樟树无性系组培繁育方法技术

本发明专利技术涉及一种樟树无性系组培繁育方法，属于林木组培繁育技术领域，该方法步骤为：外植体材料的消毒→芽的诱导→芽的增殖→生根诱导→生根苗的炼苗→组培苗的移栽与管理，具体方法是将当年生的嫩梢去掉叶片，切成每段带有1～2个腋芽的茎段，将茎段消毒，用诱导培养基进行诱导培养，新芽再进行增殖培养、生根培养，培育出的生根苗进行炼苗驯化，最后将经驯化的苗移栽到消毒的基质上，进行移栽苗的管理；采用该方法育苗不受季节、天气等自然因素的影响，生产成本低，节约土地资源，提高育苗效率，同时采用该方法能有效防止褐化现象，有效增殖率高，生根苗生长整齐，培养周期短，组培苗移栽成活率高，苗期培育周期短，该项技术有着非常重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及ー种组 培繁育方法，具体涉及，属于林木组培繁育

技术介绍
樟树(Cinnamomum camphora (L. ) Presl),属樟科樟属树种,是常绿乔木,是国家ニ级保护树种。在华南地区，樟树是著名的多用途乡土珍贵树种和经济树种，分布范围广，开发利用程度高，家喻户晓，一直受到人们的高度重视。它除了是珍贵用材外，还可以提炼冰片、樟油等，其深加工产品在医药、光学及エ业上应用广泛，与人们的生产和生活息息相关。目前可供木材和樟油提取的资源已经极为有限。天然分布的樟树大都是低产低质次生林，且多为零星分布，可利用的资源甚少。较好的樟树一般都是房前屋后的风水林、城市景观和道路绿化树木。近年来，随着人们环保意识和商品林建设能力的提高，大規模造林緑化广泛开展，樟树人工林开始大量发展，樟树良种苗木市场巨大。以往樟树苗木培育技术主要有ニ种，一是种子培育，即在樟子种子成熟期，从樟树上采摘果实，把果实经地过去皮处理，得到种子，然后通过对种子适当的处理进步播种催芽培育苗木；其ニ是扦插繁育，即从樟树上采摘半木质化的穗条，用激素处理穗条后，把穗条插入适当的基质中培育苗木。樟树苗木的培育主要依靠种子繁育实生苗。但种子繁育苗木存在如下缺点，ー是种子育苗季节性強，一年ー茬，种子保存时间不长，半年之后发芽率大幅下降；ニ是经科学选育的良种一般种子都很少，难以满足生产应用的需求，而营建种子园投资大，周期长；三是种子培育苗木不能培育无性系，生产上林份分化大，林相參差不齐，对经过选择表现优良的单株，无法实现规模利用。樟树扦插繁育的缺点是，一是老树穗条成活率低，因此需要营建扦插用的采穗圃，经过修剪矮化，培育合适的冠形，多产穗条。采穗圃需要精细化管理，必须投入大量的人工，在劳动カ成本日渐高涨的今日，采穗圃管理成本难以承受；ニ是采穗母株容易老化，使用周期不长，3-5年后即要淘汰；三是扦插成活率受天气、管理、基质、生根素等诸多因素的影响，往往成活率难以保证；四是苗木价格偏高，市场难以接受。樟树是目前我国以南方地区的主要造林树种和园林绿化树种，毎年苗木用量约数亿株，樟树种苗基本上是采用种子繁育实生苗，少量扦插繁育的扦插苗。近几年随着樟树良种选育的深入，所选育出来的的良种受到种子和插穗数量的限制，良种的推广应用遭遇瓶劲。樟树无性系组培繁育技术的攻克，使得大樟树良种的大規模使用成为现实。但是研究人员发现樟树在组织培养中存在以下几方面的问题一是组培芽増殖吋，褐化现象严重，芽尖坏死，甚至枯褐而死，有效增殖率低；ニ是组培生根诱导吋，生根苗生长不整齐，生根苗培养周期长；三是组培苗移栽成活率低，苗期培育周期长，所以研究樟树无性系组培繁育的新技术有非常重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有种子繁育和扦插繁育技术的不足，提供一种，该方法克服了樟树种子繁育受季节影响、种子发芽率低，繁殖速率慢的缺点，同时克服了扦插苗繁育的缺点，实现了樟树良种大规模繁育。为实现上述专利技术的目的，本专利技术采取的技术方案如下 ，包括如下步骤 (1)外植体材料的消毒取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段为带有广2个腋芽的茎段，茎段先用0. 2%灭菌净消毒10 20min，无菌水清洗6次，再用0. 1%升汞，2 5滴吐温80，处理3 5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；消毒成功率在80%以上(见表I)。表I外植体材料的消毒试验 I 试验序号 I 接种芽數 I存活的芽数成功率(％) I 160'4981.67 12.35.28. 80.0 I_^_I_^_I__!_说。_I (2)芽的诱导把步骤(I)经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上，经过6 15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCRa+6-BA 0. 3mg+NAA 0. 05 0. 5mg ;芽的诱导率最高达75. 3%(见表2)。表2不同培养基对外植体腋芽诱导的影响為t本崎择I_—_i__ 丨半じ)I丨K状况丨丨秀け书い.)状况:忑丽:.....豕函涵AiWft,—,丽丨丨:...... DCR79.5 m I,"十片 M:) F，尤愈伤79.6 较 IH I;，I!ト片展} f-, ii組织愈伤tl织 DrR兀揭化，芽绿丨I'In I"兀揭化，￥绿丨1.祖 75.3 壮,Hf汁M丌,尤愈伤组73.4 壮，叶片M开,尤愈伤 a 织 |_ 纽织 MS55 . 6揭化+芽:浓绿fH—'62 . 3渴化1f—:，—芽浓绿胤_.叶片イ、城汗，节Iim WWTWWl F イ(愈伤纽没1_fiijK,打愈伤fi丨.