The invention relates to the construction of a rough Brucella strain of recombinant Chlamydia psittaci (Cps) outer membrane protein MOMP gene and its vaccine. The present invention takes Rough Bovine Brucella attenuated strain RA343 as parent strain, sucrose suicide plasmid as carrier, inserts MOMP gene of Chlamydia psittaci outer membrane protein containing specific promoter sequence into Brucella genome without trace after codon optimization, and successfully constructs Chlamydia psittaci with high expression efficiency. The recombinant Brucella RA343_MOMP strain of outer membrane protein MOMP gene. The recombinant strain not only retains the rough type characteristics of the original parent strain RA343, but also has good immune protection against brucellosis. After immunizing animals, the recombinant strain can produce MOMP antibodies against Chlamydia psittaci, thus realizing the immune protection against Chlamydia psittaci. The vaccine prepared with the recombinant vaccine can achieve double immune protection against brucellosis and Chlamydia psittaci after immunizing animals.
【技术实现步骤摘要】
一株重组鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法所属
本专利技术涉及一株重组鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因的粗糙型布鲁氏菌及其疫苗生产方法,属于兽用生物制品领域。技术背景布鲁氏菌病(布病)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的以流产和发热为特征的人兽共患病,严重地威胁着人和多种动物的生命健康。本病不但对动物的繁殖和生产性能具有严重危害,更重要的是,人感染布鲁氏菌后,往往难以治愈,从而造成严重的公共卫生问题。因此在布鲁氏菌流行的国家,消除布病一直是公共卫生计划中最重要的目标之一。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合,对布病发生相对比较严重的中国,由于扑杀的成本高,疫苗预防成为本病主要控制手段。2007—2012年间,本实验室陆续从我国不同省份和地区牛、羊、犬和鹿等动物体内分离到牛种布鲁氏菌41株,羊种布鲁氏菌74株,犬种布鲁氏菌9株。研究过程中,我们初步发现了一株牛种布鲁氏菌分离株,其毒力介于强毒和疫苗毒之间,专利申请人已对其进行了全面的生化检定,并分别用小鼠和豚鼠测定了其毒力。结果发现其毒力介于强毒和弱毒之间,测定为中等毒力布鲁氏菌,命名为Abortus343。本专利技术对此分离株进行了诱导和驯化,筛选获得了稳定的粗糙型布鲁氏菌疫苗株,命名为RA343,并已取得相关专利(ZL201410240895.6)。目前该疫苗株已经完成了全部的实验室研发和临床试验,进入新兽药注册环节。鹦鹉热衣原体(Chlamydiapsittaci,Cps)是造成羊地方性流产的主要病原菌之一,首次感染Cps的受孕绵羊和山羊的流产率分别高 ...
【技术保护点】
1.一种重组布鲁氏菌活疫苗,其特征在于该疫苗免疫动物后能同时实现对布鲁氏菌病和鹦鹉热衣原体病的双重免疫保护;其生产菌株是含有能够高效表达鹦鹉热衣原体外膜蛋白(Cps MOMP)的重组布鲁氏菌RA343‑MOMP株(简称重组菌RA343‑MOMP株);该菌株是通过将P3启动子与MOMP序列进行密码子优化,人工合成基因片段,并构建含有P3‑MOMP序列及布鲁氏菌上下游同源臂的蔗糖自杀质粒载体pUC/P3‑MOMP
【技术特征摘要】
1.一种重组布鲁氏菌活疫苗,其特征在于该疫苗免疫动物后能同时实现对布鲁氏菌病和鹦鹉热衣原体病的双重免疫保护;其生产菌株是含有能够高效表达鹦鹉热衣原体外膜蛋白(CpsMOMP)的重组布鲁氏菌RA343-MOMP株(简称重组菌RA343-MOMP株);该菌株是通过将P3启动子与MOMP序列进行密码子优化,人工合成基因片段,并构建含有P3-MOMP序列及布鲁氏菌上下游同源臂的蔗糖自杀质粒载体pUC/P3-MOMP+,将鹦鹉热衣原体外膜蛋白MOMP基因表达框部分无痕插入到布鲁氏菌基因组中,通过氨苄和蔗糖双重筛选,筛选出阳性克隆,并进行传代培养,通过PCR及测序鉴定其稳定性,获得重组布鲁氏菌(Bovinebrucella)RA343-MOMP株,并已于2019年03月14日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏,保藏编号为:CGMCCNo.17330。2.如本发明所述的一种重组布鲁氏菌活疫苗,其特征在于其生产用重组布鲁氏菌RA343-MOMP株区别于其他细菌的特异性是采用一对分别针对布鲁氏菌基因组和鹦鹉热衣原体MOMP基因的特异性PCR引物(序列21,序列22),扩增出大小为1529bp的特异性片段(...
【专利技术属性】
技术研发人员:丁家波,范学政,朱良全,冯宇,彭小薇,秦玉明,王芳,许冠龙,李秋辰,蒋卉,
申请(专利权)人:中国兽医药品监察所,
类型:发明
国别省市:北京,11
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