一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物及其应用，属于生物技术诊断领域。本发明专利技术使用LOC105612389，BGIG9940_27655，RPS28，BGIG9940_27548，BGIG9940_27563之一或任意组合作为绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物，并将其应用到绵羊早期妊娠诊断产品、靶标的制备或构建中，通过采集配种母羊的血液或卵巢，检测血液或卵巢中所述lncRNA生物标志物的表达情况，根据其表达情况即可准确预判母羊是否妊娠。使用本发明专利技术的lncRNA生物标志物和应用，能显著提高绵羊早期妊娠诊断效率，对提高母羊繁殖效率，促进集约化管理，提高养殖效益等意义重大。提高养殖效益等意义重大。提高养殖效益等意义重大。

【技术实现步骤摘要】
一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术诊断领域，尤其涉及一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]母羊的繁殖力直接关系到养羊生产的效益，应用生物技术对羊实行早期妊娠诊断，可以在母羊怀孕早期阶段快速地检测出母羊是否怀孕，从而对母羊进行分群精心管理和对空怀母羊进行及时补配，同时也是提高母羊繁殖效率，促进集约化管理，提高养殖效益的重要技术措施。
[0003]目前常用的母羊早期妊娠诊断方法有阴道检查法、腹腔检查法、乳胶凝集抑制实验诊断法、放射免疫测定法、酶免疫测定法、超声波检测等。其中，阴道检查法主要是使用内窥镜观察阴道粘膜颜色、粘液稀薄程度和子宫颈口的变化进行妊娠诊断。当使用内窥镜观察母羊阴道粘膜时，空怀母羊的阴道粘膜始终为粉红色；若母羊怀孕，一段时间后粘膜会由粉红色变为苍白色；此外，怀孕母羊的阴道粘液量较少，呈透明状且比较粘稠，而未怀孕母羊的粘液量很多，颜色灰白且较为稀薄；妊娠母羊的子宫颈紧闭，子宫颈口处会出现浆糊状的粘块，形成“粘液栓”。此法检查发情配种后60d的母羊，妊娠确诊率可达95％，但由于诊断时间较晚且操作需要一定经验的技术人员，此方法的应用也受到了限制。腹腔检查法是使用腹腔镜检测怀孕母羊的子宫和妊娠黄体来判断其否怀孕的独特方法，一般母羊配种后17d即可用此方法诊断，诊断准确率可达90％以上。但需要在无菌条件下对母羊局部或全身麻醉，对手术羊有一定损伤，且腹腔镜设备较为昂贵，不满足我国畜牧行业生产的需求。乳胶凝集抑制实验诊断法，此法主要是是根据乳汁中含有的孕酮量来对配种后的母羊进行早期妊娠诊断。母羊妊娠的判定标准为：若出现均匀一致的凝集颗粒为阴性(未妊娠)，不出现凝集颗粒为阳性(妊娠)。但此法操作困难，且价格昂贵，在生产上使用较少。放射免疫测定法(RIA)是将放射性同位素的灵敏性和抗原－抗体反应的特异性结合起来测定体液中的生殖激素的超微量分析法，是20世纪70年代国外开始建立起来的家畜早期妊娠诊断技术，其特点是特异性强、取样少、但测定样品多。虽然RIA法的准确性高，妊娠诊断速度快，但设备昂贵，对操作人员技术水平有一定要求，以及耗时和存在放射性危害等，使其应用受限。酶免疫测定法(EIA)是以抗原与抗体结合为基础，以酶促反应为检测信号，将抗原抗体反应的特异性与酶高效催化反应的灵敏性结合起来的超微量技术。通过测定母畜乳汁中孕酮或血清中硫酸雌酮的含量，从而判断母畜是否怀孕。由于酶免疫测定具有特异、简便、灵敏和快速等特点，但操作过程较为费时。超声波检测是利用超声波的物理特性，与动物组织结构的声学特性结合的一种物理诊断方法。自lindahl于1966年将超声诊断技术引入兽医领域以来，超声波诊断技术就在兽医领域得到了广泛的应用，目前诊断仪主要有三种：A超、B超和多普勒超声。A型超声波仪是一种价格低廉，体积小、携带方便的妊娠诊断仪，但因诊断时易出现假阴性的情况，近年来在妊娠诊断中使用的越来越少；多普勒超声诊断准确率高，但对操作者技术要求较高，在生产上并未得到广泛应用；B型超声诊断仪(B超)是目前妊娠诊断
最实用的方法，尤其适用于规模化羊场，但对操作者技术要求也较高，必须通过专业化训练才能掌握该技术。
[0004]但是上述妊娠诊断方法普遍存在操作繁琐、对仪器设备要求和人员专业化要求高等许多弊端，因此急需开发出一种简便、快速、准确、大众化化的早期妊娠诊断技术。
[0005]长链非编码RNA(Long non
‑
coding RNA，lncRNA)是一类本身不编码蛋白、转录本长度超过200nt的长链非编码RNA分子，它可在多层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达。lncRNA最初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，是一种“噪音”，不具有生物学功能。然而，近年来的研究表面，lncRNA参与了X染色体沉默、染色体修饰和基因组修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等过程，其调控作用正在被越来越多的人研究。
[0006]LncRNA通过与染色质修饰蛋白或转录因子与其特定的蛋白结合基序相互作用来发挥调控作用，继而维持基因表达的活跃或不活跃状态。它们还可以直接结合到与其互补的DNA序列，形成一个RNA
‑
DNA三重结构，由此可以阻断转录过程。据报道，这种三聚体结构可以导致靶基因启动子中特定序列的甲基化。lncRNA转录自身的行为甚至可以通过提供一个更开放的染色质区域来触发附近基因的表达，它也可以通过占据转录因子结合位点来沉默附近的基因。LncRNA分子内部有较复杂的空间结构，可与DNA、RNA凭借碱基互补配对原则进行特异性的结合，也为许多蛋白结构提供结合位点，构成由lncRNA参与调控的网络结构，从而凭借多种方式调节功能基因的表达。功能分析显示，lncRNA能够调节表观遗传、转录和转录后的基因表达水平，或直接调节蛋白活性。研究显示，lncRNA还参与了基因组印记、转录激活、核内运输、转录干扰、染色质修饰等多种重要的调控过程。
[0007]生物标志物(Biomarker)是指可以标记系统、器官、组织、细胞及亚细胞结构或功能的改变或可能发生的改变的生化指标，具有非常广泛的用途。生物标志物可用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性。对于疾病研究，生物标志物一般是指可供客观测定和评价的一个普通生理或病理或治疗过程中的某种特征性的生化指标，通过对它的测定可以获知机体当前所处的生物学过程中的进程。检查一种疾病特异性的生物标志物，对于疾病的鉴定、早期诊断及预防、治疗过程中的监控可能起到帮助作用。寻找和发现有价值的生物标志物已经成为目前研究的一个重要热点。高通量测序技术是发现生物标志物的一种方法，它的诞生可以说是基因组学研究领域一个具有里程碑意义的事件，该技术使得核酸测序的单碱基成本与第一代测序技术相比急剧下降，以人类基因组测序为例，上世纪末进行的人类基因组计划花费30亿美元解码了人类生命密码，而第二代测序使得人类基因组测序已进入万(美)元基因组时代。随高通量测序技术而出现的数字基因表达谱(DGE)测序、小RNAs测序、降解组测序、DNA甲基化测序、染色质免疫共沉淀DNA测序等新方法为科学家们进行分子生物学相关研究提供了更多的选择，高通量测序技术给基因组学研究带来了一个高效的新平台和巨大的发展机遇，是发现生物标志物的重要的手段。
[0008]因此，妊娠早期LncRNA生物标志物的鉴定对绵羊早期妊娠诊断、提高经济效益具有非常重要的作用。