织 注X5和X9为樟树的家系号 (3)芽的増殖将步骤(2)长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代増殖培养基上培养，在増殖培养基培养6 15d，就会形成丛生芽，所述的増殖培养基为DCRa +6-BAO. 5 3mg+NAA 0. 05 0. 5mg+IAA 0. 05 2mg 或 DCR改+ 6-BA 0. 5 4mg+NAA 0. 05 Img ;有效芽的増殖系数最高为3. 2 (见表3和表4)。表3 X5在不同激素不同水平组合正交L9 (34)试验的芽増殖结果分析权利要求1.，其特征在于包括如下步骤 (I)外植体材料的消毒取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段为带有广2个腋芽的茎段，茎段先用O. 2%灭菌净消毒10 20min，无菌水清洗6次，再用O. 1%升汞，2 5滴吐温80，处理3 5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；(2)芽的诱导把步骤(I)经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上，经过6 15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR改+ 6-BA O. 3mg+NAA O. 05 O. 5mg ； (3)芽的增殖将步骤(2)长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养6 15d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR改+ 6-BA O. 5 3mg +NAA O. 05 O. 5mg +IAAO.05 2mg 或 DCR 改+ 6-BA O. 5 4mg +NAA O. 05 Img ； (4)生根诱导步骤(3)的丛生芽的单芽长到I. 5 2cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7 10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为 1/2MS+IBA L 5 2. 5mg +IAA L 5 2. 5mg +6-BA O O. 5mg+NAA·O.05 O. 5mg ； (5)生根苗的炼苗经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗30 40d后，苗高3cm以上，可进行移栽； (6)组培苗的移栽与管理将步骤(5)进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移载时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60-80% ;为防止病害，移苗后当天喷防病药剂800 - 1000倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，I个月后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
樟树无性系组培繁育方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）外植体材料的消毒：取当年生嫩梢去掉叶片，切段，使每段为带有1~2个腋芽的茎段，茎段先用0.2%灭菌净消毒10～20min，无菌水清洗6次，再用0.1%升汞，2～5滴吐温80，处理3～5min，无菌水清洗6次，消毒后备用；（2）芽的诱导：把步骤（1）经消毒的茎段，接种到芽的诱导培养基上，经过6～15d的培养，在腋芽处开始萌动，并长出新芽，所述的诱导培养基为DCR改＋6？BA？0.3mg+NAA？0.05～0.5mg；？（3）芽的增殖：将步骤（2）长出的新芽培养30d后，将新芽切割下来，接到继代增殖培养基上培养，在增殖培养基培养6～15d，就会形成丛生芽，所述的增殖培养基为DCR改＋6？BA？0.5～3mg？+NAA？0.05～0.5mg？+IAA？0.05～2mg或DCR改＋6？BA？0.5～4mg？+NAA？0.05～1mg；？（4）生根诱导：步骤（3）的丛生芽的单芽长到1.5～2cm左右长时，选取叶片展开的单芽，分割下来接到生根培养基中诱导生根，在生根培养基中培养7～10d，茎基部诱导出根，所述的生根培养基为1/2MS+IBA？1.5～2.5mg？+IAA？1.5～2.5mg？+6？BA？0～0.5mg+NAA？0.05～0.5mg；？（5）生根苗的炼苗：经过生根诱导，当苗诱导生根后，将瓶苗置于有70%遮荫的大棚中炼苗30～40d后，苗高3cm以上，可进行移栽；（6）组培苗的移栽与管理：将步骤（5）进行炼苗的樟树苗移栽至消毒的基质上，移载时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，移栽后浇透水；栽植后用塑料薄膜作小拱状盖好小苗保湿，遮荫60？80%；为防止病害，移苗后当天喷防病药剂800－1000倍菌毒清液或多菌灵一次，以后每周喷药剂一次，3d后逐渐打开塑料薄膜，15天后全部打开，待小苗长出新叶时方可开始薄施肥，1个月后，可进行正常的水肥管理。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：曾令海，
申请(专利权)人：广东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：