一种紫苏子标准汤剂的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱技术

本发明专利技术公开了一种紫苏子标准汤剂的检测方法，它是采用高效液相色谱法建立的，包括如下步骤：(1)制备紫苏子供试品溶液；(2)制备紫苏子对照药材溶液和参照物溶液；(3)取待测供试品溶液，采用高效液相色谱法检测，建立对照指纹图谱。本发明专利技术建立的紫苏子标准汤剂特征图谱中共有11个特征峰，各特征峰与S峰的相对保留时间规定值为：0.340(峰1)、0.381(峰2)、0.457(峰3)、0.543(峰4)、0.684(峰5)、0.715(峰6)、0.936(峰7)、1.000(峰8，S)、1.381(峰9)、1.520(峰10)、1.829(峰11)。本方法操作简单，快速，重复性好，可用于紫苏子标准汤剂指纹图谱的建立。

A Method for Establishing Fingerprint of Zisuzi Standard Decoction and Its Standard Fingerprint

The invention discloses a detection method for standard perilla seed decoction, which is established by high performance liquid chromatography, and comprises the following steps: (1) preparing perilla seed sample solution; (2) preparing perilla seed reference material solution and reference material solution; (3) taking the sample solution to be tested, using high performance liquid chromatography to detect and establish the reference fingerprint. There are 11 characteristic peaks in the characteristic Atlas of Zisuzi standard decoction. The relative retention time of each characteristic peak and S peak is 0.340 (peak 1), 0.381 (peak 2), 0.457 (peak 3), 0.543 (peak 4), 0.684 (peak 5), 0.715 (peak 6), 0.936 (peak 7), 1.000 (peak 8, S), 1.381 (peak 9), 1.520 (peak 10), 1.829 (peak 11). The method is simple, rapid and reproducible. It can be used to establish the fingerprint of Zisuzi standard decoction.

