一种角膜营养不良的PCR检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种检测角膜营养不良的PCR检测试剂盒，所述的试剂盒中的引物探针组合物为SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种角膜营养不良的PCR检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种角膜营养不良的PCR检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]角膜营养不良是与家族遗传有关的原发性进行性角膜病变的总称。多数角膜营养不良为常染色体显性遗传，该病病程较为缓慢，且药物治疗难以起效。部分晚期患者严重影响视力时需要进行角膜移植手术。对角膜营养不良的及时检测可以使患者得到及时的治疗，避免病情的进一步加重。
[0003]角膜营养不良可以通过遗传学检查、病理学检查、角膜内皮显微镜检查、房角镜检查进行疾病诊断。由于角膜营养不良相关的遗传学突变不止一种，遗传学检查可以确定其遗传类型。且部分角膜营养不良患者为杂合性突变，症状表现较为不明显，因此通过病理学检查、角膜内皮显微镜检查、房角镜检查等方法难以确诊，贻误治疗时机。
[0004]对角膜营养不良患者进行基因检测多采用PCR试剂盒来完成，通过结果比对确定突变类型，以对角膜营养不良的患病风险进行评估。
[0005]申请号为CN201610976247.6的中国专利中公开了：一种检测角膜营养不良基因多态性位点的基因型的方法，所述方法在相同的反应体系中，使用针对角膜营养不良多态性位点的基因野生型模板的增强型ARMS引物和针对突变型模板的增强型ARMS引物分别对同一份待测样本进行实时荧光定量PCR检测；然后根据样本用针对野生型模板的增强型ARMS引物进行荧光定量PCR检测的Ct野生型和针对突变型模板的增强型ARMS引物进行ARMS荧光定量PCR检测的Ct突变型以及Ct突变型与Ct野生型之间差值
△
Ct值，来判断多态性位点的型别从而确定角膜营养不良基因突变的基因型。
[0006]申请号为CN201810571591.6的中国专利中公开了：一种颗粒性角膜营养不良II型核酸检测试剂盒，包括引物GCD124
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PF1、引物GCD124
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PR1、内参引物M
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26F、内参引物M
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26R、探针GCD124
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W1、探针GCD124
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M1、内参探针M
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01D，扩增预混液、探针引物预混液和阴、阳性质控，该试剂盒，可采用多个不同的荧光对多个不同的探针进行标记，能够同时对GCD
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II型的野生型和突变型进行检测；经过核酸提取和纯化后的检测过程不超过2小时。
[0007]但现有技术的检测试剂盒的灵敏度和稳定性都欠佳，有进一步优化的空间。

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了角膜营养不良的PCR检测试剂盒
[0009]一方面，本专利技术提供了一种检测角膜营养不良的PCR检测试剂盒。
[0010]所述的试剂盒中包括PCR引物和探针，所述的引物和探针选自SEQ ID NO.1
‑
10；其中SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8为引物，SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10为探针，所述的探针5'端有VIC或6
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FAM修饰，所述的探针3'端有MGB修饰。
[0011]具体地，所述的试剂盒中的引物和探针如下：
[0012]Primer名称序列(5'to 3')5'端修饰3'端修饰TGFBI
‑
rs121909210/11
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FSEQ ID NO.1
‑‑
TGFBI
‑
rs121909210/11
‑
RSEQ ID NO.2
‑‑
TGFBI
‑
rs121909210
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Probe1CTSEQ ID NO.35`VIC3`MGBTGFBI
‑
rs121909210
‑
Probe1WTSEQ ID NO.45`6
‑
FAM3`MGBTGFBI
‑
rs121909211
‑
Probe2GASEQ ID NO.55`VIC3`MGBTGFBI
‑
rs121909211
‑
Probe2WTSEQ ID NO.65`6
‑
FAM3`MGBTGFBI
‑
rs121909208/09
‑
FSEQ ID NO.7
‑‑
TGFBI
‑
rs121909208/09
‑
RSEQ ID NO.8
‑‑
TGFBI
‑
rs121909209
‑
Probe5GASEQ ID NO.95`VIC3`MGBTGFBI
‑
rs121909209
‑
Probe5WTSEQ ID NO.105`6
‑
FAM3`MGB
[0013]所述的引物和探针用于检测以下位点：
[0014]rsidchrpos_hg19pos_hg38variationvariant_typegeners1219092085135392469136056780C>TsnvTGFBIrs1219092095135392470136056781G>AsnvTGFBIrs1219092105135382095136046406C>A,TsnvTGFBIrs1219092115135382096136046407G>A,TsnvTGFBI
[0015]优选地，所述的PCR扩增体系中还包括0.5
‑
0.8g/L的氯乙酸。
[0016]优选地，所述的PCR扩增体系中还包括0.5
‑
0.7g/L、0.5
‑
0.6g/L、0.6
‑
0.8g/L、0.6
‑
0.7g/L、0.7
‑
0.8g/L的氯乙酸。
[0017]所述的试剂盒中还包括其他PCR反应所需试剂。
[0018]优选地，所述的试剂为DNA聚合酶、促进酶反应的金属离子、dNTPs、缓冲液中的一种或多种。
[0019]优选地，所述的试剂盒中还包括检测内参基因的引物，所述的引物可以通过常规设计得到。
[0020]所述的内参基因为β
‑
actin。
[0021]所述的角膜营养不良包括但不限于：角膜上皮基底膜营养不良、颗粒状营养不良或Fuchs角膜内皮营养不良。
[0022]另一方面，本专利技术还提供了检测基因突变的引物和探针在制备角膜营养不良PCR检测试剂盒中的应用。
[0023]所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测角膜营养不良的PCR检测试剂盒，其特征在于，包括PCR引物和探针，所述的引物和探针选自SEQ ID NO.1
‑
10；其中SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8为引物，SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10为探针，所述的探针5'端有VIC或6
‑
FAM修饰，所述的探针3'端有MGB修饰。2.根据权利要求1所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增体系中还包括0.5
‑
0.8g/L的氯乙酸。3.根据权利要求2所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增体系中还包括0.5g/L的氯乙酸。4.根据权利要求3所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括其他PCR反应所需试剂。5.根据权利要求4所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂为DNA聚合酶、促进酶反应的金属离子、dNTPs、缓冲液中的一种或多种。6.根据权利要求5所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括检测内参基因的引物。7.根据权利要求6所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述的内参基因为β
‑
actin。8.检测基因突变的引物和探针在制备角膜营养不良PCR检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：于晓光，杜政霖，
申请(专利权)人：温州谱希基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：