技术实现思路

[0009]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物及其应用。本专利技术使用LOC105612389，BGIG9940_27655，RPS28，BGIG9940_27548，BGIG9940_27563之一或任意组合作为绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物，并将其应用到绵羊早期妊娠诊断产品、靶标的制备或构建中，通过采集配种母羊的血液或卵巢，检测血液或卵巢本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于绵羊早期妊娠诊断的lncRNA生物标志物，其特征在于，所述lncRNA生物标志物为下列lncRNA生物标志物之一或任意组合：LOC105612389，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；BGIG9940_27655，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；RPS28，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；BGIG9940_27548，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；BGIG9940_27563，其具体核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。2.权利要求1所述的lncRNA生物标志物在制备绵羊早期妊娠诊断产品中的应用。3.权利要求1所述的lncRNA生物标志物在构建绵羊早期妊娠诊断靶标中的应用。4.根据权利要求2～3任一所述的应用，其特征在于，所述应用的具体操作步骤为：(1)检测配种母羊血液或卵巢中所述lncRNA生物标志物的表达情况；(2)根据l...

【专利技术属性】
技术研发人员：常卫华，王娟红，刘锡辉，李昊，王思芦，倪国超，杨富贵，滕悦扬，
申请(专利权)人：西昌学院，
类型：发明
国别省市：