【技术实现步骤摘要】
一种紫苏子标准汤剂的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱
本专利技术属于中药分析
，具体涉及一种紫苏子标准汤剂的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱。
技术介绍
紫苏子为唇形科植物紫苏Perillafrutescens(L.)Britt.的干燥成熟果实，收载于《中华人民共和国药典》2015版一部，具有降气化痰、止咳平喘、润肠通便的功效。现代药理学研究表明，紫苏子主要含有脂肪油、生物碱类、糖类、黄酮类等成分，具有降血脂、止咳平喘、抗过敏、抗衰老、抗氧化等作用。紫苏子中黄酮类、酚酸类在抗菌方面发挥着重要作用，为其药物体系基本组成成分。在质量控制方面，谷丽华等在定性定量研究紫苏子中迷迭香酸基础上，对其黄酮类成分木犀草素、芹菜素进行了薄层定性分析；此外，有文献报道对紫苏子中脂肪酸类成分如α-亚麻酸、亚油酸或三萜类成分如熊果酸、齐墩果酸的含量进行测定；《中华人民共和国药典》2015版一部仅收载了紫苏子对照药材的鉴别和迷迭香酸的含量测定。由于中药的成分复杂,有效成分又多随产地、来源、采收季节等情况变化而变化,因此,采用指纹图谱技术全面反映药材的整体特征,并进一步与其活性相关联,对于完善目前的质量控制方法,保证临床用药的安全有效是十分必要的。唐雪阳等运用所建立的HPLC-PDA法表征紫苏子药物体系特征图谱质量，基于特征图谱中特征峰的数量及所属化学类型对15批紫苏子饮片进行质的表征，基于特征图谱中特征指标性成分木犀草素、芹菜素和迷迭香酸的含量及黄酮类(以木犀草素表征)、酚酸类(以迷迭香酸表征)的含量对15批紫苏子饮片进行量的表征，并基于基准饮片将15批紫苏子饮片质与量的表征结果分别进行关联性分析，有效精准地评价紫苏子饮片质量。根据2016年国家药典委员会发布的《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求(征求意见稿)》，中药标准汤剂系遵循中医药理论，采用合格饮片按照临床汤剂煎煮方法规范化煎煮，固液分离，经适当浓缩制得或经适宜方法干燥制得，作为衡量中药配方颗粒是否与临床汤剂基本一致的标准参照物。因此本专利技术在前人研究基础上，建立了紫苏子标准汤剂特征图谱及其含量测定方法。采用紫苏子特征图谱确定了迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、木犀草苷、咖啡酸等11个特征峰，其中指认出5个峰。
技术实现思路
本专利技术提供了一种紫苏子标准汤剂的指纹图谱建立方法及其标准指纹图谱。本专利技术提供了一种紫苏子标准汤剂的检测方法，它是采用高效液相色谱法进建立的，其操作步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取待检样品，加甲醇溶液超声提取，过滤，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备：参照物溶液的制备：取迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、咖啡酸、木犀草苷对照品，加甲醇溶解；对照药材溶液的制备：取紫苏子对照药材，加甲醇溶液超声提取，滤过，取续滤液，即得。(3)分别吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.1％甲酸为流动相A，以乙腈为流动相B梯度洗脱；流速为0.8-1.2mL/min；柱温：20℃～40℃；检测波长：284nm；梯度洗脱程序如下：进一步的，步骤(1)所述的甲醇溶液浓度为80％；所述的超声提取功率为600W，提取频率为40kHz，提取时间为20min。进一步的，步骤(2)所述的迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、咖啡酸、木犀草苷的浓度为每1ml分别含80μg、100μg、100μg、60μg、60μg的溶液。进一步的，步骤(2)所述的对照药材溶液制备方法中甲醇溶液浓度为80％；药材与提取溶剂比例为1:25；所述的超声提取功率为600W，提取频率为40kHz，提取时间为30min。进一步的，步骤(3)所述的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm；柱温为30℃；流速为1.0ml/min。本专利技术还提供了一种紫苏子标准汤剂的鉴别方法，它包括如下步骤：(1)取紫苏子标准汤剂提取物制备供试品溶液；(2)按前述紫苏子标准汤剂的指纹图谱建立方法进行高效液相色谱法检测；(3)分析检测结果。本专利技术的一种紫苏子标准汤剂的标准指纹图谱中，紫苏子标准汤剂特征图谱中共有11个特征峰，各特征峰与S峰的相对保留时间规定值为：0.340(峰1)、0.381(峰2)、0.457(峰3)、0.543(峰4)、0.684(峰5)、0.715(峰6)、0.936(峰7)、1.000(峰8，S)、1.381(峰9)、1.520(峰10)、1.829(峰11)。本专利技术建立了紫苏子标准汤剂特征图谱及其含量测定方法。采用紫苏子特征图谱确定了迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、木犀草苷、咖啡酸等11个特征峰，并指认出了其中的5个特征峰。可用于衡量紫苏子配方颗粒是否与临床汤剂基本一致。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其他多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1为咖啡酸紫外吸收光谱图图2为木犀草苷紫外吸收光谱图图3为迷迭香酸紫外吸收光谱图图4为木犀草素紫外吸收光谱图图5为芹菜素紫外吸收光谱图图6为紫苏子标准汤剂全波段扫描3D图谱图7为紫苏子标准汤剂各波长比较图图8为不同柱温考察下的紫苏子汤剂色谱图图9为不同流速考察下的紫苏子汤剂色谱图图10为延迟性实验考察下的紫苏子汤剂色谱图图11为不同提取溶剂考察下的紫苏子汤剂冻干粉色谱图图12为不同提取方法考察下的紫苏子汤剂冻干粉色谱图图13为不同提取时间考察下的紫苏子汤剂冻干粉色谱图图14为不同溶媒用量考察下的紫苏子汤剂冻干粉色谱图图15为紫苏子标准汤剂色谱峰指认的特征图谱图16为不同仪器考察下的紫苏子汤剂冻干粉色谱图图17为紫苏子标准汤剂色谱柱耐用性考察色谱图图18为紫苏子标准汤剂特征图谱(各图谱代表批次为S1：ZSZBT180701；S2：ZSZBT180702；S3：ZSZBT180703；S4：ZSZBT180704；S5：ZSZBT180705；S6：ZSZBT180706；S7：ZSZBT180707；S8：ZSZBT180708；S9：ZSZBT180709；S10：ZSZBT180710；S11：ZSZBT180711；S12：ZSZBT180712；S13：ZSZBT180713；S14：ZSZBT180714；S15：ZSZBT180715；S16：ZSZBT180716；S17：ZSZBT180717)图19为紫苏子标准汤剂对照图谱峰(峰3：咖啡酸；峰5：木犀草苷；峰8(S)：迷迭香酸；峰9：木犀草素；峰10：芹菜素)具体实施方式实施例1紫苏子标准汤剂色谱条件的考察1、色谱条件与系统适用性试验(1)拟定的色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm，内径为4.6mm，粒度为5μm)；以0.1％甲酸为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为1.0mL/min；柱温为30℃；检测波长为284nm。理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于3000。(2)参照物溶液的制备：取迷迭香酸对照品适量，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种紫苏子标准汤剂的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法建立的，其操作步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取待检样品，加甲醇溶液超声提取，过滤，取续滤液，即得；(2)参照物溶液的制备：取迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、咖啡酸、木犀草苷对照品，加甲醇溶解；对照药材溶液的制备：取紫苏子对照药材，加甲醇溶液超声提取，滤过，取续滤液，即得。(3)分别吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.1％甲酸为流动相A，以乙腈为流动相B梯度洗脱；流速为0.8‑1.2m/min；柱温：25℃～35℃；检测波长：284nm；梯度洗脱程序如下：

【技术特征摘要】
1.一种紫苏子标准汤剂的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法建立的，其操作步骤如下：(1)供试品溶液的制备：取待检样品，加甲醇溶液超声提取，过滤，取续滤液，即得；(2)参照物溶液的制备：取迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、咖啡酸、木犀草苷对照品，加甲醇溶解；对照药材溶液的制备：取紫苏子对照药材，加甲醇溶液超声提取，滤过，取续滤液，即得。(3)分别吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以0.1％甲酸为流动相A，以乙腈为流动相B梯度洗脱；流速为0.8-1.2m/min；柱温：25℃～35℃；检测波长：284nm；梯度洗脱程序如下：2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(1)所述的甲醇溶液浓度为80％；所述的超声提取功率为600W，提取频率为40kHz，提取时间为20min。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述的迷迭香酸、芹菜素、木犀草素、咖啡酸、木犀草苷的浓度为每1ml分别含80μg、100μg、100μg、60μg、60μg的溶液。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤(2)所述的对照药材溶液制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：周厚成，胡昌江，李文兵，李燕，刘聪，
申请(专利权)人：四川新绿色药业科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51