A new method for identification of Lactobacillus rhamnosus belongs to the field of microbial fermentation and food processing. 12 strains of Lactobacillus rhamnosus preserved in our laboratory are distinguished by using growth curve. The passage time of the strains is strictly limited. 12 strains of Lactobacillus rhamnosus are subcultured three times to make the growth state of the strains stable. 12 strains of Lactobacillus are determined at 600 nm wavelength by automatic growth curve analyzer. The optical density value under the sample is continuously measured for 48 hours. The growth curve measured is analyzed by principal component analysis. Three carbon sources are considered comprehensively. The identification method is scientific and the principle is clear. Compared with the existing ribosome typing technology, the operation process of the present invention is strain purification, synchronous growth curve determination, analysis, simple operation, low cost, and fast establishment. A reliable method for distinguishing Lactobacillus rhamnosus at strain level.
【技术实现步骤摘要】
一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法
本专利技术属于微生物发酵及食品加工领域,涉及一种益生菌发酵食品中的应用方法,特别是涉及一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法。
技术介绍
2001年,FAO/WHO联合将益生菌定义为“摄入足够数量后,对宿主健康提供益处的活的微生物”。被广泛应用的益生菌有乳杆菌、肠球菌和双歧杆菌等。鼠李糖乳杆菌有较高的细胞黏附能力,可以增强免疫防御、缓解急性腹泻、降低血脂、预防龋齿和小儿湿疹、减少呼吸道感染以及改善克罗恩病症状等,是研究和应用最为广泛的乳杆菌。而益生菌赋予的健康益处和发酵性能具有菌株特异性,所以在株的水平上鉴定区分鼠李糖乳杆菌十分重要。现有的菌株区分手段包括核糖体分型、脉冲场凝胶电泳、多位点序列分型和随机扩增多态性DNA技术等基于DNA特征的分类方法,操作复杂,需要特殊设备,且耗时较长。生长能力是菌株基因特征和表达调控的具体表现,因而测定不同菌株在不同碳源中的生长能力,能够完成对菌株的区分。主成分分析作为一种常用的多元统计分析方法,可以实现对研究对象的简化与综合评价,还表示观测值和变量的相似性。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有核糖体分型技术的大体操作流程为:菌株纯化-DNA提取-酶切-电泳-SouthernBlot-显示,操作极为繁琐、需要特定仪器和一定技术支持等不足,提出一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法,利用生长曲线对本实验室保藏的12株鼠李糖乳杆菌进行区分。严格限定菌株传代时间(24小时),对12株菌进行3次传代,使菌株的生长状态稳定,利用自动生长曲线分析仪在600nm波长处测定12株菌在不同碳源条件下(葡萄糖、蔗糖和乳糖)的吸光度 ...
【技术保护点】
1.一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法,其特征在于,所述鉴定方法如下:(1)鼠李糖乳杆菌培养利用生长曲线对12株鼠李糖乳杆菌进行区分,无菌条件下,将12株菌的菌粉接种于MRS肉汤培养基,37℃培养24小时,将复苏的菌液在MRS固体培养基上划线纯化;(2)鼠李糖乳杆菌形态观察将纯化的菌落转接至MRS培养基,37℃培养24小时,收集1mL菌液,6000g离心5分钟,用纯净水重悬菌体;吸取10μL至载玻片,固定制片,染色,在光学显微镜100倍油镜下观察菌体形态;(3)鼠李糖乳杆菌生长曲线测定严格限定菌株传代时间,对12株菌进行3次传代,使菌株的生长状态稳定,将活化的菌液按3%的接种量接种到不同碳源的MRS肉汤培养基中,混匀后用移液枪精确吸取300μL至蜂窝培养板,每株菌做三个平行样,然后放入微生物自动生长曲线分析仪,参数设置为37℃培养48h,每隔15min读取一次数据,重复试验5次;(4)鼠李糖乳杆菌生长曲线比较选取所有测定的时间点及其对应的OD600nm值,利用SIMCA 14.1软件进行分类主成分分析,考察不同菌株之间的生长情况的差异,采用分类PCA的方法对各个菌株所有时间点的OD600nm ...
【技术特征摘要】
1.一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法,其特征在于,所述鉴定方法如下:(1)鼠李糖乳杆菌培养利用生长曲线对12株鼠李糖乳杆菌进行区分,无菌条件下,将12株菌的菌粉接种于MRS肉汤培养基,37℃培养24小时,将复苏的菌液在MRS固体培养基上划线纯化;(2)鼠李糖乳杆菌形态观察将纯化的菌落转接至MRS培养基,37℃培养24小时,收集1mL菌液,6000g离心5分钟,用纯净水重悬菌体;吸取10μL至载玻片,固定制片,染色,在光学显微镜100倍油镜下观察菌体形态;(3)鼠李糖乳杆菌生长曲线测定严格限定菌株传代时间,对12株菌进行3次传代,使菌株的生长状态稳定,将活化的菌液按3%的接种量接种到不同碳源的MRS肉汤培养基中,混匀后用移液枪精确吸取300μL至蜂窝培养板,每株菌做三个平行样,然后放入微生物自动生长曲线分析仪,参数设置为37℃培养48h,每隔15min读取一次数据,重复试验5次;(4)鼠李糖乳杆菌生长曲线比较选取所有测定的时间点及其对应的OD600nm值,利用SIMCA14.1软件进行分类主成分分析,考察不同菌株之间的生长情况的差异,采用分类PCA的方法对各个菌株所有时间点的OD600nm值进行处理,将每一株鼠李糖乳杆菌分为一类,共12...
【专利技术属性】
技术研发人员:顾瑞霞,张玉律,张臣臣,黄玉军,陈霞,陈大卫,印伯星,管玉新,张兆俊,
申请(专利权)人:扬州大学,丹阳市康力乳制品有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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