一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法技术

本发明专利技术提供一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法，其包括：制样步骤，利用无水乙醇和塑化剂的标准品，经过过滤，制备塑化剂的标准品溶液，利用无水乙醇提取透明质酸中的塑化剂，进行过滤、浓缩，制作供试品溶液，无水乙醇经过滤作为空白溶液；和检测步骤，使用高效液相色谱检测所得到的供试品溶液、标准品溶液和空白溶液，使用外标法确定塑化剂的残留量。本发明专利技术的方法简便易行，不需使用质谱，降低了检测成本，准确度高，检测限不高于0.06mg/kg。

A method for determination of phthalate plasticizer residues in hyaluronic acid

The invention provides a detection method for phthalate ester plasticizer residue in hyaluronic acid, which includes: sample preparation steps, using anhydrous ethanol and standard products of plasticizer, filtering, preparing standard solution of plasticizer, extracting plasticizer in hyaluronic acid by anhydrous ethanol, filtering and concentrating, making sample solution, and filtering anhydrous ethanol as blank solution. Solution, standard solution and blank solution obtained by high performance liquid chromatography were used to determine the residue of plasticizer by external standard method. The method of the invention is simple and feasible, does not need mass spectrometry, reduces the detection cost, has high accuracy, and the detection limit is not higher than 0.06mg/kg.

