【技术实现步骤摘要】
一株共表达多元纤维素酶基因的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用
[0001]本专利技术涉及微生物基因工程
,尤其涉及一株共表达多元纤维素酶基因的枯草芽孢杆菌及其构建方法与应用
。
技术介绍
[0002]农作物秸秆,是大自然中最宝贵
、
最便宜的可再生资源之一,是潜在的动物饲料来源,同时也是规模最大的一类农业废弃物,全世界每年可产生超过五十亿吨的农作物残茬
。
农作物秸秆的主要成分木质素
、
纤维素
、
半纤维素等,均属于芳香族高分子化合物,具有难以在自然环境中被降解的复杂三维结构,阻碍纤维素和半纤维素被进一步利用,因而常对秸秆进行预处理以提高纤维素的利用率
。
预处理方法可分为物理法
、
化学法和生物法
。
相对于前两种方法,生物降解更能节省人力
、
物力和财力,是一种较为理想的降解纤维素的方法
。
纤维素酶可分为三类:内切葡聚糖酶
(Endoglucanase,EG,EC:3.2.1.4)、
外切葡聚糖酶
(Exoglucanase,CBH,EC:3.2.1.91)
和
β
‑
葡萄糖苷酶
(
β
‑
glucosidase,BG,EC:3.2.1.21)
,它们协同作用于纤维素使其彻底降解为葡萄糖
。
[0003]枯草芽孢杆菌作为一种被深入研究的模式菌
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.
一株共表达多元纤维素酶基因的枯草芽孢杆菌
C6
‑
AEA3
,其特征在于,所述枯草芽孢杆菌
C6
‑
AEA3
分类为
Bacillussubtilis
,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址为中国武汉武汉大学,保藏日期为
2023
年8月
31
日,保藏编号为
CCTCC NO:M 20231579。2.
权利要求1所述的枯草芽孢杆菌
C6
‑
AEA3
的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:以野生型枯草芽孢杆菌为出发菌株,依次在所述出发菌株中敲入内切葡聚糖酶基因
、
外切葡聚糖酶基因和
β
‑
葡聚糖酶基因;所述野生型枯草芽孢杆菌为
Bacillus subtilis C6
,野生型枯草芽孢杆菌
Bacillus subtilis C6
,保藏于中国典型培养物保藏中心,地址为中国武汉武汉大学,保藏日期为
2022
年9月
26
日,保藏编号为
CCTCCNO:M 20221488。3.
根据权利要求2所述的构建方法,其特征在于,所述敲入的方法基于
CRISPR/Cas9
系统
。4.
根据权利要求3所述的构建方法,其特征在于,所述内切葡聚糖酶基因为内切葡聚糖酶基因
gene2006
;所述内切葡聚糖酶基因
gene2006
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.1
所示;敲入所述内切葡聚糖酶基因的位点为野生型枯草芽孢杆菌的
aprE
位点
。5.
根据权利要求4所述的构建方法,其特征在于,所述外切葡聚糖酶基因为外切葡聚糖酶基因
Cel48S
;所述外切葡聚糖酶基因
Cel48S
的核苷酸序列如
SEQ ID NO.2
所示;敲入所述外切葡聚糖酶基因的位点为野生型枯草芽孢杆菌的
epr
位点
。6.
根据权利要求5所述的构建方法,其特征在于,所述
β
‑
葡聚糖酶基因为
β
‑
葡聚糖酶基因
gene4296
;所述
β
‑
葡聚糖酶基因
gene4296
的核苷酸序列如
技术研发人员:杨雨鑫,陈玉林,刘功炜,公涵萱,崔雯元,
申请(专利权)人:西北农林科技大学,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。