tRNA源性小片段RNA及其在胎儿先天性心脏病诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA(tRF

【技术实现步骤摘要】
tRNA源性小片段RNA及其在胎儿先天性心脏病诊断中的应用


[0001]本专利技术属于tRNA源性小片段RNA领域，特别涉及一种小片段RNA(tRF
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1)，用于血清中检测该小片段RNA诊断试剂盒及制作方法。

技术介绍

[0002]先天性心脏病(Congenital heart disease,简称先心病)定义为出生前和/或出生时出现的心脏或大血管的一般结构异常，是新生儿中最常见的先天性疾病，也是因出生缺陷导致婴儿死亡的最常见原因。不同国家和地区报告的先心病出生人数差异很大，普遍接受的最佳估计是每1,000活产6
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13例，死亡率约占产前死亡的40％，出生后第一年死亡的20％。尽管随着产前产后诊断和手术治疗的显著进步，如四维超声、胎儿心脏超声、心脏MRI、体外循环技术等，先心病的发病率和死亡率已经大大降低。然而，由于医疗系统环境、筛查人员技能和可用资源的差异，先心病相关的检查程序往往繁琐、低效，因此容易出现诊断上的误诊或漏诊。此外，使用重复超声检查和应用诊断性成像对胎儿损伤的潜在风险仍然存在争议。因此，寻找先心病发病的分子标志物，并开发成胎儿先天性心脏病的诊断试剂盒，对于在孕期通过液态活检即可精准地诊断胎儿先心病，对于患者无疑具有重要的临床意义和社会应用价值
[0003]近年来，随着高通量测序技术的飞速发展，遗传物质的表达及调控正在不断被阐述。已有研究表明tRNA来源的小片段RNA(tRFs)可调控基因表达，与疾病的发生发展有着密切关系。更为耀眼的是，近两年随着新冠核酸检测试剂盒及ctDNA检测在临床上的广泛应用，与传统的蛋白或代谢物检测相比较，核酸检测(包括DNA和RNA)在疾病诊断中已经体现出尤为卓越的优势：组织特异性强、灵敏度高、检测方法成熟简便、假阳性率低、可重复性强、普及率高等特点。
[0004]大量研究证实，血液中存在大量的核酸片段，包括双链游离cfDNA、小非编码RNA(small non
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coding RNA，sncRNA)、tRNA来源的小片段RNA(tRFs)等，有可能为疾病诊断和预后提供新的生物标志物，并已开展数项临床研究进一步论证核酸片段在各种疾病诊断中的应用价值。相关研究表明，tRFs在多种疾病及肿瘤组织/体液中具有显著差异表达、高稳定性的特征，提示极有可能成为疾病诊断的新指标。但是目前为止，有关tRFs与胎儿先心病诊断的相关研究鲜有报道。由于新冠疫情，核酸检测设备和使用已非常成熟，在各地级二甲及以上医院或第三方检测机构均可开展基于核酸检测技术的检验项目。因此，我们希望借此机会能够将核酸检测技术用于此类疾病的孕期诊断，这无疑对提升人口质量、减缓社会负担、增加社会效益、发展地区经济具有重要的帮助。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供tRNA源性小片段RNA(tRF
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1)，在制备胎儿先天性心脏病诊断靶点上的应用，为临床诊断胎儿先天性心脏病提供参考。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种胎儿先天性心脏病分子标志
物tRNA源性小片段RNA，小片段RNA的核苷酸序列如Seq ID NO：1所示。
[0007]胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA在制备胎儿先天性心脏病诊断试剂盒中的应用，所述小片段RNA的核苷酸序列如Seq ID NO：1所示。
[0008]检测上述一种胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA表达水平的试剂在制备胎儿先天性心脏病诊断试剂中的应用。
[0009]进一步的，诊断试剂通过检测被试者血清中小片段RNA的表达，与健康对照组相比较特异性升高，以此来判断被试者的胎儿患先天性心脏病的风险。
[0010]一种用于胎儿先天性心脏病诊断的试剂盒，包含检测血清中小片段RNA表达水平的检测试剂，所述小片段RNA的核苷酸序列如Seq ID NO：1所示。
[0011]进一步的，检测试剂包括：逆转录试剂、PCR反应试剂和引物组。
[0012]进一步的，引物组包括：
[0013](1)RT引物，核苷酸序列如Seq ID NO：2所示；
[0014](2)正向引物，核苷酸序列如Seq ID NO：3所示；
[0015](3)反向引物，核苷酸序列如Seq ID NO：4所示。
[0016]本专利技术的tRNA源性小片段RNA来源于孕妇的外周血。在前期研究中，分离提取胎儿被诊断为先天性心脏病的孕妇外周血清/胎儿心脏正常的孕妇外周血清中的小片段RNA并进行去修饰预处理后，通过高通量测序技术发现：
[0017]①
胎儿被诊断为先天性心脏病的孕妇外周血清/胎儿心脏正常的孕妇外周血清(疾病组vs健康组，各6例)的tRNA源性小片段RNA表达谱存在明显差异。
[0018]②
通过qRT
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PCR实验验证发现，tRF
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1在疾病组孕妇血液中的表达水平与健康组孕妇相比显著高表达(疾病组：35例vs健康组：48例)，与高通量测序结果高度一致。
[0019]因此我们有充分的理由相信：tRF
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1极有可能是胎儿先天性心脏病的分子标志物。
[0020]基于本专利技术所述的新用途：可基于tRF
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1为靶点，制备诊断胎儿先天性心脏病的试剂盒。
[0021]有益效果：tRF
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1不仅具备目前核酸分子用于临床诊断的技术优势，而且稳定性高、显著提高诊断的准确率，提示tRF
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1极有可能成为胎儿先天性心脏病诊断划时代的新指标，tRF
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1的诸多优点可能为临床疾病的新药研制提供依据。
附图说明
[0022]图1是实施例差异性tRFs在胎儿被诊断为先天性心脏病的孕妇外周血清/胎儿心脏正常的孕妇外周血清标本中验证结果。
[0023]图2是实施例验证tRF
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1在胎儿被诊断为先天性心脏病的孕妇外周血清/胎儿心脏正常的孕妇外周血清中表达情况。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA，其特征在于：所述小片段RNA的核苷酸序列如Seq ID NO：1所示。2.胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA在制备胎儿先天性心脏病诊断试剂盒中的应用，所述小片段RNA的核苷酸序列如Seq ID NO：1所示。3.检测根据权利要求1所述的胎儿先天性心脏病分子标志物tRNA源性小片段RNA表达水平的试剂在制备胎儿先天性心脏病诊断试剂中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述诊断试剂通过检测被试者血清中tRNA源性小片段RNA的表达，与健康对照组相比较特异性升高，以此来判断被试者的胎儿患先...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾海涛，卢恩康，付子毅，吴云，吴延虎，陈斌，吴丽君，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：