检测神经丝蛋白轻链的试剂盒与方法技术

本申请公开了一种检测神经丝蛋白轻链的试剂盒，其包括：生物素偶联的靶向神经丝蛋白轻链的第一抗体

【技术实现步骤摘要】
检测神经丝蛋白轻链的试剂盒与方法


[0001]本申请属于免疫分析
，尤其涉及一种检测神经丝蛋白轻链的试剂盒以及一种检测神经丝蛋白轻链的方法
。

技术介绍

[0002]神经丝
(Neurofilaments
，
NFs)
是专门位于神经元细胞质中的圆柱形蛋白质，以
10nm
细丝的形式存在于树突和神经元胞体以及轴突中，并赋予了神经元结构稳定性
。NFs
主要由三种多肽组成，其大小分别为
200kDa、150kDa
和
68kDa
，分别为神经丝重链
(Neurofilament heavy chain
，
NF
‑
H)、
神经丝中链
(Neurofilament medium chain
，
NF
‑
M)
和神经丝轻链
(Neurofilament light chain
，
NF
‑
L)。
[0003]NF
‑
L
是
NFs
的骨架，它是最丰富的亚基，也是最可溶的亚基
。
在正常条件下，
NF
‑
L
以年龄依赖的方式不断从轴突中释放，在老年时会产生较高水平的
NF
‑
L。
当机体处于炎症
、
神经退行性疾病
、r/>创伤或血管损伤引起的中枢神经系统
(Central nervous system,CNS)
轴突损伤的反应中，
NF
‑
L
的释放急剧增加
。
神经系统疾病患者
CSF
中
NF
‑
L
的浓度高于对照组，并且现有结果已证实血清
NF
‑
L
水平与
CSF
中的
NF
‑
L
水平密切相关
。NF
‑
L
的潜在诊断价值在于对中枢神经系统疾病的损伤程度
、
疾病进展以及神经退行性疾病和非神经退行性病变的区分
。
相比较
PET
‑
CT、MRI
等影像学手段，
NF
‑
L
的免疫学监测有助于加强医生对
CNS
损伤的动态追踪，提升诊疗效果，优化预后管理并可带来显著的社会效益与经济效益
。
[0004]然而，目前现有的
NF
‑
L
的检测平台主要有以下几个缺点：
[0005](1)
检测时间过长
[0006]目前
NF
‑
L
的检测平台主要为酶联免疫和化学发光
(
包含管式和板式化学发光
)
等平台
。
对于酶联免疫和板式化学发光平台，常需要一个较长的孵育时间，一般为
0.5
～
2h。
现有管式化学发光平台常使用两步法来提升检测性能，但是相应的会增加检测时间
。
如刘志敏等人的数据显示其神经丝轻链蛋白含量的直接化学发光法试剂盒为
30
分钟内，邱春明等人开发的定量检测神经丝轻链蛋白的试剂盒需要
37℃
分别孵育
15
分钟和
17
分钟
。
这样的检测时长无疑为临床检验科室
/
体检科室的高通量
、
高效率
NF
‑
L
检测带来了困扰
。
[0007](2)
线性范围窄
[0008]更宽的线性范围可以保证样本无需稀释即可完成检测，这样无疑可以减少检测次数并消除因样本稀释而造成的检测偏差
。
唐雨德等人开发的
NF
‑
L
板式化学发光免疫检测系统的线性区间为
1.6
～
1000pg/mL
，而王国武等人开发的一种测定人体神经丝轻链蛋白含量的磁微粒化学发光检测试剂盒线性区间仅为0～
500pg/mL。
根据
Norgren
等人在
2003
年发表的数据，其多发性硬化
(MS)
脑脊液
NF
‑
L
浓度均值达到
2500pg/mL
，远高于现有报道中的检测上限
。
因此还需要借助技术改良来大幅扩大试剂盒的线性范围
。
[0009](3)
检测样本局限
[0010]Gaetani
在
2019
年发表的
NF
‑
L
系统性综述中写道：脑脊液和血液
NF
‑
L
可以指导临床医生对潜在神经退行性疾病患者进行进一步诊断和检查；脑脊液和血清
NF
‑
L
均增加也是
多发性硬化症最常见的鉴别诊断之一
。
但是目前大部分相关专利和文献中，所涉及的
NF
‑
L
测定试剂盒主要针对血清或脑脊液而并不能够同时检测二者
。

技术实现思路

[0011]基于上述描述，当前
NF
‑
L
检测系统还有很多不足，限制了
NF
‑
L
免疫学检测在
CNS
损伤诊断
、
疗效评估和预后评估等方向的应用
。
针对现有技术中存在的不足，本申请提供一种检测神经丝蛋白轻链的试剂盒，以及所述试剂盒在制备用于检测神经丝蛋白轻链和
/
或用于诊断神经系统疾病的产品中的用途，还提供一种检测样品中神经丝蛋白轻链含量的方法，本申请的试剂盒以一对高亲和力且性能稳定的重组抗体作为核心原料，线性范围宽，检测时间短，且能同时检测血清和脑脊液中的
NF
‑
L。
[0012]本申请的具体技术方案如下：
[0013]1.
一种检测神经丝蛋白轻链的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：
[0014]生物素偶联的靶向神经丝蛋白轻链的第一抗体
、
经标记物标记的靶向神经丝蛋白轻链的第二抗体和磁珠，其中所述磁珠为链霉亲和素磁珠；或者
[0015]靶向神经丝蛋白轻链的第一抗体包被的磁珠和经标记物标记的靶向神经丝蛋白轻链的第二抗体，其中所述磁珠为甲苯磺酰活化的磁珠
。
[0016]2.
根据项1所述的试剂盒，其中，所述磁珠的粒径为1～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
ID No:15
所示，或为与
SEQ ID No:15
具有
90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％同一性的氨基酸序列；所述靶向神经丝蛋白轻链的第二抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中：重链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID No:14
所示，或为与
SEQ ID No:14
具有
90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％
、97
％
、98
％
、99
％同一性的氨基酸序列；轻链可变区的氨基酸序列如
SEQ ID No:16
所示，或为与
SEQ ID No:16
具有
90
％
、91
％
、92
％
、93
％
、94
％
、95
％
、96
％

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卓，王鹏，
申请(专利权)人：杭州星源华青生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：