【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法
本专利技术涉及塑化剂的检测领域，具体涉及一种检测透明质酸中的邻苯二甲酸酯塑化剂残留的方法。
技术介绍
透明质酸(Hyaluronicacid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。透明质酸作为天然的保湿因子，早已被广泛应用到化妆品、医药等领域。近几年来，随着人们健康消费观念的形成，如何吃出健康与美丽成为人们关注的焦点，透明质酸在食品中的应用也越来越广泛，比如作为关节营养的膳食补充产品，以及作为补充水分、改善皮肤弹性的日常美容保健食品：透明质酸饮料、口服液、美容胶囊、酸奶、果冻、口香糖、绿茶等。若不能准确检测出透明质酸生产过程中带入的塑化剂含量，导致透明质酸塑化剂含量超标、纯度降低，长期使用塑化剂超标的透明质酸化妆品，或长期食用塑化剂超标的透明质酸产品，都会对健康造成很大的危害。在应用透明质酸时为了良好地表现其特性以及对人体的安全性，需要保证其纯度和质量。由于透明质酸的生产原料以及生产过程中接触的容器、管线例如塑料软管等，不可避免会含有杂质。为了保证透明质酸中的杂质、特别是塑化剂的含量在规定范围以下，需要有效地检测塑化剂的方法。塑化剂(Plasticizer)是一种增加材料的柔软性或是材料液化的添加剂。其中最常见的塑化剂是邻苯二甲酸酯类物质(PhthalateEsters,PAEs)，是邻苯二甲酸的酯化衍生物。邻苯二甲酸酯塑化剂是具些许芳香气味或无气味的无色液体，中等黏度、高稳定性、低挥发性、成本低廉、低水溶解度，但易溶于多数有机溶剂中。邻苯二甲酸酯类在日常及工业上被广泛使用，以邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)为最大宗，占塑化剂产量的四分之三，其次是邻苯二甲酸二丁酯(DBP)。邻苯二甲酸酯类塑化剂被归类为疑似环境荷尔蒙，其生物毒性主要属雌激素与抗雄激素活性，会造成内分泌失调，阻害生物体生殖机能，包括生殖率降低、流产、天生缺陷、异常的精子数、睾丸损害，还会引发恶性肿瘤、造成畸形儿。目前，有关PAEs的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、液质联用法(HPLC-MS)和气质联用法(GC-MS)。例如在专利文献1中公开了一种食用油中邻苯二甲酸酯类塑化剂的检测方法，其中使用的是气相色谱-质谱联用检测。另外，在国家标准GB/T21911-2008“食品中邻苯二甲酸酯的测定”中，也公开了一种检测塑化剂残留的GC-MS法，其中，在试样处理中，对于不含油脂试样，是将5.0mL液体试样，加入正己烷2.0mL萃取后，取上层清液进行GC-MS分析，另外对于固体或半固体试样而言，是将5.00g试样加约50mL水进行检测。对于含油脂试样，是将油脂试样0.50g，用体积比为乙酸乙酯:环己烷10.0mL溶解处理后进行GC-MS分析。现有技术文献专利文献专利文献1:CN104698109A
技术实现思路
如果按照国家标准GB/T21911-2008中规定的不含油脂的固体样品配制方法，即称样量为5.0g，溶于50mL水，由于透明质酸属于大分子粘多糖类物质，将其直接溶解配置检测样品时将得到凝胶状物质，无法进行过滤和萃取。若调整称样量以得到粘度适当的溶液，则方法的检测限无法满足要求(由0.05mg/kg降至0.5mg/kg或更低)。因此，上述邻苯二甲酸酯类塑化剂的检测方法并不能有效地用于透明质酸中的塑化剂的检测。为了解决上述技术问题，本专利技术人根据透明质酸和邻苯二甲酸塑化剂的溶解特性，开发了一种适合检测透明质酸中塑化剂的方法。本专利技术专利采用的技术方案是：1.一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法，其包括：制样步骤，其中制样步骤包括：(1)利用无水乙醇和塑化剂的标准品，经过过滤，制备塑化剂的标准品溶液，(2)利用无水乙醇提取透明质酸中的塑化剂，进行过滤，制作供试品溶液，(3)无水乙醇经过滤作为空白溶液；和检测步骤，其中检测步骤包括：使用高效液相色谱检测所得到的供试品溶液、标准品溶液和空白溶液，使用外标法确定塑化剂的残留量。2.根据项1所述的方法，其中，所述邻苯二甲酸酯塑化剂为邻苯二甲酸二丁酯(DBP)。3.根据项1或2所述的方法，其中，所述制样步骤中提取方法为对每10g样品用50～100mL的无水乙醇提取，即无水乙醇的体积/样品重量＝5～10/1的比例来利用无水乙醇提取样品。4.根据项1～3中任一项所述的方法，其中，所述检测步骤中，使用外标法对塑化剂的残留量进行检测。5.根据项1～4中任一项所述的方法，其中，所述检测步骤中，采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。6.根据项5所述的方法，其中，所述硅胶液相色谱柱为TeckmateC18或CapcellC18。7.根据项1～6中任一项所述的方法，其中，所述检测步骤中，采用的流动相为体积比为90:10～80:20的甲醇:水的溶液，优选为90:10(甲醇/水)。8.根据项1～7中任一项所述的方法，其中，所述检测步骤中，采用的色谱条件为：流速0.5～1.0ml/min，优选为0.8ml/min，柱温30～60℃，优选为35℃，检测波长220～235nm，优选为228nm，进样量20～100微升，优选为20微升。9、根据项1～8中任一项所述的方法，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的检测限小于等于0.06mg/kg。专利技术的效果本专利技术的透明质酸中塑化剂的检测方法简便易行，能够用于检测透明质酸中的邻苯二甲酸酯塑化剂、特别是邻苯二甲酸二丁酯(DBP)的残留。本专利技术的检测方法采用无水乙醇直接提取透明质酸中的塑化剂，避免了透明质酸的溶解造成溶液粘度过高，又可将透明质酸中的塑化剂充分提取，经浓缩后直接经HPLC检测，不需使用质谱，降低了检测成本，且该方法检测结果与国标一致，准确度较高，检测限也可达到0.06mg/kg。附图说明图1为实施例1中的供试品的色谱图。图2为实施例1中的空白色谱图。图3为实施例1中的对照品(DBP)色谱图。具体实施方式以下将对本专利技术做以详细说明。根据本专利技术的一个方面，提供一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂的检测方法，其包括：制样步骤，(1)利用无水乙醇和塑化剂的标准品，经过过滤，制备塑化剂的标准品溶液，(2)利用无水乙醇提取透明质酸中的塑化剂，进行过滤、浓缩，制作供试品溶液，(3)无水乙醇经过滤作为空白溶液；和检测步骤，使用高效液相色谱(HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC)检测所得到的供试品溶液、标准品溶液和空白溶液，使用外标法确定塑化剂的残留量。本专利技术人发现如果用国家标准GB/T21911-2008规定的塑化剂残留(气相色谱-质本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法，其包括：制样步骤，其中制样步骤包括：利用无水乙醇和塑化剂的标准品，经过过滤，制备塑化剂的标准品溶液，利用无水乙醇提取透明质酸中的塑化剂，进行过滤，制作供试品溶液，无水乙醇经过滤作为空白溶液；和检测步骤，其中检测步骤包括：使用高效液相色谱检测所得到的供试品溶液、标准品溶液和空白溶液，使用外标法确定塑化剂的残留量。

【技术特征摘要】
1.一种透明质酸中邻苯二甲酸酯塑化剂残留的检测方法，其包括：制样步骤，其中制样步骤包括：利用无水乙醇和塑化剂的标准品，经过过滤，制备塑化剂的标准品溶液，利用无水乙醇提取透明质酸中的塑化剂，进行过滤，制作供试品溶液，无水乙醇经过滤作为空白溶液；和检测步骤，其中检测步骤包括：使用高效液相色谱检测所得到的供试品溶液、标准品溶液和空白溶液，使用外标法确定塑化剂的残留量。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述邻苯二甲酸酯塑化剂为邻苯二甲酸二丁酯(DBP)。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述制样步骤中提取方法为对每10g样品用50～100mL的无水乙醇提取，即无水乙醇的体积/样品重量＝5～10/1的比例来利用无水乙醇提取样品。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述检测步骤中，使用外标法对塑化剂的残留量进行检...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雯雯，陈玉娟，李漫，毛华，李德杰，郭学平，
申请(专利权)人：华熙福瑞达生物医药有限公司，山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37