生物学样品制备和分析制造技术

本发明专利技术要求保护并且描述了用于制备液体样品的方法和试剂盒

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生物学样品制备和分析
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请涉及并且要求来自
2021
年3月
23
日提交的美国临时专利申请系列号
63/164,870(
其通过提及而以其整体合并入本文
)
的优先权权益
。
[0003]专利技术背景
[0004]包含生物学材料和体液的液体样品经常可以提供至关重要的分析信息
。
然而，这些液体样品中的许多包含各种各样可能阻碍小分子的下游分析的蛋白质
。
另外，靶分析物可能经历了代谢
(
包括葡糖苷酸化
)
，从而导致可以被证明直接挑战分析的复合物
。
为了取得液体样品的更精确分析，适当的样品制备是至关重要的
。
典型的样品制备方法可能需要长的时间和特殊的条件并且不容易自动化
。
[0005]专利技术概述
[0006]专利技术人已认识到对于在下游分析之前从液体样品中有效地提取蛋白质的样品制备方法的需要
。
特别地，采用水解和磁珠纯化两者的样品制备方法
。
[0007]本公开内容的一个方面涉及制备液体样品的方法，其包括下列步骤：用水解酶处理所述液体样品，水解所述液体样品以制备水解物，和用基于磁性的纯化来纯化所述水解物
。
在一个方面，所述液体样品为生物学样品
。
在另一个方面，所述生物学样品选自由下列各项组成的组：尿
、r/>血液
、
口腔液和血浆
。
在另外一个方面，所述水解酶结合至磁珠或磁性颗粒
。
[0008]在一个方面，所述基于磁性的纯化使用磁珠或磁性颗粒
。
在一个进一步的方面，所述基于磁性的纯化进一步包括下列步骤：用沉淀剂使在所述水解物中的蛋白质和任何过量的水解酶沉淀，将所述磁珠或磁性颗粒与沉淀出的蛋白质一起温育对于产生悬浮液来说足够的时间，和通过磁力将所述磁珠或磁性颗粒与所述悬浮液分开以产生上清液
。
在一个方面，所述沉淀剂选自由下列各项组成的组：锌盐
、
硫酸锌
、
二醇类
、
醇类
、
酸类
、
硫酸盐
、
酸类
、
乙腈及其组合
。
在一个进一步的方面，所述沉淀剂为
0.4M
硫酸锌
。
[0009]在一些方面，所述基于磁性的纯化基于免疫纯化或亲和纯化
。
在另一个方面，所述磁珠或磁性颗粒包含以高亲和力与特定靶标相结合的单克隆抗体
、
多克隆抗体
、
合成抗体模拟物
、
适配体
、affimer、DARPin
或寡核苷酸或肽
。
在一些方面，所述磁珠或磁性颗粒包含链霉抗生物素蛋白，并且所述水解酶包含生物素
。
在一些方面，所述基于磁性的纯化基于离子交换
。
在另外一个方面，所述磁珠或磁性颗粒具有从由下列各项组成的组中选择的表面涂层：葡聚糖
、
羧酸钠
、
磷酸盐
、
磷酸氢盐
、
聚丙烯酸
、
油酸
、
二氧化硅
、
氯化2‑
羟丙基三甲基铵
、
聚乙烯亚胺
、
二乙氨基乙基纤维素
、
聚
(4
‑
乙烯基吡啶
)
和磺酸钠
。
[0010]在一些方面，所述液体样品进一步包含内部标准
。
在另一个方面，所述水解酶能够水解糖苷键
。
在另外一个方面，所述水解酶为
β
‑
葡糖醛酸糖苷酶
、
胰蛋白酶
、
胰凝乳蛋白酶
、
蛋白酶
、LysC、LysN、AspN、GluC、ArgC、
链霉蛋白酶
、
胃蛋白酶
、
氨酰基脯氨酸二肽酶
。
在一个进一步的方面，所述水解酶能够水解在代谢物
(
例如，阿片样物质代谢物
)
中的一个或多个键
(
例如，可待因
‑6‑
葡糖苷酸键和吗啡
‑6‑
葡糖苷酸键
)。
[0011]在一些方面，所述水解步骤进行直至大约
20
分钟
。
在一些方面，该步骤进行大约
10
分钟至大约
20
分钟
。
在一个进一步的方面，所述水解步骤进行大约
15
分钟
。
在另一个方面，所述水解步骤在直至
60℃
的温度下进行
。
在一些方面，该步骤在大约
50℃
至大约
60℃
的温度下进行
。
在另外一个方面，所述水性生物学样品在大约
55℃
的温度下进行水解
。
[0012]在一些方面，所述温育进一步包括将所述磁珠或磁性颗粒与所述水解物一起进行混合
、
摇动或涡旋振荡
。
[0013]在一些方面，所述方法进一步包括将所述上清液分成等分试样
。
在另外一个方面，通过使用色谱法仪器
、
微流或固相提取来分开和
/
或富集所述经等分的上清液
。
在一些方面，所述色谱法仪器为高效液相色谱法
(HPLC)
仪器或超高效液相色谱法
(UPLC)
仪器
。
在一个进一步的方面，通过使用捕集
‑
洗脱工作流程来分开和
/
或富集所述经等分的上清液
