【技术实现步骤摘要】
一种酶联免疫吸附检测方法、试剂盒、使用方法及其应用
[0001]本专利技术涉及酶联免疫检测
,具体涉及一种酶联免疫吸附检测方法
、
试剂盒
、
使用方法及其应用
。
技术介绍
[0002]酶联免疫吸附测定
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay
,
ELISA)
指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法
。
传统
ELISA
技术包括直接法
、
间接法
、
双抗体夹心法和竞争法
。
其中夹心法或间接法是当前广泛使用的
ELISA
技术
。
该技术需要经过两步,甚至三步操作来达到孵育目的
。
操作复杂,且检测时间长
。
[0003]随着需求不断变化,夹心法或间接法也不断更新迭代,从三步孵育法到两步孵育法,再到一步孵育法,最终优化为一步法
。
如专利申请
CN116087503A
公开了一种实现
ELISA
简易操作的方法,其将捕获抗体包被在酶标板底部,将
HRP
酶和检测抗体制成冻干微球后预先放置在酶标板内,使用时,将稀释后的样品加入样本孔内进行孵育,再进行显色反应即可实现检测,该现有技术将
TMB
显色之前的操作整合为一步,一次 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.
一种酶联免疫吸附检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:(1)将捕获抗体固定在酶联反应板上;(2)用蛋白保护剂分别稀释
HRP
酶标抗原与流动性捕获抗体,制备成混合液;(3)稀释样本;(4)将所述稀释后的样本与所述混合液加入所述酶联反应板的反应孔中,进行孵育;(5)洗涤后,加入底物进行孵育;(6)加终止液,读取显示结果
。2. 根据权利要求1所述的酶联免疫吸附检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中
1000mL
蛋白保护剂包括:氯化钾
0.2g
,氯化钠
8.00g
,磷酸二氢钾
0.2g
,磷酸氢二钠
2.9g
,优级胎牛血清
100mL
,
Proclin 300 0.5mL
,
Triton
™ꢀ
X
‑
100 0.5mL
,
2%
鱼皮明胶,
0.05%
聚乙烯吡咯烷酮
K30
,
1%
ꢀ‑
5%BSA
,
0.2%
‑
1% Casein
,
2%
‑
5%
海藻糖,
0.095g Mgcl2
,
0.721g DDT。3. 根据权利要求2所述的酶联免疫吸附检测方法,其特征在于,所述步骤(2)中
1000mL
蛋白保护剂包括:氯化钾
0.2g
,氯化钠
8.00g
,磷酸二氢钾
0.2g
,磷酸氢二钠
2.9g
,优级胎牛血清
100mL
,
Proclin 300 0.5mL
,
Triton
™ꢀ
X
‑
100 0.5mL
,
2%
鱼皮明胶,
0.05%
聚乙烯吡咯烷酮
K30
,
1% BSA
,
0.2%Casein
,
2%
海藻糖,
0.095g Mgcl2
,...
【专利技术属性】
技术研发人员:张世成,杨忠苹,赵和平,
申请(专利权)人:湖南冠牧生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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