一种大籽蒿花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法技术

本发明专利技术提供了本发明专利技术涉及一种大籽蒿花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法。该大籽蒿花粉变应原浸提物，其中含有大籽蒿花粉变应原蛋白如SEQ ID NO.4‑SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。一种大籽蒿花粉变应原浸液经大籽蒿花粉收集、干燥、脱脂、提取、超滤浓缩、冷冻干燥、复溶等工艺方法制得。该大籽蒿花粉变应原浸液具有特异性高的特点，大籽蒿致敏蛋白组分提取充分，总生物效价稳定，有效期长，无菌效果好；其原液可有效用于变态反应疾病的皮肤点刺试验诊断、经适当稀释后可用于体外嗜碱性粒细胞活化试验诊断及特异性免疫治疗，可有效诊断由大籽蒿花粉诱发的变态反应疾病并对其进行特异性免疫治疗。

A pollen allergen extract of Artemisia annua, its extract and preparation method

The invention provides an extract of pollen allergen of Artemisia annua, an extract thereof and a preparation method thereof. The extract of the pollen allergen of Artemisia annua contains the amino acid sequence of the pollen allergen protein of Artemisia annua, such as SEQ ID NO.4_SEQ ID NO.10. A kind of pollen allergen extract of Artemisia annua was prepared by collecting, drying, degreasing, extracting, ultrafiltration concentration, freeze-drying and re-dissolving of Artemisia annua pollen. The extract of the allergen from Artemisia annua pollen has high specificity. The allergenic protein components of Artemisia annua are extracted adequately, the total bioavailability is stable, the period of validity is long, and the sterile effect is good. The extract can be effectively used for skin prick test diagnosis of allergic diseases and alkaline granulocyte activation test in vitro after appropriate dilution. Diagnosis and specific immunotherapy can effectively diagnose and treat allergic diseases induced by Artemisia annua pollen.

【技术实现步骤摘要】
一种大籽蒿花粉变应原浸提物、其浸液及其制备方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种大籽蒿花粉标准化变应原浸提物、浸液及其制备方法。
技术介绍
人们对变态反应疾病的认识始于“花粉热”，花粉热又称过敏性鼻炎。1911年Noon和Freeman首次利用花粉提取液来治疗花粉热，变态原疾病治疗的历史从此开始。目前，变态反应性疾病是全球性重大卫生问题之一。工业化国家超过25％的人口被变应性哮喘、变应性鼻结膜炎及变应性皮炎困扰，其中以变应性哮喘最为常见。吸入致敏花粉是引发变应性哮喘及其他呼吸道变态反应性疾病的最重要因素。VRTA—L.A等调查发现近50％的变态反应性疾病患者对草类花粉过敏。尹佳的《应用皮内试验和血清特异性IgE诊断蒿属花粉症的临床价值》中指出北京地区夏秋季花粉症患者中蒿属花粉过敏者占86.7％；赵京的《北京地区儿童呼吸道过敏性疾病与皮肤过敏原试验的调查》对北京地区13-14岁儿童进行的呼吸道过敏性疾病流行病学调查结果显示，蒿属花粉敏感者占同年龄段普通人群的5.7％；张宏誉的《北京市气传蒿属花粉浓度调查》指出北京地区在蒿属花粉临床季节内，日平均浓度在100g/m3；曹绥平的《变本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大籽蒿花粉变应原浸提物，其特征在于，其含有大籽蒿花粉变应原蛋白Art Si 1’、Art Si 3’、Art Si 4、Art Si 5、Art Si6和Art Si7；其中，所述Art Si 1’含有如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，所述Art Si 3’含有如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，所述Art Si 4含有如SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，所述Art Si 5含有如SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，所述Art Si6含有如SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列，所述Art Si7含有如SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2018.03.23 CN 201810243750X1.一种大籽蒿花粉变应原浸提物，其特征在于，其含有大籽蒿花粉变应原蛋白ArtSi1’、ArtSi3’、ArtSi4、ArtSi5、ArtSi6和ArtSi7；其中，所述ArtSi1’含有如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列，所述ArtSi3’含有如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列，所述ArtSi4含有如SEQIDNO.7所示的氨基酸序列，所述ArtSi5含有如SEQIDNO.8所示的氨基酸序列，所述ArtSi6含有如SEQIDNO.9所示的氨基酸序列，所述ArtSi7含有如SEQIDNO.10所示的氨基酸序列。2.一种的大籽蒿花粉变应原浸液，其特征在于，所述变应原浸液中含如权利要求1所述的大籽蒿花粉变应原浸提物、体积比为0.2～0.4％的苯酚、体积比为45～55％的甘油和4.5～5.5g/L的NaCl，其pH值为6.0～8.0。3.根据权利要求2所述的大籽蒿花粉变应原浸液，其特征在于，所述大籽蒿花粉变应原的活性浓度为50000～200000BAU/ml。4.根据权利要求2所述的大籽蒿花粉变应原浸液，其特征在于，所述大籽蒿花粉变应原浸液的总蛋白浓度0.47～0.70mg/ml。5.根据权利要求2所述的大籽蒿花粉变应原浸液，其特征在于，通过SDS-PAGE和WesternBlotting检测，所述大籽蒿花粉变应原浸提物蛋白分布在10kDa、12kDa、14kDa、15.3kDa、20kDa、24kDa、28kDa、44kDa、62kDa、94kDa、117kDa。6.根据权利要求2所述的大籽蒿花粉变应原浸液，其特征在于，通过全蛋白质谱检测，所述大籽蒿花粉变应原浸提物主要包含且不限于如SEQIDNO.18-SEQIDNO.25所示的特征性肽段。7.一种根据权利要求2-6中任一项所述大籽蒿花粉变应原浸液的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：S1、采集大籽蒿花粉，常温干燥或真空干燥或流化床干燥；S2、对干燥后的花粉脱脂、干燥；S3、将脱脂干燥后的大籽蒿花粉按重量g体积ml比1:50～1:10加入pH为7.9～8.2磷酸盐—盐水缓冲液，搅拌速度为150～300rpm条件下2-8℃浸提22～26h；S4、取步骤S3后的浸提液，离心取上清液；将上清液过滤及除菌过滤；S5、将过滤后的上清液进行超滤浓缩，获得超滤浓缩液；S6、将所述超滤浓缩液经过二次过滤和除菌过滤后，真空冻干获得大籽蒿花粉变应原冻干品；S7、将所述大籽蒿花粉变应原冻干品用pH6.5～7.5磷酸盐—盐水缓冲液复溶配置为大籽蒿花粉变应原原液，2～8℃放置，与等体积灭菌的甘油混匀，调节溶液pH值至6.0～8.0。8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤S2中，所述花粉脱脂采用花粉与丙酮以1：5～1:1的重量g体积ml比进行脱脂处理，重复脱脂至上层液体澄清。9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤S4中，所述离心的条件为8000～12000g，离心温度2～8℃，时间为15～20...

【专利技术属性】
技术研发人员：周俊雄，尹佳，王瑞琦，关凯，邢旭亚，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，
类型：发明
国别省市：北京,11