。
[0014]在一些方面，将所述经等分的上清液以声学方式注射到开放端口接口中，并且转移至电离源或直接注射到电离源中
。
在另一个方面，所述经电离的上清液用质谱仪来进行分析
。
在一些方面，在用质谱仪分析所述经电离的上清液之前，通过使用差分迁移率光谱测定法
(differential mobility spectrometry)
来从所述经电离的上清液中选择目的离子
。
[0015]在一些方面，所述方法改善了液体样品水解的效率或者改善了液体样品水解物质量
。
在另一个方面，所述经改善的水解物质量包括遗留物的减少
。
在另外一个方面，在制备液体样品的自动化和
/
或连续过程中使用所述方法
。
[0016]在一些方面，将所述方法用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.
制备液体样品的方法，其包括：用水解酶处理所述液体样品，水解所述液体样品以制备水解物，和用基于磁性的纯化来纯化所述水解物
。2.
权利要求1的方法，其中所述液体样品为生物学样品
。3.
权利要求2的方法，其中所述生物学样品选自由下列各项组成的组：尿
、
血液
、
口腔液和血浆
。4.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶结合至磁珠或磁性颗粒
。5.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化使用磁珠或磁性颗粒
。6.
权利要求5的方法，其中所述基于磁性的纯化进一步包括下列步骤：用沉淀剂使在所述水解物中的蛋白质和
/
或任何过量的水解酶沉淀，将所述磁珠或磁性颗粒与沉淀出的蛋白质一起温育对于产生悬浮液来说足够的时间，和通过磁力将所述磁珠或磁性颗粒与所述悬浮液分开以产生上清液
。7.
权利要求6的方法，其中所述沉淀剂选自由下列各项组成的组：锌盐
、
硫酸锌
、
二醇类
、
醇类
、
酸类
、
硫酸盐
、
酸类
、
乙腈及其组合
。8.
权利要求7的方法，其中所述沉淀剂为
0.4M
硫酸锌
。9.
权利要求4‑8中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化基于免疫纯化或亲和纯化
。10.
权利要求9的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒包含以高亲和力与特定靶标相结合的单克隆抗体
、
多克隆抗体
、
合成抗体模拟物
、
适配体
、affimer、DARPin
或寡核苷酸或肽
。11.
权利要求
10
的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒包含链霉抗生物素蛋白，并且所述水解酶包含生物素
。12.
权利要求4‑8中任一项的方法，其中所述基于磁性的纯化基于离子交换
。13.
权利要求
12
的方法，其中所述磁珠或磁性颗粒具有从由下列各项组成的组中选择的表面涂层：葡聚糖
、
羧酸钠
、
磷酸盐
、
磷酸氢盐
、
聚丙烯酸
、
油酸
、
二氧化硅
、
氯化2‑
羟丙基三甲基铵
、
聚乙烯亚胺
、
二乙氨基乙基纤维素
、
聚
(4
‑
乙烯基吡啶
)
和磺酸钠
。14.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述液体样品进一步包含内部标准
。15.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶能够水解糖苷键
。16.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶为
β
‑
葡糖醛酸糖苷酶
、
胰蛋白酶
、
胰凝乳蛋白酶
、
蛋白酶
、LysC、LysN、AspN、GluC、ArgC、
链霉蛋白酶
、
胃蛋白酶
、
氨酰基脯氨酸二肽酶
。17.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解酶能够水解可待因
‑6‑
葡糖苷酸键和吗啡
‑6‑
葡糖苷酸键
。18.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解步骤进行直至
20
分钟
。19.
权利要求
18
的方法，其中所述水解步骤进行大约
15
分钟
。20.
前述权利要求中任一项的方法，其中所述水解步骤在直至大约

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：DH，
类型：发明
国别省市：