQLN GSSSLTSEDP VTMMDSILND NINLLGKVEL LDYLDSIDCS LEDFQAMLSG RQFSIDPDLL VDSENKGLET TKNNVVQPVS EEGRKSKSKP DKQLIQYTAF PLLAFLDGNP ASSVEQASTT ASSEVLSSVD KPIEVDELLD SSLDPEPTQS KLVRLEPLTE AEASEATLFY LCELAPAPLD SDMPLLDS的人源HSF2作为溃疡性结肠炎特异性诊断分子标记物的应用。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：缪应雷，王昆华，牛俊坤，杜艳，周丽峰，杨刚，
申请(专利权)人：缪应雷，
类型：发明
国别省市：云南;53