【技术实现步骤摘要】
葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因
本专利技术涉及生物
,具体为葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因。
技术介绍
葡萄是世界上栽培最为广泛的果树之一,葡萄是世界性的水果,用途很广,不仅大量用以鲜食,还用来酿造不同类型的葡萄酒,加工成葡萄干、葡萄汁等。早熟葡萄是蒴果作物的一个重要属性,发展早熟葡萄生产促使葡萄提早上市,不仅迎合消费者喜好,更能提高葡萄经济效益推动农业生产发展。因此,研究葡萄早熟机制具有重要意义,早熟葡萄新品种“峰早”是“巨峰”的芽变,该品种果穗圆锥形、穗形中大,于河南省洛阳地区发现,浆果7月上旬成熟,成熟期比“巨峰”早30天左右。通过对葡萄品种“巨峰”与“峰早”发育特征比较分析,发现芽变与亲本间果胶甲酯酶(PE)活性和多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性变化模式相一致,且芽变的PG酶活性增长速率均明显大于其亲本,这种变化幅度也与早熟芽变性状变化的幅度相关,所以PG酶活性增加加快了芽变品种的成熟软化,这可能是芽变比亲本早熟的原因之一,基于以上生理研究,我们用5-AC和H2O2处理“巨峰”葡萄,5-AC和H2O2都是已知可以有效促进果实成熟的试剂。通过比较这两种处理的转录组数据,分析结果表明GDSL型酯酶/脂肪酶(GELP)基因表达在这两种处理中均差异显著。可见,GELP基因家族在葡萄果实发育成熟中发挥重要作用。GDSL酯酶/脂肪酶(GELP)广泛存在于各种生物当中,主要参与植物发育、形态发生、次生代谢产物合成和防御反应的调控。成熟的GELP与不同底物(包括酰基辅酶A、多种酯类和氨基酸衍 ...
【技术保护点】
1.葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因,其特征在于,包括如下步骤:/nS1、选取对照组:选取自然生长的“峰早”葡萄和利用蒸馏水处理后的“巨峰”葡萄;/nS2、实验组处理:将300mmol/L的H
【技术特征摘要】
20191016 CN 20191098136301.葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因,其特征在于,包括如下步骤:
S1、选取对照组:选取自然生长的“峰早”葡萄和利用蒸馏水处理后的“巨峰”葡萄;
S2、实验组处理:将300mmol/L的H2O2均匀喷涂在“巨峰”葡萄上,其中,第一次喷施为开花后25天,第二次为开花后35天,每个过程重复三次,每次重复五棵树;
S3、收集材料:每次采样从上午9点开始,用锡纸包起来,立即放入液氮罐中;
S4、采集样本:每棵树随机抽取30个样本,记录果实发育的物候期数据,其中采样时间为葡萄果实发育关键时间点分别是2017年6月12日、6月21日、7月1日、7月12日;
S5、葡萄中GDSL型酯酶/脂肪酶基因家族鉴定;
S6、多序列比对和系统发育分析;
S7、葡萄中GELP基因的表达分析;
S8、RNA提取和实时荧光定量;
S9、与葡萄果实发育相关的候选VvGELP基因的筛选:
(1)采用TIANGEN试剂盒提取“巨峰”葡萄和“峰早”葡萄的果实总RNA;
(2)回收PCR产物;
(3)构建载体并与目的基因连接,将重组后的载体质粒转入大肠杆菌;
(4)利用ExPASy在线分析工具对VvGELP76基因编码的蛋白质进行氨基酸基本性质分析。
2.根据权利要求1所述的葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因,其特征在于:S5中,从Pfam网站中,下载GDSL型酯酶/脂肪酶结构域序列,利用隐马尔可夫模型软件HMMER进行比对搜索葡萄中的GELP基因,将得到的GELP基因蛋白序列用Clustalx进行比对建立新的HMM文件,然后利用HMMER软件搜索葡萄中GELP基因,将得到的基因提交到SMART和CDD网站进行结构认证,保留其中含有GELP保守结构域的的基因,数据处理中去掉重复基因以及基因中包含“N”的个数大于全长的30%的基因,并保留同一基因不同可变剪切中最长的氨基酸序列。葡萄基因组序列从EnsemblePlants数据库下载。利用ExPASy在线分析工具对葡萄GELP基因编码的蛋白质进行氨基酸基本性质分析。
3.根据权利要求1所述的葡萄早熟相关GDSL型酯酶/脂肪酶标志基因,其特征在于:S6中,用鉴定出的VvGELP基因蛋白序列与23个其他物种功能已知的GELP基因蛋白序列在MEGA7.0中构建系统发育树,并将参数设置为:homogeneouspattern;pairwisedelet...
【专利技术属性】
技术研发人员:郭大龙,余义和,郭丽丽,张国海,郑玉萍,尼沛艺,姬晓汝,
申请(专利权)人:河南科技大学,
类型:发明
国别省市:河南;41
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